益肾祛湿通络中药对膜性肾病大鼠肾保护作用及肾脏组织中Nephrin、NEPH1表达的影响

发布时间：2020-07-17 07:47

【摘要】：目的:本研究通过运用阳离子化牛血清白蛋白(Cationic Bovine Serum Albumin,C-BSA)的方法复制膜性肾病(membranous nephropathy,MN)大鼠模型,并应用益肾祛湿通络中药对模型进行干预性治疗,通过观察大鼠的24小时尿蛋白定量(24 hours urine protein,24hUTP)、血清总蛋白(serum total protein,TP)、白蛋白(albumin,ALB)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,Scr)等生化指标以及肾组织Nephrin、NEPH1的mRNA与蛋白的表达,探讨益肾祛湿通络中药对膜性肾病的干预性治疗作用及其可能机制,从而为临床治疗膜性肾病提供新的思路和方法。方法:选用清洁级健康SD雄性大鼠40只,体重160~180g,普通饲料适应性喂养一周,取各大鼠24小时尿液,检测24hUTP均为阴性。采用随机法将大鼠分为正常组(NG)10只、造模组30只。除NG外,造模组大鼠均应用自备阳离子化牛血清白蛋白预免疫一周,随后隔日尾静脉注射C-BSA复制MN大鼠模型。NG尾静脉注射等体积生理盐水。连续注射4周后,检测大鼠24hUTP确认造模成功以后,将造模组随机分为中药组(TCMG)、雷公藤+激素组(T+HG)、模型组(MG)。T+HG及TCMG给予相应的药物灌胃治疗,NG及MG给予等量的生理盐水,各组共给药4周。给药结束后,留取24小时尿液,检测24hUTP,随后将大鼠处死,取血,留取大鼠肾组织。全自动生化分析仪检测各组大鼠血清TP、ALB、TC、TG、BUN、Scr,并应用光镜、电镜、免疫荧光观察大鼠肾小球基底膜及足突的变化情况,实时荧光定量PCR(Quantitative real-time reverse transcription PCR,real-time PCR)、蛋白免疫印迹(Weston-blot)法检测Nephrin、NEPH1的mRNA与蛋白在肾组织中的表达情况。结果:1 24hUTP检测结果与ng相比,其余各组均出现明显蛋白尿,有显著性差异(p0.05);与mg相比,两治疗组24hutp均明显降低,有显著性差异(p0.05);两治疗组之间相比,无显著性差异(p(29)0.05)。2各组大鼠的生化指标比较2.1血清tp、alb检测结果与ng相比,其它各组血清tp、alb均明显降低,有显著差异(p0.05);与mg相比,两治疗组血清tp、alb均明显升高,有显著性差异(p0.05);两治疗组之间相比,无显著性差异(p(29)0.05)。2.2血清tc、tg检测结果与ng相比,其它各组血清tc、tg均明显升高,有显著性差异(p0.05);与mg相比,两治疗组血清tc、tg均明显降低,有显著性差异(p0.05);两治疗组之间相比,tcmg血清tc、tg明显低于t+hg,有显著性差异(p0.05)。2.3血bun、scr检测结果各组大鼠血清bun、scr之间无显著性差异(p(29)0.05)。3肾组织病理形态学观察光镜下ng肾小球结构未见明显异常,mg大鼠肾小球上皮下嗜复红蛋白沉积,基底膜(glomerularbasementmembrane,gbm)弥漫性增厚,足细胞足突弥漫性融合,两治疗组病理变化较mg减轻。电镜下ng肾小球结构未见明显异常,mg可见肾小球上皮下大量排列有序的电子致密物沉积,基底膜弥漫性增厚,足细胞足突弥漫融合,钉突形成,两治疗组病理变化较mg减轻,基底膜轻度增厚,电子致密物沉积较少,足细胞足突部分融合。免疫荧光显示:ng未见明显异常,mg可见igg沿肾小球毛细血管壁及部分系膜区沉积呈细颗粒状沉积。与mg相比,两治疗组病理变化较轻,可见少量的igg沿肾小球毛细血管壁呈细颗粒状沉积。4肾组织中nephrin、neph1的表达情况4.1real-timepcr结果与ng相比,其它各组nephrinmrna、neph1mrna的表达明显降低,有显著性差异(p0.05);与mg相比,两治疗组中nephrinmrna、neph1mrna的表达有所升高,有显著性差异(p0.05);两治疗组之间相比,无显著性差异(p(29)0.05)。4.2 Western Blot结果与NG相比,其它各组Nephrin、NEPH1蛋白的表达明显降低,有显著性差异(P0.05);与MG相比,两治疗组中Nephrin、NEPH1蛋白的表达有所升高,有显著性差异(P0.05);两治疗组之间相比,无显著性差异(P(29)0.05)。结论:1益肾祛湿通络中药可以改善MN大鼠的尿蛋白,提高血浆蛋白,与雷公藤联合激素作用相似。2益肾祛湿通络中药可改善脂代谢,作用优于雷公藤联合激素。3益肾祛湿通络中药可有效减少MN大鼠肾小球基底膜免疫复合物的沉积,从而改善肾小球基底膜的病理损害。4益肾祛湿通络中药可以上调MN大鼠肾组织中Nephrin、NEPH1的mRNA及蛋白的表达,修复肾小球裂孔隔膜蛋白的损失,保护了肾小球基底膜滤过屏障的完整性及通透性,这可能是其控制蛋白尿作用途径之一。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
【图文】：

图 1 各组大鼠 24hUTP 比较Fig.1 The changes of 24h urine protein in four groups(x±s)△P<0.05 vs NG;▲P<0.05 vs MG.

图 1 各组大鼠 24hUTP 比较Fig.1 The changes of 24h urine protein in four groups(x±s):△P<0.05 vs NG;▲P<0.05 vs MG.

图 3 各组大鼠 TC、TG 比较Fig.3 TC and TG of blood serm in four groups(x±s):△P<0.05 vs N G;▲P<0.05 vs M G;☆P<0.05 vs T+HG.图 4 各组大鼠 BUN、Scr 比较

【参考文献】