长白山刺五加多糖开发的药理基础研究

发布时间：2020-07-14 03:49

【摘要】：中药刺五加为五加科(Araliaceae)五加属(Acanthopanax)植物刺五加(Acanthopanax senticosus(Rupr.Et Maxim.)Harms)的干燥根和根茎或茎。近年来,刺五加化学成分和药理作用的研究热点主要集中在皂苷类和黄酮类化合物上,且在心脑血管疾病的临床治疗中已得到了较为广泛的应用。刺五加多糖作为刺五加的重要活性成分之一,由于多糖类成分纯化过程十分繁琐,纯化工艺复杂,纯度不理想等因素限制了刺五加多糖在组分、构效关系以及作用机制等方面的确证。本试验通过对长白山刺五加多糖(ASPS)化学组分的分析,并对其抗炎作用、镇痛作用、药物性肝损伤保护作用、结核性胸膜炎辅助治疗作用、抗肿瘤作用、延缓衰老作用以及提高学习记忆能力作用的深入研究,同时对长白山刺五加多糖胶囊的制备工艺进行了探讨,以期为刺五加多糖的临床应用开发提供有利参考。试验结果如下:1.本试验通过对长白山刺五加多糖的提取和分离,并采用高效液相色谱法和气相色谱法对其化学成分进行分析。结果表明,经提取分离分析,刺五加苷E得率为93.1%;ASPS得率为96.7%,相对分子量为10KD。经高效液相色谱分析,ASPS具有均匀对称单一峰,表明其纯度、极性及均一性均较好。经气相色谱分析,其单糖组分为阿拉伯糖:木糖:葡萄糖:甘露糖,摩尔比为7.1:22.3:7.6:1.0。2.本试验以二甲苯致小鼠耳廓肿胀、角叉菜胶致小鼠足趾肿胀、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性提高以及棉球致小鼠肉芽肿为模型,对ASPS的抗炎作用进行了研究。试验结果表明,ASPS能够有效抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀,角叉菜胶致小鼠足趾肿胀,醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性提高以及棉球致小鼠肉芽肿。同时,对于不同抗炎模型,ASPS均能够有效改善小鼠免疫器官状况,对机体免疫细胞因子水平起到调节作用。3.本试验通过热刺激对痛阈值的影响和醋酸致扭体反应,对ASPS的镇痛作用进行了研究。试验结果表明,ASPS能够提高热刺激小鼠的痛阈值和镇痛率,降低醋酸致小鼠扭体反应的扭体次数,提高扭体反应抑制率。同时,对于不同镇痛模型,ASPS均能使得小鼠免疫器官状况得到明显改善,细胞因子水平得到有效调节。4.本试验以实验性结核小鼠为模型,对ASPS抗结核药物性肝损伤作用及其机制进行了研究。试验结果表明,ASPS对抗结核治疗的实验性结核小鼠表现出较好的保肝护肝效果,其机制可能是通过调节实验性结核小鼠血清细胞免疫因子水平和脾细胞T淋巴亚群免疫水平而提高实验性结核小鼠的免疫能力,进而实现其保肝护肝的作用。5.本试验以结核性胸膜炎大鼠为模型,对ASPS的治疗效果极其机制进行了研究。试验结果表明,ASPS能降低结核胸膜炎大鼠胸腔积液及胸膜厚度,并能够改善结核性胸膜炎大鼠胸腔积液白细胞计数及生化指标。另外,ASPS还能够改善和调节结核性胸膜炎大鼠的细胞免疫因子,这可能是其治疗结核性胸膜炎的作用机制之一。6.本试验以肉瘤S180、肝癌H22和宫颈癌U14小鼠实体瘤和腹水瘤为模型,对ASPS的抗肿瘤作用及其机制进行研究,并对其毒性进行考察。结果表明,ASPS对肉瘤S180、肝癌H22和宫颈癌U14荷瘤小鼠的实体瘤质量均具有较好的抑制作用,使得荷瘤小鼠的抑瘤率得到显著改善,同时还能够提高荷瘤小鼠的免疫器官指数,调节荷瘤小鼠的免疫细胞因子,从而提高机体免疫能力,增强其抗病能力。另外,ASPS还能够延长肉瘤S180、肝癌H22和宫颈癌U14腹水瘤小鼠的存活天数,积极改善其生命延长率。急性毒性试验结果表明,ASPS属实际无毒物级物质。7.本试验以D-半乳糖所致衰老小鼠为模型,对ASPS延缓衰老作用及其机制进行研究。结果表明,ASPS能够有效提高D-半乳糖所致衰老小鼠体质量和肝脏指数,使得机体状况得到改善;还能够有效提高模型小鼠血清、脑、肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性、过氧化氢酶(CAT)活性,而降低血清、脑、肝组织中丙二醛(MDA)含量,进一步证实了ASPS在增强机体抗氧化酶活性的同时,降低了脂质过氧化对细胞的损伤,从而起到了延缓衰老的作用。8.本试验以东莨菪碱所致急性记忆障碍大鼠为模型,采用避暗实验和Morris水迷宫实验对ASPS增强记忆能力及其机制进行研究。结果表明,在避暗实验中,ASPS能够有效延长记忆障碍大鼠的避暗潜伏期和明箱停留时间,减少避暗错误次数;而在Morris水迷宫实验中,ASPS能够延长记忆障碍大鼠的避暗潜伏期和原平台停留时间,增多平台探索次数,同时还能有效提高模型大鼠脑组织和血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性、降低丙二醛(MDA)含量,并对中枢胆碱能系统的乙酰胆碱酯酶(AChE)活性和乙酰胆碱转移酶(ChAT)活性起到改善作用,从而起到增强学习记忆能力的作用。9.本试验通过辅料筛选、制粒工艺条件筛选、药粉成型性研究、胶囊制备以及胶囊制剂的检测等方面的考察,对ASPS胶囊制剂的工艺进行研究。试验结果表明,玉米粉更适合作为ASPS的辅料应用于胶囊剂型的制备。90%的乙醇浓度,1:1的料液比,60℃的干燥温度,1h的干燥时间可以使ASPS的颗粒外形和制粒效果呈现较好状态。在ASPS胶囊的生产和贮存过程中,应将相对湿度严格控制在62%以下以确保药粉的质量。ASPS胶囊内容物含水量为7.04%,平均内容物装量为0.4315g,平均崩解时限为17.43min,均符合《中国药典》(2015版)的相关规定。
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285;R284
【图文】：

