茶（Camellia sinensis）籽皂苷诱导小鼠肠促胰素GIP分泌的作用机制

发布时间：2020-07-15 15:40

【摘要】：肠促胰素是胃肠道的内分泌细胞及神经元释放至体内的激素肽类,其生理功能包括调节食欲、血糖、胃肠蠕动和生长、外分泌细胞分泌和脂肪细胞等,是影响机体能量代谢的重要因子。葡萄糖依赖性促胰岛素释放肽(GIP)是体内重要的肠促胰素之一,由近端小肠K细胞分泌,能够在体内发挥促胰岛素分泌作用,促进胰岛β细胞的增殖和存活。改善GIP及其受体的功能可提高胰岛功能或胰岛素敏感性,这一方法可能成为治疗2型糖尿病的一种新策略。茶(Camelliasinensis)籽皂苷因其具有调节胃肠道功能、抗癌、抗炎、抗微生物、抗氧化、神经保护、降血脂、表面活性等多种生物活性,已受到广泛关注,但对其深入的生物学机制研究较少。本文采用小鼠模型和小鼠小肠内分泌细胞(STC-1),研究了茶籽总皂苷和皂苷单体化合物TheasaponinE1对刺激小鼠小肠GIP分泌的作用和分子机制,主要研究结果如下:(1)茶籽总皂苷和TheasaponinE1能够在体内外刺激GIP分泌:对小鼠一次性灌胃给药茶籽总皂苷65mg/kgBW,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)和酶联免疫法(ELISA)测定不同时间点GIP mRNA和蛋白水平的表达。结果显示二者均出现先升高后降低的现象,但表达最高时间点不同,分别为1和3小时。TheasaponinE1在无毒剂量范围内处理细胞,同样能够诱导GIPmRNA和蛋白表达的升高。(2)钠-葡萄糖协同转运蛋白-1(SGLT1)在茶籽皂苷诱导GIP分泌中具有重要作用:采用SGLT-1抑制剂根皮苷与TheasaponinE1同时处理STC-1细胞,能够抑制TheasaponinE1诱导的胞内钙离子浓度升高,同时减缓GIP mRNA表达的上升,表明Theasaponin E1至少部分通过激活SGLT1诱导GIP的表达。(3)G蛋白偶联胆汁酸受体Gpbar1(TGR5)在茶籽皂苷诱导GIP分泌中具有重要作用:Western Blot和ELISA分析表明Theasaponin E1能够诱导STC-1细胞中TGR5蛋白表达和胞内cAMP水平的升高。采用RNA沉默技术敲除细胞TGR5,能够抑制Theasaponin E1诱导GIP的mRNA表达上升。这一结果表明TGR5在Theasaponin E1调节GIP表达中具有重要作用。综上所述,本研究发现茶籽皂苷能够通过SGLT-1和TGR5相关通路刺激GIP的表达,提示该类物质可能在调节改善二型糖尿病等代谢性疾病方面具有进一步研究价值和应用前景。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

图１．１山茶属植物籽皂苷的化学结构逡逑Ｆｉｇ．邋１．１邋Ｃｈｅｍｉｃａｌ邋ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｓａｐｏｎｉｎｓ邋ｆｒｏｍ邋ｔｈｅ邋ｇｅｎｕｓ邋Ｃａｍｅｌｌｉａ邋ｓｅｅｄｓ．逡逑６逡逑

