华佗再造丸对高脂血症小鼠降脂作用的研究

发布时间：2020-07-14 20:13

【摘要】：华佗再造丸(Huatuo Zaizao Wan,HTZZ)主要用于治疗痰瘀阻络、气血亏虚型中风恢复期及后遗症。有患者反映服用该药还能降低血脂,但临床上没有关于华佗再造丸防治高脂血症的研究报道。因此,本文首次研究华佗再造丸对高脂血症模型小鼠的作用,以阐明华佗再造丸通过调节血脂指标、改变高脂血症造成的组织病理性改变等防治高脂血症的作用机制。华佗再造丸属于国家保密处方,在药典中仅公开了处方中的部分成分:川芎、吴茱萸、冰片,所以目前没有华佗再造丸中有效成分含量测定的指导方法和质量标准。本文通过测定华佗再造丸的主成分含量,初步探究华佗再造丸中各成分与高脂血症疗效的量效关系,并检测其成药质量,保证动物实验的有效性、准确性,保证临床用药的疗效和安全性。整体研究内容共分为以下两个章节:第一章华佗再造丸治疗小鼠高脂血症的药效评价研究目的:系统评价华佗再造丸对小鼠高脂血症的治疗作用,并初步探索其作用机制,为华佗再造丸治疗高脂血症的机制和疗效提供有力科学证据,给高脂血症的中医药临床治疗提供更多有效、低副作用的治疗手段。方法:本研究以C57BL/6小鼠为研究对象,采用高脂饮食诱导建立小鼠高脂血症模型,通过灌胃给药方式每日给与不同剂量的华佗再造丸,动态监控给药后小鼠生长状况及血脂水平变化等指标,并采用生化检测及病理组织形态学方法检测小鼠组织细胞形态学的变化。结果:实验表明,华佗再造丸给药干预后可不同程度改善高脂血症各方面表型,包括:(1)降低小鼠体重增长值。华佗再造丸低剂量组、高剂量组、联用组对均能明显减轻小鼠体重(p0.05)。(2)降低小鼠血脂水平。联用组可显著降低血清中TC(p0.01)、TG(p0.01)及LDL-C(p0.05)水平,显著升高HDL-C(p0.01)水平;低剂量组明显降低血清TG(p0.01)、LDL-C(p0.05)水平,显著升高HDL-C(p0.01)水平;中剂量组明显降低血清TG(p0.05)、LDL-C(p0.01)水平,显著升高HDL-C(p0.01)水平;高剂量组可明显降低血清TC(p0.01)、TG(p0.01)及LDL-C(p0.05)水平,显著升高HDL-C(p0.01)水平。(3)降低空腹血糖。高剂量组和联用组空腹血糖有明显降低(p0.05)。(4)提高葡萄糖耐量。高剂量组能明显提高糖耐量(p0.05)。(5)提高胰岛素敏感性。各给药组的胰岛素敏感性均升高,其中联用组有明显差异(p0.05)。(6)降低肝脏中TC、TG、MDA含量以及提高SOD活性。低剂量组小鼠肝脏中的TC、TG、MDA含量明显降低(p0.05),中剂量组TC含量明显降低(p0.05),高剂量组TC(p0.01)、TG(p0.05)、MDA(p0.05)含量降低,联用组TG、MDA明显降低(p0.05)。(7)降低附睾脂肪指数。高剂量组和联用组明显降低附睾指数(p0.05)。(8)降低附睾脂肪脂滴面积。高剂量组、低剂量组、联用组均能显著性降低附睾脂肪脂滴面积(p0.01)。(9)降低肝脂肪脂滴面积,保护小鼠肝细胞结构。各给药组的脂滴明显变小,肝组织较为完整,其中中剂量组(p0.05)及联用组(p0.01)有显著差异。结论:华佗再造丸可通过降低C57BL/6小鼠体内TC、TG、LDL-C、MDA水平,提高HDL-C水平,和SOD活性,降低体重和脂肪细胞大小,减少肝脏脂肪沉积,提高糖耐量和胰岛素敏感性,以达到治疗高脂血症的作用。持续给药干预能预防和治疗高脂血症及高脂血症诱发的肥胖、脂肪肝及胰岛素抵抗等疾病。本研究结果进一步扩大了华佗再造丸的适应症范围,为脑卒中并高血脂症患者提供了更精准的治疗方案,也为高脂血症和心脑血管疾病患者提供了更多的治疗方法。第二章华佗再造丸主成分含量测定目的:对华佗再造丸主成分进行含量测定,初步探究华佗再造丸中各成分与高脂血症疗效的量效关系,并且检测成药质量,保证动物实验的有效性、准确性,及临床用药的疗效和安全性。方法:运用高效液相色谱法(HPLC)同时对华佗再造丸中川芎及吴茱萸的主要成分阿魏酸(Ferulic Acid,简称FA)、吴茱萸碱(Evodiamine,简称Evo)和吴茱萸次碱(Rutaecarpine,简称Rut)进行含量测定,通过气相色谱法(GC)对华佗再造丸中冰片的主要成分龙脑(Borneol,简称Bor)进行含量测定。结果:检测的10批华佗再造丸(180807、180813、180825、180826、180827、180828、180829、180830、180831、180901)中FA平均含量为101.168μg/g,RSD=12.09%;Evo平均含量为66.522μg/g,RSD=15.66%;Rut平均含量为36.647μg/g,RSD=6.11%;Bor平均含量为27.811μg/g,RSD=16.88%。结论:实验结果显示,10批华佗再造丸中阿魏酸平均含量最高,其次吴茱萸碱。由此推测华佗再造丸对高脂血症的疗效可能主要与阿魏酸、吴茱萸碱的含量有关。且不同批次的华佗再造丸中阿魏酸、吴茱萸碱、吴茱萸次碱和龙脑含量有所差异,但差异不大,说明华佗再造丸成药质量稳定。在本实验拟定色谱条件下,待检测成分与其他成分可达到完全分离,且精确度高、重复性好、稳定性好、回收率在合理范围内,证明在该提取方法及色谱条件下系统适用性好,可作为华佗再造丸成药质量控制的方法。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

