清脑益元汤对急性缺血性脑损伤大鼠MBP、NF200表达的影响

发布时间：2020-07-14 13:27

【摘要】：目的:通过观察清脑益元汤对急性脑缺血损伤大鼠MBP、NF200表达的影响,探究清脑益元汤对缺血性脑损伤神经元保护作用的部分机制。方法:选用健康雄性SD大鼠192只,采用随机数字表法分为空白组(12只),假手术组(60只),缺血模型组(60只),清脑益元汤组(60只),除空白组外,各组均在造模后5个不同处死时间点1d、3d、7d、14d、28d分为5个亚组,每组12只。空白组正常喂养,自由饮食;假手术组参照MCAO术造模,术中插入约8mm鱼线,不足以阻断大脑中动脉血流,术后予等体积的蒸馏水灌胃,直至各处死时间点;缺血模型组在术前7日连续灌胃等量的蒸馏水,行MCAO术后,继续灌胃蒸馏水,直至各处死取样时间点;清脑益元汤组术前7日灌胃等体积的清脑益元汤,术后继续灌胃清脑益元汤直至各处死取样时间点。采用Longa的5分制法对大鼠的神经功能缺损症状进行评分,并在MCAO术后第1d、3d、7d、14d、28d各时间节点取脑组织样本,TTC染色观察缺血侧脑组织梗死范围,HE染色镜下观察缺血侧脑组织神经元的病理形态变化,采用RT-PCR检测缺血侧脑组织MBP mRNA表达水平,Western-blot检测NF200蛋白表达水平。结果:(1)神经功能缺损评分:空白组和假手术组大鼠的神经功能评分为0分;缺血模型组和清脑益元汤组大鼠在术后均出现不同程度的神经功能缺损症状,与缺血模型组相比,清脑益元汤组在各个时间节点的神经功能缺损评分减轻(P0.05)。(2)TTC染色观察脑梗死范围:空白组和假手术组未见灰白色的梗死灶;缺血模型组和清脑益元汤组均可见灰白色的大小不等缺血梗死灶;与缺血模型组相比,清脑益元汤组大鼠脑梗死范围缩小。(3)HE染色结果:空白组和假手术组神经元形态正常,结构清楚完整,无病理性改变。缺血模型组神经细胞坏死和凋亡明显增多,并有中性粒细胞浸润,树突及轴突明显减少,细胞核畸形最后消失,胞质内形成微空泡,可见巢团状坏死。与缺血模型组对比,清脑益元汤组神经细胞坏死减少,排列欠整齐,缺血区水肿明显,中性粒细胞浸润,小部分区域核固缩深染,细胞核消失,胞质内未见微空泡形成及巢团状坏死,整体病理改变较缺血模型组减轻。(4)RT-PCR检测结果:空白组和假手术组脑组织的MBP mRNA表达水平在同一时间点比较无明显差异(P0.05);与假手术组相比,缺血模型组MBP mRNA表达水平在各时间点明显下降(P0.01);与缺血模型组同一时间点比较,清脑益元汤组MBP mRNA表达水平明显升高(P0.05)。(5)Western-blot检测结果:空白组和假手术组脑组织的NF200表达水平在同一时间点比较均无明显差异(P0.05);与假手术组相比,缺血模型组NF200表达水平在各时间点明显下降(P0.01);与缺血模型组比较,清脑益元汤组NF200表达水平在各个时间节点均明显升高(P0.05)。结论:清脑益元汤对脑缺血损伤后大鼠的神经保护作用可能与调节MBP、NF200表达有关。
【学位授予单位】：广西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

2. 实验方法2.1 动物分组将本次实验各组大鼠染色标标编号，采用随机数字表法分为四组:空白组 12 只，假手术组、缺血模型组、清脑益元汤组每组各 60 只，各组均在造模后根据不同的处死取样时间点进一步分为 1d、3d、7d、14d、28d，5 个亚组，每个亚组 12 只，在实验中造模失败的大鼠予及时补充，保证各组数量一致，比较具有统计学意义。2.2 动物造模方法

颈内动脉由后向前依次为大脑后动脉、脉络膜动脉、大脑中动脉、大脑前动脉，大脑中动脉为颈内动脉的终粉分支之一，延伸后分为前后两支，主要供应大脑半球的背外侧面及大脑腹侧面的血流，见图2。大鼠图 2、大鼠脑结构解剖图大鼠脑中动脉梗阻模型（MCAO），采用文献标录的操作方法[2]对大鼠进行脑缺血损伤实验造模，具体上下操作：①术前禁食不禁水，各组分别使用 3.5%水合水水溶液 1ml/100g对大鼠进行腹腔注射麻醉并标标号，麻醉后仰面固定。剔除颈部鼠毛，无无消毒，行颈部正中切口，充分暴露视野，确认右侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)、颈内动脉(ICA)走向，夹封 CCA，结扎 ECA。②准备规格为 0.55mm 静脉输液针

与假手术组比较，差异有明显统计学意义(P＜0.01)；与缺血模型组相比，清脑益元汤组大鼠在各个时间点的神经功能缺损评分减轻，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表8、图3。表 8、各组大鼠在不同时间点神经功能缺损评分比较（分）( X ± S，n=10)组别 1d 3d 7d 14d 28d空白组 0 0 0 0 0假手术组 0 0 0 0 0缺血模型组 2.76±0.34△2.65±0.31△2.52±0.26△2.42±0.22△2.31±0.18△清脑益元组 2.12±0.22▲1.97±0.19▲1.86±0.17▲1.72±0.13▲1.66±0.11▲注：与假手术组比较：△P＜0.01；与缺血模型组比较：▲P＜0.05。图 3、各组大鼠在不同时间点神经功能缺损评分图

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本文编号：2755033