长白山,气相色谱图,阿拉伯糖,甘露糖

图 1-1 长白山刺五加多糖高效液相色谱图Fig.1-1 The HPLC of ASPS白山刺五加多糖的单糖组分气相色谱分析验结果见图 1-2，从图 1-2 中可以看出，经气相色谱分析，长白山刺五组成，通过与标准单糖保留时间的比较，长白山刺五加多糖由阿拉伯糖甘露糖组成。通过计算图 1-2 中每个峰所占峰面积，可知长白山刺五加尔比为，阿拉伯糖：木糖：葡萄糖：甘露糖=7.1：22.3：7.6：1.0。

高效液相色谱,长白山,高效液相色谱,阿糖

图 1-1 长白山刺五加多糖高效液相色谱图Fig.1-1 The HPLC of ASPS刺五加多糖的单糖组分气相色谱分析果见图 1-2，从图 1-2 中可以看出，经气相色谱分析，长白，通过与标准单糖保留时间的比较，长白山刺五加多糖由阿糖组成。通过计算图 1-2 中每个峰所占峰面积，可知长白山为，阿拉伯糖：木糖：葡萄糖：甘露糖=7.1：22.3：7.6：1

免疫器官,对二甲苯,长白山,胸腺指数

Note: compared with control group, *P < 0.05，**P < 0.012.2.1.2 长白山刺五加多糖对二甲苯致小鼠耳肿胀免疫器官的影响本试验结果见图2-1，从图2-1中可以看出，与正常组和对照组相比，刺五加多糖高、中剂量组小鼠脾脏指数和胸腺指数均明显提高，差异具有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）；而阳性对照组小鼠脾脏指数和胸腺指数均有所降低，但差异均不具有统计学意义（P＞0.05）。与阳性对照组小鼠相比，刺五加多糖高剂量组脾脏指数和胸腺指数，中剂量组脾脏指数均明显提高，差异具有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。图2-1 长白山刺五加多糖对二甲苯致小鼠耳肿胀免疫器官的影响Fig. 2-1 Effects of ASPS on immune organs of ear auricle swelling of mice caused by xylene注：与对照组比较 *P < 0.05，**P < 0.01；与正常组比较

【参考文献】