金钗石斛总生物碱对SAMP8小鼠脑衰老的保护作用及机制研究

发布时间：2020-07-10 00:21

【摘要】：目的:观察金钗石斛总生物碱(Dendrobium nobile Lindl alkaloid,DNLA)对SAMP8小鼠脑衰老的影响,并探讨其作用机制。方法:6月龄SAMP8小鼠随机分为4组:SAMP8模型组、DNLA低、高剂量组、阳性药组,同月龄SAMR1小鼠作为空白对照。药物均用1%的吐温80配制,DNLA低、高剂量组分别给予DNLA 20、40 mg/kg,阳性药组给予二甲双胍80mg/kg,每日一次连续灌胃6个月,SAMR1对照组和SAMP8模型组给予同等体积1%的吐温80。给药结束前,采用Morris水迷宫实验,Y迷宫实验,新物体识别实验,转棒实验,旷场实验等方法检测小鼠学习记忆及运动功能;测定小鼠体重,称取小鼠脑组织湿重,用于测定脑组织湿重比;衰老特异性β-半乳糖苷酶染色检测脑组织衰老情况;HE和尼氏染色观察海马CA1区和皮质神经元损伤情况;Western blot测定小鼠海马和皮质中衰老蛋白Klotho的表达,Aβ生成及降解途径中Aβ、APP、BACE1、PS1、IDE、NEP蛋白水平,自噬相关蛋白LC3B、Beclin1、P62的表达水平。结果:SAMP8较SAMR1小鼠逃避潜伏期明显延长,原平台象限停留时间缩短,Y迷宫自发探索交替行为正确率降低,探索新物体的时间占总时间的百分比有所下降但无差异,转棒潜伏期缩短,中央区域和外周区域运动的总路程明显缩短;脑组织湿重比降低;β-半乳糖苷酶染色的脑组织衰老细胞数量增多;海马CA1区和皮质神经元损伤,细胞排列紊乱,正常神经元细胞数量减少;海马和皮质Aβ、APP、BACE1、PS1、P62蛋白表达升高,LC3B、Beclin1、IDE、NEP、Klotho蛋白表达降低。与SAMP8模型组相比,DNLA给药及阳性给药组逃避潜伏期缩短,原平台象限停留时间延长,Y迷宫自发探索交替行为正确率升高,探索新物体的时间占总时间的百分比无明显改变,转棒潜伏期延长,中央区域和外周区域运动的总路程无显著改变;脑组织湿重比增加;β-半乳糖苷酶染色的脑组织衰老细胞数量减少;海马CA1区和皮质神经元正常,细胞排列整齐,正常神经元细胞数量增加;海马和皮质Aβ蛋白水平降低,Klotho衰老蛋白水平升高,生成Aβ代谢途径中的APP、BACE1、PS1蛋白水平降低,Aβ降解酶IDE、NEP蛋白水平升高,而自噬相关蛋白P62蛋白水平降低,LC3B、Beclin1蛋白水平升高。结论:本实验条件下,金钗石斛总生物碱对SAMP8小鼠有延缓衰老的作用,其作用机制可能与上调Klotho蛋白,减少Aβ聚集、增强自噬活性有关。
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5
【图文】：

学习记忆功能,小鼠,象限,Morris水迷宫

遵义医学院硕士学位论文吕凌丽2 结果2.1 DNLA 对 SAMP8 小鼠学习记忆的影响2.1.1 Morris 水迷宫实验Morris 水迷宫检测 SAMP8 小鼠学习记忆功能。实验结果显示（如图 1），与SAMR1 相比，定向航行中 SAMP8 小鼠的逃避潜伏期有所延长(P<0.05)，空间探索中原平台象限停留时间缩短(P<0.05)，DNLA 及二甲双胍给药后，SAMP8小鼠逃避潜伏期缩短，原平台象限停留时间延长(P<0.05)。提示 DNLA 能改善SAMP8 小鼠的学习记忆功能。

学习记忆障碍,物体识别,迷宫,小鼠

图 2DNLA 对 SAMP8 小鼠学习记忆障碍的影响.A.Y 迷宫自发探索行为，B.新物体识别新物体探索时间占总时间的百分比，（ x ±SD，n=6-10），与 SAMR1相比，*P㩳0.05；与 SAMP8相比，#P㩳0.05。Fig. 2 Effect of DNLA on learning and memory deficits in SAMP8 mice. A. The correct rate ofY Maze test spontaneous alternation. B. The New object time percentage of total time in objectrecognition test (ORT). ( ±SD, n=6-10),*P<0.05 vs SAMR1,#P<0.05 vs SAMP82.2 DNLA 对 SAMP8 小鼠运动功能的影响2.2.1 转棒实验和旷场实验转棒实验是评价小鼠运动平衡能力的自动化方法。如图 3A 所示，SAMP8组与 SAMR1 组相比，潜伏期即从旋转杆上脱落的时间明显缩短(P<0.05)，DNLA及二甲双胍给药后潜伏期显著延长(P<0.05)，结果表明，DNLA可以减轻 SAMP8小鼠的运动功能障碍。旷场实验主要评价以情感行为为主的运动能力，小鼠自主活动的总路径能体现小鼠运动情况。如图 3B 所示，中央区域和外周区域运动的总路程 SAMP8 组

中央区域,湿重,外周,路程

图 3：DNLA 对 SAMP8 小鼠运动功能的影响.A.转棒潜伏期，B.旷场中央区域和外周区域总路程，（ x ±SD，n=6-10）与 SAMR1相比，*P㩳0.05；与 SAMP8 相比，#P㩳0.05。Fig. 3 Effect of DNLA on motor disorder in SAMP8 mice. A. The escape latency of the rotatingrod test. B. The total distance in central and peripheral areas of Open Field test. ( ±SD, n=6-10)*P<0.05 vs SAMR1,#P<0.05 vs SAMP8.2.3 DNLA 对 SAMP8 小鼠脑组织湿重比的影响衰老的脑组织萎缩，如图 4 所示脑组织湿重比结果显示，SAMP8 小鼠脑组织湿重比较 SAMR1 小鼠明显降低(P<0.05)，DNLA40 mg/kg组和二甲双胍给药组较 SAMP8 组脑组织湿重比显著升高(P<0.05)，提示 DNLA能改善 SAMP8小鼠的脑萎缩。

【参考文献】