情志应激增加NAFLD“易感性”机制及theacrine的保护作用研究

发布时间：2020-07-15 19:52

【摘要】：研究背景:《黄帝内经》记载“有人于此,并行并立,其年长少等也,衣之厚薄均也,卒然遇烈风暴雨,或病或不病或皆病,或皆不病”,其含义为面对相同致病外因,不同个体的临床症状表现为不发病或轻、重、缓、急等不尽相同,表明个体间存在“疾病易感性”的差异。即使是同一个基因型的个体,在不同的情绪状态,面对同样致病因素的“疾病易感性”也不同。近年来,随着生活水平的提高,高脂和高能饮食成为了当前一种难以避免的生活方式,非酒精性脂肪肝病(NAFLD)也因此成为当前危害人民健康的主要疾病之一。传统中医认为“肝郁则脾虚”,即认为情志抑滞不畅则会导致机体代谢功能异常,提示情志应激可能会增加NAFLD的“易感性”。流行病学调查也发现工作压力或情志应激增加高脂饮食(HFD)人群NAFLD的发生和发展,基础研究中也观察到应激负荷加重动物NAFLD表型的现象。这些传统理论和现代研究均提示情志应激能增加NAFLD的“易感性”,然而其“易感”机制尚不清楚。研究目的:本研究采用情志应激附加HFD喂养的方式建立体内和体外NAFLD“易感”模型,探讨情志应激增加NAFLD“易感性”的机制,并利用建立的模型评价Camellia assamica Var.kucha来源嘌呤生物碱theacrine的保护作用及探讨它的作用机制。研究方法:本研究以拘束应激或皮质酮(CORT)负荷7周附加HFD喂养14周的方式诱导小鼠产生NAFLD模拟情志应激诱发的NAFLD,并在体外采用皮质醇(CS)附加油酸(oleate)负荷的方式诱导肝细胞产生脂肪变性来模拟情志应激易感的NAFLD模型。本研究进行肝脏组织学观察,检测脂酰肉碱以及脂肪酸代谢相关基因及蛋白等。随后,本研究在情志应激易感的NAFLD模型上给予theacrine干预并检测脂肪酸代谢及药效指标。此外,本研究利用HFD喂养14周诱导小鼠NAFLD模型以及采用oleate诱导体外脂肪肝细胞模型探究theacrine改善脂酰肉碱代谢的深入机制。此外,本研究通过代谢流分析和基因沉默技术确证theacrine调控脂酰肉碱代谢的机制。研究结果:拘束应激明显增加HFD诱导ApoE-/-小鼠的肝脂肪变性、炎症和纤维化程度,导致脂酰肉碱代谢紊乱,提示了情志应激增加NAFLD的“易感性”,并可能与拘束应激激活下丘脑-垂体-肾上腺轴分泌过量血浆CORT相关。通过给予与拘束应激产生当量CORT的2 mg/kg CORT后,CORT处理的NAFLD小鼠与拘束应激易感的NAFLD模型具有相似表型,如大泡型脂肪变性、甘油三酯及脂肪酸堆积、线粒体蛋白过度乙酰化等。进一步机制研究发现,情志应激诱导的CORT促进糖皮质激素受体(GR)过度转位进入细胞核抑制去乙酰化酶Sirtuin 3(SIRT3)/长链脂酰辅酶A脱氢酶(LCAD)信号通路功能,上调脂滴包被基因PLIN2的表达促进脂肪分化相关蛋白(ADFP)表达;促进GR转位到脂滴膜上与ADFP发生相互作用募集ADFP。阻断GR受体则抑制大泡型脂肪变性、恢复SIRT3/LCAD信号通路功能、抑制ADFP表达以及减少ADFP募集到脂滴膜上。另外,CS抑制Hep G2细胞内脂酰肉碱代谢;CS与oleate共同处理则导致细胞内脂肪变性加重、SIRT3活性下调,提示情志应激易感的NAFLD体外模型建立成功。在细胞过表达SIRT3后,CS易感NAFLD细胞模型的脂肪变性得到改善,提示了SIRT3在情志应激诱导NAFLD“易感”机制中起到关键作用。此外,本研究评价出theacrine具有促进脂酰肉碱代谢及激活SIRT3/LCAD信号通路的作用,并且在已建立的3个情志应激易感的NAFLD模型上发现theacrine对大泡型脂肪变性、纤维化等具有明显的改善作用。再之,theacrine对单纯HFD诱导的NAFLD及oleate诱导的体外脂肪肝也具有改善作用,并且通过促进脂肪酸氧化、抑制脂肪酸的延伸及去饱和进而抑制长链脂酰肉碱堆积。在深入的机制上,本研究发现theacrine靶向与SIRT3结合或上调SIRT3的表达进而激活其去乙酰化活性增强LCAD活性,进而促进脂酰肉碱代谢。研究结论:本研究阐明了情志应激增加NAFLD“易感性”机制与GC促进GR转位至细胞核下调SIRT3/LCAD/脂酰肉碱代谢功能及增加ADFP堆积促进脂滴生成有关。Theacrine能改善情志应激易感的NAFLD,同时对单纯HFD诱导NAFLD也具有效用。该结果为theacrine开发成为情志应激易感NAFLD及肝郁脾虚分型NAFLD的治疗药物提供理论依据。
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

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