二氢杨梅素对骨肉瘤MG-63细胞裸鼠成瘤及糖代谢的影响

发布时间：2020-07-11 14:52

【摘要】：【目的】观察二氢杨梅素(Dihydromyricetin,DMY)对人骨肉瘤裸鼠移植瘤生长和瓦博格效应效应的影响,并初步探讨其可能的机制。【方法】在裸鼠腹部下方皮下接种人骨肉瘤细胞株MG-63细胞,建立人骨肉瘤移植瘤的裸鼠模型。将已经成功移植人骨肉瘤的裸鼠随机分为移植瘤模型组、DMY(50、100和200 mg/kg/d)处理组,每组6只裸鼠,分别给予生理盐水、50、100和200 mg/kg/d DMY灌胃处理,连续30天。观察裸鼠的一般情况和移植瘤的生长情况。裸鼠处死后,将移植瘤取出,称量移植瘤的重量,测量移植瘤的体积,并计算肿瘤生长抑制率。移植瘤组织匀浆中的葡萄糖含量和乳酸含量及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性水平的检测采用比色法。人骨肉瘤移植瘤体中Ki67的表达水平采用免疫组化和Western blot检测。采用Western blot检测人骨肉瘤裸鼠移植瘤中缺氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、己糖激酶2(Hexokinase 2,HK2)、乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)、总Akt和p-Akt的表达。【结果】1.所有接种人骨肉瘤细胞系MG-63细胞的裸鼠,在接种的腹部下方均出现了圆形的隆起,在接种后10天左右在腹部可摸到肿瘤结节,结节大小约72.15±5.42 mm~3,移植瘤结节的大小随着时间的延长而不断地增加。移植瘤结节的边缘不整齐,形状多为不规则形,结节的质地较硬,但活动度尚可。人骨肉瘤细胞系MG-63细胞裸鼠移植瘤模型的成功率为100%。移植瘤模型组裸鼠出现了轻微的进食减少、出现精神萎靡、对刺激的反应有写迟钝和体重减轻等情况,但没有观察到明显的恶病质等情况。所有的裸鼠没有发现其他的明显异常的行为。DMY(100和200 mg/kg/d)组裸鼠腹部的移植瘤结节与移植瘤模型组比较明显减小,裸鼠食欲状态、反应能力和精神状态与移植瘤模型组比较均有明显改善。所有移植瘤组织经病理切片H-E染色证实均为骨肉瘤。2.DMY(100和200 mg/kg/d)组移植瘤的重量和体积与移植瘤模型组比较显著降低(P0.05)。与移植瘤模型组比较,DMY(50 mg/kg/d)组移植瘤的重量和体积均没有显著性差异(P0.05)。DMY(50、100和200 mg/kg/d)的肿瘤抑制率逐渐增加,肿瘤抑制率分别为2.59%、33.26%和59.61%。3.与移植瘤模型组比较,DMY(100和200 mg/kg/d)组人骨肉瘤裸鼠移植瘤中表达Ki67的阳性细胞百分率和Ki67的蛋白表达水平均显著性降低(均P0.05)。而与移植瘤模型组比较,DMY(50 mg/kg/d)组骨肉瘤裸鼠移植瘤中表达Ki67的阳性细胞百分率和Ki67的蛋白表达水平均没有显著性差异(均P0.05)。4.与移植瘤模型组比较,DMY(100和200 mg/kg/d)组人骨肉瘤裸鼠移植瘤中葡萄糖水平显著增加(P0.05),乳酸水平和LDH活性显著性降低(均P0.05)。而DMY(50 mg/kg/d)组骨肉瘤裸鼠移植瘤中葡萄糖水平、乳酸水平和LDH活性与移植瘤模型组比较均没有显著性差异(均P0.05)。5.Western blot结果显示,DMY(100和200 mg/kg/d)组人骨肉瘤裸鼠移植瘤中HIF-1α、HK2、LDHA和p-Akt蛋白的表达水平与移植瘤模型组比较均显著性下调(均P0.05);DMY(50、100和200 mg/kg/d)组人骨肉瘤裸鼠移植瘤中总Akt蛋白的表达水平与移植瘤模型组比较没有显著性差异(均P0.05)。DMY(50 mg/kg/d)组人骨肉瘤裸鼠移植瘤中HIF-1α、HK2、LDHA和p-Akt的蛋白表达水平与移植瘤模型组比较均没有显著性差异(均P0.05)。【结论】二氢杨梅素抑制了人骨肉瘤MG-63细胞裸鼠移植瘤的生长及Warburg效应,其机制可能涉及到PI3K/Akt信号通路。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5
【图文】：

移植瘤,骨肉瘤,裸鼠,病理改变

图 1 骨肉瘤移植瘤裸鼠的外观和病理改变。(A)：大体标本；(B)：H-E 染色（×20）3.2 DMY 对骨肉瘤裸鼠移植瘤重量的影响末次 DMY 处理结束后 3 天，通过脱颈椎的办法处死裸鼠，切开皮肤小心出移植瘤组织，称量移植瘤的重量，结果如图 2 所示：与移植瘤模型组比较MY（100 和 200 mg/kg/d）组移植瘤的重量显著性降低（P<0.05）。而 DMY（g/kg/d）组移植瘤的重量与移植瘤模型组比较虽有降低的趋势，但没有差P>0.05）。

裸鼠移植瘤,骨肉瘤,移植瘤

图 2 DMY 对骨肉瘤裸鼠移植瘤重量的影响。数据均以 x ± S 表示，n=6。*P㩳0.05，与模型组比较。.3 DMY 对骨肉瘤裸鼠移植瘤体积的影响在末次 DMY 处理结束后 3 天，通过脱颈椎的办法处死裸鼠，切开皮肤小取出移植瘤组织，称量其长短径，计算其体积，结果如图 3 所示：与移植瘤组比较，DMY（100 和 200 mg/kg/d）组移植瘤的体积显著性降低（均 P<0.05 DMY（50 mg/kg/d）组移植瘤的体积与移植瘤模型组比较虽有降低的趋势有差异没有统计学意义（P>0.05）。

裸鼠移植瘤,骨肉瘤,移植瘤,体积

图 2 DMY 对骨肉瘤裸鼠移植瘤重量的影响。均以 x ± S 表示，n=6。*P㩳0.05，与模型组比肉瘤裸鼠移植瘤体积的影响处理结束后 3 天，通过脱颈椎的办法处死裸，称量其长短径，计算其体积，结果如图 100 和 200 mg/kg/d）组移植瘤的体积显著性kg/d）组移植瘤的体积与移植瘤模型组比较学意义（P>0.05）。

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