山楂有机酸组分抗缺血再灌注心肌细胞凋亡的机制研究

发布时间：2020-07-09 10:45

【摘要】：目的:研究山楂有机酸对心肌缺血再灌注损伤的保护作用是否通过抑制HIF-1α,抑制凋亡及调节凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达而实现的,并探讨该作用是否通过激活PI3K/Akt、MAPK传导通路而起作用。方法:体外实验:1.将正常生长的H9c2细胞随机分为6组:Control组、H_2O_2组、H_2O_2+NAC组和H_2O_2+山楂有机酸(高、中、低浓度)组。心肌细胞在H_2O_2 100μmol/L刺激2 h后,采用MTS法检测细胞增殖吸光值,利用标准试剂盒测定细胞内Caspase 3和Caspase 9的酶活性,以及流式细胞术测定H9c2细胞的凋亡率,Western blot检测H9c2细胞中p-NF-κB/NF-κB蛋白水平的表达。2.实验分组:Control组、H_2O_2组、山楂有机酸预给药组(给药组)、ERK激动剂组、JNK抑制剂组、PI3K抑制剂组。H9c2细胞在抑制剂或激动剂处理之后,用山楂有机酸预处理2 h后,加入H_2O_2 100μmol/L作用2 h后,采用MTS法检测细胞增殖吸光值,利用试剂盒测定细胞内Caspase 3的酶活性。体内实验:将正常饲养的SD大鼠随机分成4组:Sham组、I/R组、山楂有机酸给药+I/R组、山楂有机酸预给药+Sham组。Western blot检测心肌组织中HIF-1α、Bcl-2及Bax蛋白水平的表达。结果:体外实验:1.山楂有机酸对H_2O_2诱导的H9c2心肌细胞损伤的保护作用与Control组相比,给予H_2O_2刺激2 h后的心肌细胞数量显著减少;与H_2O_2组相比较,H_2O_2+山楂有机酸组使H9c2心肌细胞数量增加,并在6.25μg/ml、25μg/ml时效果及重复性最好,H_2O_2+NAC组也具有显著效果。2.山楂有机酸对H_2O_2诱导H9c2细胞凋亡及凋亡相关蛋白的影响与Control组相比,H_2O_2组细胞数量凋亡增加,Caspase 3及Caspase 9酶活性增强,p-NF-κB的蛋白表达增强。与H_2O_2组相比较,山楂有机酸组凋亡细胞数量减少,Caspase 3及Caspase 9酶活性减少,p-NF-κB的蛋白表达降低。3.山楂有机酸对H_2O_2诱导H9c2细胞PI3K/Akt、MAPK、JNK信号通路的影响与Control组相比,H_2O_2组细胞数量减少,Caspase 3酶活性显著升高,与H_2O_2组相比较,山楂有机酸组细胞数量增加,Caspase 3酶活性显著降低,与山楂有机酸预给药组比较,ERK激动剂、JNK抑制剂、PI3K抑制剂细胞数量明显减少,Caspase 3酶活性显著升高。体内实验:1.山楂有机酸对心肌缺血再灌注损伤的作用与Sham组比较,模型组大鼠心肌组织HIF-1α的蛋白表达明显增加;Bcl-2的蛋白表达显著减少;Bax蛋白表达显著升高;给药组与模型组相比,HIF-1α的蛋白表达明显减少;Bcl-2的蛋白表达显著增加;Bax的蛋白表达显著下降。结论:山楂有机酸抗心肌缺血再灌注损伤作用可能与调控缺氧诱导因子HIF-1α、抑制凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax和激活PI3K/Akt、MAPK信号通路有关。
【学位授予单位】：江西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

心肌细胞,存活率

图 1：不同浓度 H2O2对 H9c2 心肌细胞存活率的影Effect of different concentrations of H2O2on the survivcardiomyocytes注：与 Control 组比较***P<0.001。

山楂,有机酸

图 2：山楂有机酸对 H2O2诱导的 H9c2 细胞损伤的保护作用 2: Protective effect of Organic Acids of Crataegus pinnatifida oinduced H9c2 cell injury与 Control 组比较 *** P<0.001；与模型组比较##P<0.01，### P<0.0

细胞损伤,山楂,有机酸,凋亡

山楂有机酸对H2O2诱导的H9c2细胞损伤凋亡的影响

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