赤芍总苷对非小细胞肺癌的抑制作用及对MMP-9和HIF-1a表达影响的实验研究

发布时间：2020-07-17 15:51

【摘要】：肺癌是全球高死亡率的癌症之一,其发病率排在恶性肿瘤发病率的第二位,赤芍的提取物赤芍总苷(TPG)具抗肿瘤的作用,其对肺癌抑制作用已有少量报道,但对肺癌细胞中重要因子——基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和缺氧诱导因子-1Ｐt(HIF-1α)的影响未明。本文采用H1299肺癌细胞和C57BL/6小鼠肺癌模型,考察TPG对H1299肺癌细胞和C57BL/6小鼠植入肿瘤细胞增殖的抑制作用,通过考察MMP-9及HIF-1α基因和蛋白水平的表达差异,探讨TPG抑制肺癌细胞的分子作用机制。采用四唑盐(MTT)比色法检测不同浓度TPG对H1299肺癌细胞株生长的抑制作用;采用逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)测定H1299细胞中MMP-9及HIF-1αmRNA的丰度,采用Western blot测定MMP-9及HIF-1α蛋白水平。结果表明TPG与H1299细胞共培养24h、48h和72h时可剂量依赖性抑制肺癌细胞的生长(P0.05);共培养24h可剂量依赖性降低肺癌H1299细胞中MMP-9与HIF-1α的mRNA水平,减少MMP-9和HIF-1α蛋白的表达,与对照组相比有统计学差异(P0.05)。采用皮下注射肿瘤细胞悬液的方法建立C57BL/6小鼠肺癌模型,将成模小鼠随机分为模型对照组、环磷酰胺组(0.06g/kg)、TPG小剂量组(0.06g/kg)、TPG中剂量组(0.24g/kg)和TPG大剂量组(0.96g/kg),连续给药4周。结果表明模型对照组C57BL/6小鼠瘤体积于造模后3日、1周、2周、3周和4周时日渐增大;与模型对照组比较,中剂量和大剂量TPG可明显抑制C57BL/6小鼠肿瘤的生长(P0.05);中剂量TPG于3日、1周、2周、3周和4周时的抑瘤率分别为15.20%、26.05%、24.10%、21.59%和 24.71%,大剂量 TPG 的抑瘤率分别为 32.80%、31.51%、55.00%、37.28%和39.64%。与模型对照组相比,TPG中剂量组和大剂量组C57BL/6小鼠瘤重显著降低(P0.05);TPG大剂量组C57BL/6小鼠瘤重较中剂量组显著降低(P0.05),呈现剂量依赖关系。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定C57BL/6小鼠血清MMP-9和HIF-1α水平,和模型组相比TPG可呈剂量依赖性的降低血液中MMP-9和HIF-1α水平(P0.05);采用RT-PCR测定小鼠瘤组织中MMP-9和HIF-1α mRNA的表达,采用Western blot测定肿瘤组织中MMP-9和HIF-1α蛋白水平。结果和模型组相比,0.24g/kg和0.96 g/kg给予TPG 4周后,癌组织中MMP-9和HIF-1α的mRNNA和蛋白的表达降低(P0.05),有量效关系。结果表明TPG可抑制体外培养的肺癌H1299细胞株的生长,降低细胞内MMP-9和HIF-1α mRNA和蛋白的表达;在体实验中TPG可显著抑制H1299肺癌小鼠模型肿瘤组织的生长,提示TPG可以通过下调MMP-9和HIF-1α的表达发挥抗非小细胞肺癌的作用。
【学位授予单位】：西北大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
【图文】：

ＣｙｅｌｉｎＥ－ＣＤＫ２复合物的活性也促进了细胞由Ｇ１期向Ｓ期转变１７’１９】。越来越多的研究逡逑表明细胞周期素Ｄ１（Ｃｙｃｌｉｎ邋Ｄ１）和抑癌基因ｐ１６在正常细胞及肿瘤细胞周期调控屮均逡逑发挥着重要作用（图１），包括食管癌、乳腺癌以及头颈部肿瘤在内的多种肿瘤组织逡逑和细胞中细胞周期索Ｄ１的农达水ｔ：过量，丨Ｉ．作随＃邋Ｐ１６的衣达缺失。抑癌坫因ｐ１６逡逑能通过与细胞周期素Ｄ１竞争性结合下游ＣＤＫ４分ｆ＿，抑制细胞周期素Ｄ１－ＣＤＫ４复逡逑合物的形成（阁２），从而负性调控细胞周期，细胞周期素Ｄ１的表达异常可能作为判逡逑断肺癌分化的生物标志物，具有早筛早诊的临床意义［２ａ２１］。逡逑０逡逑ＩＩ逡逑Ｇ0逡逑图１逦细胞周期不同时向的周期依赖性激Ｉｔ复合物［１８］逡逑３逡逑

２在细胞生命中ＣｙｃｌｉｎＤＩ、Ｐ１６和Ｃｄｋ４的相互关系转移酶逡逑由致癌因子刺激，引起的大分子包括ＤＮＡ和定，从而改变细胞正常的生长周期，促使其无发现谷胱甘肽－Ｓ■转移酶（ＧＳＴｓ）在肺癌细胞和ｓ是一类多功能的二聚体蛋白质，在癌变诱导前［１９］，提示ＧＳＴｓ高表达可能是组织对致癌剂刺瘤基因家族蛋白逡逑瘤机制研究中的一个重要方向，Ｂ淋巴细胞凋亡过程中起关键性作用的一类蛋白质，通过粒体结构与功能的稳定性，发挥着启动细胞凋

第一章绪论逡逑号传递作用（图３）。蛋白是参与受体酪氨酸激酶（ＲＴＫ）信号通路的重要因子，逡逑当外源增殖信号，例如表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）与细胞膜上的相关受体结合后，逡逑靶向激活ＲＴＫ发生自身磷酸化，磷酸化的ＲＴＫ将信号传递给细胞膜上的Ｒａｓ，促进逡逑活化蛋白，激活下游ＲＷＲａｆ通路，引发有丝分裂远激活蛋白激酶途径的级联放逡逑大作用于Ｃｙｄｉｎ邋Ｄ１，调节细胞增殖与分化。当Ｒａｓ基因发生突变时，便可以认为该蛋逡逑白常态下表达激活形式诱发细胞增殖失控，进而导致细胞发生癌变［２２］。肺癌细胞中逡逑ｐ２１显著高表达，提示了邋Ｒａｓ蛋白过表达与肺癌的发生和发展相关。此外癌旁组织逡逑Ｒａｓ蛋白的阳性率高达４５．２８邋％，说明癌变前期就已经存在有Ｒ签的过量表达［２２】。因逡逑此Ｒａｓ的突变可以导致细胞Ｒａｓ过度表达

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本文编号：2759634