冬虫夏草口服液改善载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的实验研究

发布时间：2020-07-17 19:15

【摘要】：目的:通过预防性给药,探讨冬虫夏草口服液减小载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块的作用及其可能的作用机制。方法:40只雄性C57BL/6J背景的ApoE~(-/-)小鼠随机平均分为模型组(生理盐水)、阿托伐他汀阳性药组(5mg/kg)、冬虫夏草口服液低(0.4g/kg)、中(1.2g/kg)、高(3.6g/kg)剂量组。另取8只雄性C57BL/6J小鼠作为空白对照组(生理盐水)。高脂饲料喂养8周后,取小鼠血清分别采用生化法和酶联免疫吸附法测定小鼠血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C、MDA、SOD、IFN-?、TNF-?、IL-5、IL-12p70的含量;分离小鼠主动脉弓处血管,显微镜拍照比较管腔内斑块大小;胸腹主动脉段作剖面油红O染色比较斑块面积;主动脉窦部行冰冻切片油红O染色比较脂质沉积;主动脉窦部行石蜡切片HE、Masson、天狼猩红染色比较主动脉内膜病理形态改变以及胶原纤维含量的变化;主动脉窦部石蜡切片免疫组织化学染色定量分析巨噬细胞浸润和半乳糖凝集素-3以及?-血管平滑肌肌动蛋白的表达。结果:1.与空白组相比较,ApoE~(-/-)小鼠采用本实验方法高脂饲料喂养8周后在主动脉处可明显形成动脉粥样硬化斑块。2.药物干预后,阳性药组和冬虫夏草口服液低、中剂量给药组小鼠血清中TC、TG、LDL-C、MDA、IFN-?、TNF-?、IL-5、IL-12p70含量均降低,SOD活性和HDL-C水平升高,与模型组相比差异有统计学意义(P0.05)。3.高脂饲料喂养8周后,小鼠胸腹主动脉段油红O染色结果显示,模型组小鼠斑块明显多余空白对照组;与模型组相比,阳性药组和冬虫夏草口服液低、中剂量给药组主动脉斑块面积与血管总面积的比值分别减小31.4%(P0.01),18.8%(P0.05),20.0%(P0.05),差异有统计学意义。主动脉窦处油红O染色结果显示,模型组小鼠脂质沉积明显多余空白对照组;与模型组相比,阳性药组和冬虫夏草口服液低、中剂量给药组小鼠主动脉窦处斑块面积与血管腔总面积的比值分别下降了33.7%(P0.01),23.4%(P0.05)和33.3%(P0.05),差异有统计学意义。主动脉窦部HE染色结果显示,与空白对照组相比,模型组主动脉管腔变窄,内膜增厚并向管腔内凸起,内膜下大量血管平滑肌细胞增殖,出现脂质斑块和泡沫细胞聚集;与模型组相比,阳性药组和冬虫夏草口服液低、中剂量给药组小鼠主动脉窦部增厚的内膜与血管腔总面积的比值分别下降了33.8%(P0.01),25.4%(P0.05)和29.5%(P0.01),差异有统计学意义。主动脉窦部Masson和天狼猩红染色结果显示,与空白组相比,模型组小鼠主动脉窦部中膜胶原纤维的表达含量显著增加;与模型组相比,阳性药组和冬虫夏草口服液低、中剂量给药组小鼠主动脉中膜胶原纤维含量分别下降了27.5%(P0.01)、21.5%(P0.05)、24.9%(P0.05)和28.3%(P0.01)、16.3%(P0.05)、21.3%(P0.05),差异有统计学意义。主动脉窦部石蜡切片免疫组化结果表明,与空白组相比,模型组小鼠主动脉窦部巨噬细胞浸润严重、半乳糖凝集素-3以及内膜下?-平滑肌肌动蛋白的表达水平升高;与模型组相比,阳性药组和冬虫夏草口服液低、中剂量给药组小鼠主动脉窦部巨噬细胞浸润分别减轻了33.8%(P0.01)、19.9%(P0.05)、27.7%(P0.01),半乳糖凝集素-3的表达水平下降了30.2%(P0.01)、19.3%(P0.05)、21.9%(P0.05),内膜下?-平滑肌肌动蛋白的表达水平降低了37.5%(P0.01)、20.3%(P0.01)、28.3%(P0.01),差异有统计学意义。结论:1.本实验方法高脂饲料喂养可成功诱导ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化模型。2.冬虫夏草口服液可降低ApoE~(-/-)小鼠血清中TC、TG、LDL-C、MDA、IFN-?、TNF-?、IL-5、IL-12p70含量并增加SOD活性和HDL-C的水平。3.冬虫夏草口服液可减小ApoE~(-/-)小鼠胸腹主动脉段和主动脉窦处的斑块大小以及脂质沉积,降低主动脉内膜巨噬细胞浸润和半乳糖凝集素-3的表达,抑制血管平滑肌细胞迁移至内膜下并减少主动脉中膜胶原纤维的含量。4.冬虫夏草口服液能够改善ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化,其机制可能是通过降低血清中脂质和炎症因子的含量,从而减小主动脉处脂质沉积和巨噬细胞浸润,最终减小斑块面积改善AS。
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5
【图文】：

两组间均数比较采用独立样本 t 检验，多组间数据均数的比较采用单因素方差分析，斑块面积的统计学分析采用 Mann-Whitney 检验。P＜0.05 被认为差异有统计学意义。结 果1．冬虫夏草口服液对主动脉斑块的影响1.1 冬虫夏草口服液可降低主动脉弓处的斑块大小分离小鼠主动脉弓，体视显微镜拍照结果显示：空白组主动脉弓以及头臂干动脉、左锁骨下动脉、左颈总动脉平整光滑，管腔内无斑块可见。高脂饲料喂养8 周后，模型组小鼠主动脉弓以及头臂干、左锁骨下、左颈总动脉处可明显看到白色斑块。与模型组相比，阳性药组和冬虫夏草口服液低、中剂量给药组小鼠的左锁骨下动脉和左颈总动脉处的斑块减小，高剂量组小鼠左锁骨下动脉和左颈总动脉处的斑块肉眼未见明显减小（见图 1）。

.2 冬虫夏草口服液可降低胸腹主动脉段斑块大小分离小鼠主动脉根部至腹主动脉分叉处血管，纵向剖开后油红 O 染色结示，除空白组外，模型组以及其他给药组斑块形成明显（见图 2-1）；斑块面计学结果显示，与模型组相比，阳性药组和冬虫夏草口服液低、中剂量组斑积与 血管总 面积 的比值 分别减 少了 31.4%(P<0.01) ，18.8%(P<0.05) 0.0%(P<0.05)，差异有统计学意义（见图 2-2）。冬虫夏草口服液高剂量组斑积与血管总面积的比值与模型组相比减少了 9% (P=0.25)，差异没有统计学。冬虫夏草口服液低、中、高剂量 3 组之间差异没有统计学意义。

差异有统计学意义（见图 2-2）。冬虫夏草口服液总面积的比值与模型组相比减少了 9% (P=0.25)，差异草口服液低、中、高剂量 3 组之间差异没有统计学意义图 2-1. 胸腹主动脉段油红 O 染色结果

【参考文献】

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本文编号：2759825