大黄附子汤对重症急性胰腺炎大鼠肠道菌群及肠黏膜机械屏障的影响及其意义

发布时间：2020-07-10 05:07

【摘要】：目的:通过应用大黄附子汤对重症急性胰腺炎大鼠进行干预,观察其肠道菌群的变化,测定肠黏膜机械屏障紧密连接蛋白Claudin-1、occludin、ZO-1的表达情况,探讨大黄附子汤对重症急性胰腺炎大鼠肠道菌群及肠黏膜机械屏障的作用及意义。方法:SPF级雄性大鼠24只,体重230-270g,随机分为4组:假手术组(SH,n=6),大黄附子汤-假手术组(SH-DHFZT,n=6),重症急性胰腺炎组(SAP,n=6),大黄附子汤治疗组(DHFZT,n=6),采用异氟烷气体麻醉方式麻醉;假手术组、大黄附子汤-假手术组大鼠开腹后,翻动胰腺数次后关腹;SAP组、治疗组经胰胆管缓慢逆行注入4%牛磺胆酸钠(1ml/kg)诱导SAP模型,造模成功后假手术组、SAP组用2ml生理盐水(约38℃)于术后12、24、36小时保留灌肠;大黄附子汤-假手术组与治疗组用2ml大黄附子汤(约38℃)于术后12、24、36小时保留灌肠干预治疗。各组大鼠在48h处死后开腹,经腹主动脉抽血,使用生化分析仪检测血浆内毒素、血淀粉酶、血钙,ELISA法炎症因子IL-1β、肠黏膜二胺氧化酶(DAO)水平。光学显微镜下观察肺、胰腺、回肠组织HE染色形态学变化。应用Smith评分法对实验各组肺组织进行病理评分,评价肺损伤程度,以明确SAP模型是否建立成功。应用改良Schmidt评分标准对胰腺组织进行病理评分,Chiu肠黏膜损伤评分标准对回肠组织进行评分。应用免疫组化及免疫荧光法检测肠黏膜ZO-1、occludin、claudin-1表达与分布,Westernblot对ZO-1、occludin以及claudin-1进行半定量分析,采用16S rRNA基因测序法分析回肠段肠黏膜菌群。结果:1.大黄附子汤-假手术组血清内毒素、淀粉酶、DAO及IL-1β水平较假手术组无明显差异;SAP组血清内毒素、淀粉酶、DAO及IL-1β水平均较假手术组明显升高,血钙含量较假手术组降低;治疗组血清内毒素、淀粉酶、DAO及IL-1β水平则较SAP组减少,血钙含量较SAP组升高,差异有统计学意义(P0.05)。2.假手术组、大黄附子汤-假手术组胰腺、肺及回肠组织结构均无明显损伤,大黄附子汤-假手术组肠黏膜ZO-1、occludin、claudin-1表达与假手术组相比无明显变化;SAP组大鼠48h后胰腺、肺及回肠组织结构均发生不同程度破坏,ZO-1、occludin、claudin-1表达减弱。经大黄附子汤治疗后,胰腺、肺及回肠组织结构破坏有修复,肠上皮紧密连接蛋白ZO-1、occludin、claudin-1表达水平较SAP组明显增加。3.大黄附子汤-假手术组菌群样本因受到污染未能测出可用结果,其余各组回肠组织菌群分析结果显示,与假手术组相比,SAP组菌群丰富度和多样性在整体水平上无显著变化。而大黄附子汤治疗组显著增加了菌群丰度(P0.05,除门水平外)和菌群多样性(P0.05);假手术组、SAP组和大黄附子汤组治疗三组菌群结构存在显著差异。根据菌群组成分析结果,厚壁菌门(Firmicutes),拟杆菌门(Bacteroidetes)和变形菌门(Proteobacteria)是相关菌群中的三个相对优势菌门,其中以厚壁菌门(Firmicutes)为最优势。在门水平上,SAP组优势菌门无显著变化,大黄附子汤组治疗组变形菌门(Proteobacteria)显著增加。在属水平,假手术组中乳杆菌属(Lactobacillus)为优势菌属,在发生SAP后其相对丰度发生明显下降,优势地位为相对丰富度明显增加消化链球菌(unclassified_f__Peptostreptococcaceae)所取代。治疗组乳杆菌属(Lactobacillus)较SAP组明显增加而重新成为优势菌属。结论:重症急性胰腺炎发生后,肠道菌群发生了改变,与此同时肠道结构被破坏,肠黏膜机械屏障的紧密连接表达水平降低,肠上皮通透性增加,内毒素等物质入血,血中炎症因子水平升高出现“类瀑布”式效应,加重病情。应用大黄附子汤治疗后,血清内毒素水平及IL-1β被降低,有效的抑制胰酶分泌及炎症因子的瀑布式激活。同时,大黄附子汤促进乳杆菌属等“益生菌”的增多,可能与促进肠上皮紧密连接蛋白表达有关,进而改善肠黏膜机械屏障,达到缓解病情的效果。
【学位授予单位】：遵义医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

大鼠血清内毒素含量变化

大鼠血钙含量变化

图 4 大鼠胰腺 HE 染色（200 ）组织病理学观察观察：假手术组、大黄附子汤-假手术组大鼠肺组织呈淡红色，肉；SAP 组大鼠肺组织呈红褐色，水肿较严重，大量淤血，肺叶表面

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