【摘要】：目的:通过建立野生型小鼠放射性直肠炎动物模型,研究肠瑞灌肠剂保留灌肠能否调控AQP1、VEGF表达抑制血管新生发挥治疗放射性直肠炎的作用,将为放射性直肠炎的中药灌肠治疗发现新的作用靶点、创新发病理论提供实验依据。方法:1、放射性直肠炎模型建立(1)照射方法:采用盆腔局部单次大剂量照射的方法建立放射性直肠炎动物模型。野生型小鼠36只,随机分为6组,每组6只,照射剂量分别为:0Gy、21 Gy、23 Gy、25 Gy、27 Gy、30 Gy。(2)观察指标:a照射后第二天开始观察小鼠的一般征象:饮食量、摄水量、粪便性状、肛周脱毛、自主活动度等,每日评分记录。b照射后1W、2W、3W分别从每组随机抽取2只小鼠脱颈椎处死,取肛门上直肠组织1cm,HE染色,光镜下观察直肠组织病理改变。c模型评价:小鼠饮食摄水量下降,粪便性状异常,直肠病理表现为中重度炎症反应,与临床患者的病理改变相似,即为造模成功。2、药物保留灌肠疗效评价及机制研究(1)分组及用药:将70只野生型小鼠随机分为7组,每组10只,空白组:不照射+蒸馏水灌肠,模型组:照射+蒸馏水灌肠,西药组:照射+地塞米松联合庆大霉素灌肠,中药组:照射+八味锡类散灌肠,高剂量组:照射+30倍肠瑞灌肠剂灌肠,中剂量组:照射+15倍肠瑞灌肠剂灌肠,低剂量组:照射+7.5倍肠瑞灌肠剂灌肠,照射后1-14d每天同一时间段保留灌肠。(2)观察指标:a照射后每天观察记录各组小鼠的一般征象:饮食量、摄水量、粪便性状、肛周脱毛、自主活动度等,并评分记录。b照射后1W每组随机选4只小鼠,2W将剩余6只小鼠,脱颈椎处死,取肛门上直肠组织1cm,平分为两段,一段做western blot,另一段HE染色,光镜下观察直肠组织病理改变,分级评分。c称量小鼠肝脏、脾脏重量,观察肝脏指数、脾脏指数,研究放疗对小鼠免疫力的影响。(3)检测指标:a免疫组化检测各组小鼠直肠组织AQP1、VEGF组织定位及表达。b western blot检测各组小鼠直肠组织AQP1、VEGF蛋白表达水平。结果:1、放射性直肠炎模型建立(1)盆腔局部单次大剂量照射的方法成功建立放射性直肠炎动物模型,随着照射剂量的加大,直肠损伤程度增加,形成不可逆的直肠腺体破坏、异型增生。(2)27Gy组病理改变与临床病人相似,符合造模成功标准,选27Gy建立放射性直肠炎动物模型。2、药物保留灌肠疗效评价及机制研究(1)一般征象评分:模型组与空白对照组征象评分具有显著差异(p㩳0.01),各治疗组与模型组相比组间差异具有统计意义(p㩳0.05),肠瑞灌肠剂组与西药对照组、中药对照组相比,组间差异无统计意义(p㧐0.05),肠瑞低、中、高剂量组组间比较差别无统计学意义(p㧐0.05),尚不能说明肠瑞灌肠剂组在改善一般征象方面优于其他组。(2)直肠组织光镜下病理分级评分:模型组病理变化与空白对照组具有显著差异(p㩳0.01),模型组与西药对照组、肠瑞低剂量组病理变化具有差异(p㩳0.05),与中、高剂量组比较具有显著差异(p㩳0.01),与中药对照组比较差别无统计学意义(p㧐0.05)。西药对照组与肠瑞灌肠剂组相比差别无统计学意义(p㧐0.05),中药对照组与肠瑞中、高剂量组相比差别有意义(p㩳0.05),综合病理损伤等级排序r值考虑肠瑞灌肠剂高剂量组的效果较优,优于八味锡类散,尚不能认为优于地塞米松联合庆大霉素。(3)脾脏指数、肝脏指数:2w西药对照组小鼠脾脏指数与模型组相比,差别具有统计学意义(p㩳0.01),其余各组小鼠1w、2w脾脏指数、肝脏指数之间均无统计学差异(p㧐0.05),提示放射线对小鼠造成放射性直肠炎,尚不能说明对小鼠免疫力有影响,也不能确定西药会影响小鼠免疫力。(4)aqp1、vegf免疫组化:模型组直肠组织aqp1、vegf平均光密度值明显高于空白对照组,差别具有统计学意义(p㩳0.01),各用药组的平均光密度值低于模型组,与模型组比较差别具有统计学意义(p㩳0.05),西药对照组、中药对照组分别与肠瑞高剂量组比较差别有意义(p㩳0.05),肠瑞高剂量组与低、中剂量组比较有差异(p㩳0.05),表明肠瑞灌肠剂高剂量组抑制直肠组织aqp1、vegf表达效果优于其他组。aqp1与vegf水平直线相关性,发现两者呈正相关关系(r=0.820,p㩳0.01)。(5)aqp1、vegf蛋白表达:模型组小鼠1w、2w直肠组织aqp1、vegf蛋白的表达明显高于空白对照组(p㩳0.01),各治疗组与模型组相比差别均具有统计学意义(p㩳0.01),肠瑞高、中、低剂量组与中药对照组、西药对照组分别比较,差别具有统计学意义(p㩳0.01),西药对照组与中药对照组比较差别无意义,肠瑞高剂量组与低、中剂量组比较差别有意义(p㩳0.01),表明肠瑞灌肠剂高剂量抑制aqp1、vegf蛋白表达效果最优。同时发现aqp1与vegf水平直线相关性呈正相关关系(r=0.962,p㩳0.01)。结论:1.盆腔局部单次大剂量照射可以造成放射性直肠炎动物模型,以6mv-x线直线加速器照射27gy造成野生型小鼠放射性直肠炎动物模型,直肠病理改变与临床患者病理相似。2.肠瑞灌肠剂、地塞米松联合庆大霉素、八味锡类散保留灌肠均可以防治放射性直肠炎,但肠瑞灌肠剂高剂量组抑制直肠组织炎症、损伤,改善直肠组织微循环优于其他组。3.肠瑞灌肠剂通过下调AQP1、VEGF的表达,抑制血管新生,达到治疗放射性直肠炎的目的。
【学位授予单位】：山西省中医药研究院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
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2760175