２．３．１．１茶籽总皂苷对小鼠小肠ＧＩＰ邋ｍＲＮＡ表达的影响逡逑通过灌胃给予茶籽总皂苷，在不同时间点（０，邋０．５，１，邋２，邋３，４，邋６，１２，２４ｈ）处死逡逑小鼠并收集小肠组织，利用ＲＴ－ＰＣＲ定量检测ＧＩＰ邋ｍＲＮＡ的表达水平。由图２．１所示，一次逡逑性给予６５邋ｍｇ／ｋｇＢＷ剂量总皂苷后，ＧＩＰ的ｍＲＮＡ表达出现整体先升高后降低的现象，并逡逑在ｌｈ内徶到最高值，约为对照组的７倍，统计学差异显著（ｐ＜０．０５）。逡逑８００－逡逑．逦Ａ逡逑７００－逡逑ｆ逦＇逦ｂ逡逑Ｃ邋＜；００－逦Ｔ逡逑■逦Ｉ逡逑Ｉ０邋５邋ｊ逦＾邋＾逦＾逡逑ｌ邋Ｉ邋１邋■逡逑Ｉ邋ｆ逡逑■邋＾逡逑、：ｕ邋……：ｈNB逡逑０逦０．邋ｎ邋１逦２逦３逦４逦１２逦２－１逡逑Ｔｉｍｅｓ邋ａｆｔｅｒ邋ａｄｍｉｎｉｓｌｒａｌｉｏｎ邋ｏｆ邋ｌｏｔａ！邋ｓａｐｏｎｉｎｓ邋ｆｒｏｉｎ邋ｔｅａｓｅｃｄ＾ｈ）逡逑图２．１茶籽总皂苷对小鼠小肠ＧＩＰ邋ｍＲＮＡ表徸的影响。数据结果用平均数土标准偏差表示。逡逑不同的字母表示显著性差异（ｐ＜０．０５）。逡逑Ｆｉｇ．２．１邋Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ｔｅａ邋ｓｅｅｄ邋ｔｏｔａｌ邋ｓａｐｏｎｉｎｓ邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ＧＩＰ邋ｍＲＮＡ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋ｓｍａｌｌ邋ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ邋ｏｆ逡逑ｍｉｃｅ．邋Ｄａｔａ邋ａｒｅ邋ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ邋ａｓ邋ｍｅａｎｓ邋士邋ＳＤ邋ｆｒｏｍ邋ｔｈｒｅｅ邋ｒｅｐｌｉｃａｔｅｓ．邋Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ邋ｂｅｔｗｅｅｎ逡逑ｄｉ

通过灌胃给予６５ｍｇ／ｋｇＢＷ剂量茶籽总皂苷后，在不同时间点（0，０．５，１，２，邋３，邋４，逡逑６，１２，邋２４ｈ）处死小鼠并收集小肠组织，利用酶联免疫法（ＥＬＩＳＡ）定量测定ＧＩＰ蛋白的逡逑表徸水平。由图２．２所示，ＧＩＰ蛋白表达同样出现整体先升高后降低的情况，在３ｈ时徸到最逡逑大值，约为对照组的３．５倍。逡逑４００邋－逡逑ａ逡逑３５０邋＿逡逑＾邋３００邋－逦Ｉ逡逑■邋Ｉ逡逑Ｉ２００邋：逦ｔ邋１逦■邋Ｃｄ逡逑ｄｒ邋ｒ邋ｌｌｌｌｉ邋ｅ逡逑ｉｉｉＢＥＳｌｉＢ逡逑０邋０．５邋１逦２邋３逦４邋６邋１２邋２４逡逑Ｔｉｍｅｓ邋ａｆｔｅｒ邋ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｔｏｔａｌ邋ｓａｐｏｎｉｎｓ邋ｆｒｏｍ邋ｔｅａ邋ｓｅｅｄ（ｈ）逡逑图２．２茶籽总皂苷对小鼠小肠ＧＩＰ蛋白表达的影响。数据结果用平均数土标准偏差表示。逡逑不同的字母表示显著性差异（ｐ＜０．０５）。逡逑Ｆｉｇ．２．２邋Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ｔｅａ邋ｓｅｅｄ邋ｔｏｔａｌ邋ｓａｐｏｎｉｎｓ邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ＧＩＰ邋ｐｒｏｔｅｉｎ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋ｓｍａｌｌ邋ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ邋ｏｆ逡逑ｍｉｃｅ．邋Ｄａｔａ邋ａｒｅ邋ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ邋ａｓ邋ｍｅａｎｓ邋士邋ＳＤ邋ｆｒｏｍ邋ｔｈｒｅｅ邋ｒｅｐｌｉｃａｔｅｓ．邋Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ邋ｂｅｔｗｅｅｎ逡逑ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｇｒｏｕｐｓ邋ａｒｅ邋ｓｈｏｗｅｄ邋ｂｙ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｌｅｔｔｅｒｓ邋（ｐ邋＜邋０．０５）．逡逑２．３．２邋ＴＳＥ１对ＳＴＣ－１细胞中

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本文编号：2756687