图 1-1. 造模第 8 周正常组（NCD）与高脂血症模型组（HFD）的体重和血脂水平(x SD，n=9)，（A）小鼠体重、（B）小鼠血脂，#p<0.05、##p<0.01 表示与正常组较有明显差异3.2. 华佗再造丸对小鼠体重的影响给药周期 8 周，同一周内比较高脂模型组与正常组的体重水平变化情况，结果明高脂模型组的体重有明显增加（p<0.01）。同一周内比较给药组与高脂模型组的重水平变化情况，结果表明华佗再造丸低剂量组、高剂量组、联用组对均能明显减小鼠体重（p<0.05），效果最好的是联用组。比较同组小鼠给药 0~8 周内的体重变化，计算每周体重差ΔW（ΔW=W-W0周）结果表明华佗再造丸低剂量组（ΔWmax= -2.990 1.425、p>0.05）、中剂量组（ΔWma-0.391 5.468、p>0.05）、高剂量组（ΔWmax= -5.734 2.459、p<0.01）、联用组（ΔWma-4.713 2.425、p<0.01）在给药期间对小鼠体重均有不同程度的降低作用，其中高剂组和联用组的体重变化有统计学意义。结果见表 1-2。

血糖浓度(mmol/L)曲线下面积分组时间/min0 15 30 60 90 120NCD 4.163±0.689 2.913±0.569 2.438±0.267 2.200±0.000 2.200±0.000 2.200±0.000 294.800±41.600HFD 6.750±2.823 5.550±2.423 3.725±1.705 2.888±0.960 2.825±0.966 2.800±0.975 431.100±37.500#LH5.671±1.384 4.714±1.649 2.886±1.033 2.429±0.605 2.243±0.113 2.200±0.000 351.300±56.710MH7.038±1.284 5.250±1.204 3.263±0.955 2.500±0.454 2.438±0.346 2.438±0.407 389.600±70.380HH5.140±0.948 4.260±1.799 2.820±0.701 2.320±0.217 2.200±0.000 2.200±0.000 334.500±51.400CH4.580±0.701 3.460±1.117 2.260±0.134 2.200±0.000 2.220±0.045 2.200±0.000 302.700±25.800*Sim 3.860±0.921 3.060±0.508 2.260±0.134 2.200±0.000 2.220±0.045 2.200±0.000 290.660±26.000*#p<0.05 表示与正常组比较有显著差异，*p<0.05 表示与高脂模型组比较有显著差异

图 1-3.各组药物对小鼠肝脏中各物质活性的影响(x SD，n=9)，（A）TC、（B）TG、（C）MDA、（D）SOD，#p< 0.05 表示与正常组比较有显著差异，*p<0.05、**p<0.01表示与高脂模型组比较有显著差异3.6. 华佗再造丸对小鼠肝指数和附睾脂肪指数的影响（肝指数=肝脏重量/体重*100%；附睾脂肪指数=附睾脂肪重量/体重*100%）。与正常组相比，高脂模型组肝指数明显降低（p<0.05），附睾指数显著升高（p<0.01）。与高脂模型组比较，各组肝指数都有升高，但无显著性差异；低剂量组、高剂量组、联用组降低附睾指数，高剂量组和联用组附睾指数明显降低（p<0.05）。结果见表 1-7、图 1-4。

【参考文献】

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本文编号：2755435