牛蒡子苷元通过AMPK信号通路调节脂肪代谢的作用研究

发布时间：2020-07-11 13:29

【摘要】：目的:通过高脂饮食(high-fat diet,HFD)诱导的肥胖大鼠模型和3T3-L1小鼠前脂肪细胞模型,研究牛蒡子苷元(Arctigenin)对降低体重、下调血脂的作用,以及对脂肪细胞增殖分化、脂肪合成分解代谢的影响;并进一步探讨牛蒡子苷元调控脂肪代谢的作用机制。方法:(1)复制HFD诱导的肥胖大鼠模型,随机分为模型对照组、牛蒡子苷元低剂量组、牛蒡子苷元高剂量组和阳性药物(阿托伐他汀)组,另以普通饲料喂养的大鼠为正常对照组,每组8只。各组药物干预后,记录体重和脏器重量变化,测定血脂水平,切片观察肝脏细胞和脂肪细胞病理改变。(2)采用不同浓度牛蒡子苷元(12.5-100 μmol/L)作用对数生长期的3T3-L1前脂肪细胞48 h,CCK8法检测细胞增殖情况。诱导3T3-L1前脂肪细胞成脂分化,在分化期间加入牛蒡子苷元(25-100μmol/L)处理细胞8天,通过油红O染色检测脂肪细胞分化程度和脂质合成,实时荧光定量PCR法检测分化调控转录因子及其靶基因的表达。(3)3T3-L1前脂肪细胞被诱导分化为成熟脂肪细胞后,加入不同浓度牛蒡子苷元作用48 h,测定细胞总脂质、甘油三酯和甘油含量,实时荧光定量PCR法和Western印迹法检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路蛋白表达水平及活化情况。结果:(1)动物实验中,与模型对照组相比,牛蒡子苷元高剂量治疗组体重减轻,肝指数及附睾脂肪重量降低,血清总胆固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)显著下调,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-L)明显升高,肝脏脂肪变性明显减轻。(2)牛蒡子苷元在12.5-100 μmol/L浓度范围对3T3-L1前脂肪细胞的增殖活性无显著性影响,但显著抑制细胞成脂分化。在25、50、100 μmol/L浓度下,3T3-L1前脂肪细胞的成脂分化率分别为对照组的78.31%、44.85%、17.58%。(3)牛蒡子苷元在25-100 μmol/L浓度范围内显著抑制成熟脂肪细胞总脂质和TG合成,抑制甘油释放。(4)在脂肪细胞分化过程中,牛蒡子苷元剂量依赖性明显下调脂肪细胞分化调控转录因子C/EBPα、PPARγ、SREBP-1c 以及其相应的靶基因 LPL、AP2、FAS、ACC、Adiponectin、LXR mRNA水平。(5)牛蒡子苷元显著上调3T3-L1成熟脂肪细胞AMPK磷酸化水平,提示AMPK信号通路被激活。信号通路下游与脂质生成相关的基因和蛋白(包括ACC、FAS、LPL、PPARγ和C/EBPα)以及与脂肪水解相关的基因(HSL)的表达水平下调。同时,AMPK的激活也导致ACC磷酸化水平提高,其下游与脂肪酸氧化相关的基因(CPT-1)mRNA水平上调。结论:牛蒡子苷元具有明显的抑制脂质生成、抑制脂肪分解、减重降脂的作用。牛蒡子苷元通过激活AMPK信号通路,抑制脂质生成和分解基因表达,上调脂肪酸氧化相关基因表达,起到调节脂肪代谢的作用。
【学位授予单位】：广州中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

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本文编号：2750465