IL-1β、C5a、Claudin-5在狼疮鼠脑组织分布及滋阴清热药干预研究

发布时间：2020-07-15 21:16

【摘要】：目的:1.观察细胞因子IL-1β,补体裂解产物C5a以及血脑屏障紧密连接蛋白Claudin-5在不同周龄狼疮鼠脑实质和脑膜组织的表达特点,模拟并研究狼疮脑病的动态发病规律。2.通过观察狼疮鼠脑组织细胞因子IL-1β和补体裂解产物C5a在滋阴清热药作用下的表达变化,探讨滋阴清热药对狼疮脑病的治疗作用及其机制。方法:1、SPF级B6.MRL-Faslpr/Jnju 6周龄雌性小鼠10只,作为小周龄模型组,体质量15.4~19.4(平均18.4)g;SPF级B6.MRL-Faslpr/Jnju 18周龄雌性小鼠10只,作为大周龄模型组,体质量19.6~23.6(平均21.6)g;SPF级C57BL/6JN 6周龄雌性小鼠10只,作为小周龄正常组,体质量15.4~19.4(平均18.4)g;SPF级C57BL/6JN30周龄雌性小鼠10只,作为大周龄正常组,体质量29.5~35.1(平均32.3)g。取小鼠脑实质和脑膜组织应用免疫组化、荧光定量PCR检测IL-1β、C5a、Claudin-5的表达特点。2、SPF级B6.MRL-Faslpr/Jnju 6周龄雌性小鼠20只,体质量15.3~19.8(平均18.4)g;SPF级C57BL/6JN 6周龄雌性小鼠10只,体质量15.5~19.4(平均18.4)g;把模型鼠随机分为:(1)中药组(T组)(n=10):按滋阴清热药20g/Kg/d剂量灌胃(人等效剂量的2倍),干预6周。(2)模型组(M组)(n=10):每天予滋阴清热药等容积灌胃无菌蒸馏水,干预6周。健康鼠为(3)正常组(N组):每天予滋阴清热药等容积灌胃无菌蒸馏水,干预6周。6周后取脑实质和脑膜组织,应用免疫组化、荧光定量PCR检测IL-1β、C5a在脑膜的表达变化。结果:1.免疫组化结果显示在6周龄狼疮鼠中,IL-1β表达于脑膜的血管组织周围和脑微血管内皮细胞,C5a表达于脑实质和脑膜的血管组织,Claudin-5表达于脑膜的血管组织周围和脑微血管内皮细胞。PCR结果显示:(1)IL-1β的表达量:四组小鼠脑实质组间比较无统计学差异(P0.05),四组小鼠脑膜组间比较:18周龄狼疮鼠高于6周龄正常鼠(P=0.00),18周龄狼疮鼠高于30周龄正常鼠(P=0.00),18周龄狼疮鼠高于6周龄狼疮鼠(P=0.00),6周龄狼疮鼠高于6周龄正常鼠(P=0.04),均有统计学差异;同组小鼠脑实质和脑膜比较:30周龄正常鼠(P=0.00)、6周龄狼疮鼠(P=0.01)、18周龄狼疮鼠(P=0.00)脑膜表达量均高于脑实质,有统计学差异。(2)C5a的表达量:四组小鼠脑实质组间比较:6周龄狼疮鼠高于6周龄正常鼠(P=0.00),6周龄狼疮鼠高于30周龄正常鼠(P=0.00),6周龄狼疮鼠高于18周龄狼疮鼠(P=0.00);四组小鼠脑膜组间比较:6周龄狼疮鼠高于6周龄正常鼠(P=0.00),6周龄狼疮鼠高于30周龄正常鼠(P=0.00),6周龄狼疮鼠高于18周龄狼疮鼠(P=0.00),有统计学差异;同组小鼠脑实质和脑膜比较:30周龄正常鼠(P=0.00)、6周龄狼疮鼠(P=0.03)、18周龄狼疮鼠(P=0.01)脑膜的表达量均高于脑实质,有统计学差异。(3)Claudin-5的表达量:四组小鼠脑实质组间比较:18周龄狼疮鼠高于6周龄正常鼠(P=0.01),18周龄狼疮鼠高于30周龄正常鼠(P=0.00),18周龄狼疮鼠高于6周龄狼疮鼠(P=0.00),有统计学差异;四组小鼠脑膜组间比较:6周龄狼疮鼠高于6周龄正常鼠(P=0.00),6周龄狼疮鼠高于30周龄正常鼠(P=0.01),6周龄狼疮鼠高于18周龄狼疮鼠(P=0.01),有统计学差异;同组小鼠脑实质和脑膜比较:30周龄正常鼠(P=0.00)、6周龄狼疮鼠(P=0.00)、18周龄狼疮鼠(P=0.04)脑膜的表达量均高于脑实质,有统计学差异。2.滋阴清热药干预后,中药组IL-1β和C5a免疫组化染色较模型组变浅,阳性位点减少。荧光定量PCR结果显示:(1)IL-1β在脑膜的表达量:模型组表达量高于中药组(P=0.535),但没有统计学差异,模型组(P=0.00)和中药组(P=0.01)均高于正常组,有统计学差异。(2)C5a在脑膜的表达量:模型组高于中药组(P=0.00)和正常组(P=0.00),有统计学差异;中药组高于正常组(P=0.001),有统计学差异。结论:1、根据IL-1β和C5a在狼疮鼠脑实质和脑膜组织的表达量特点,我们推测,免疫性血管炎可能是狼疮脑病的主要致病机理。根据C5a和Claudin-5的表达特点,我们认为,研究C5a和Claudin-5在狼疮脑病发病过程中的动态变化规律,对于研究狼疮脑病发病中血脑屏障机制具有重要的探索意义。2.滋阴清热药可降低IL-1β和C5a在狼疮鼠脑膜的表达,我们推测滋阴清热药可改善狼疮鼠脑组织血管炎,进而缓解狼疮脑病的进程。
【学位授予单位】：广州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5
【图文】：

广州医科大学硕士学位论文 3.2 PCR 检测脑膜组织 IL-1β、C5a 相对表达量3.2.1 IL-1β 的表达量：三组小鼠组间比较：模型组表达量高于中药组（P=0.535)，但没有统计学差异，模型组（P=0.00)和中药组（P=0.01)均高于正常组，有统计学差异。3.2.2 C5a 的表达量：三组小鼠组间比较：模型组高于中药组（P=0.00），模型组高于正常组（P=0.00），中药组高于正常组（P=0.001），均有统计学差异。

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本文编号：2757018