金丝草化学成分及体外抗HBV活性研究

发布时间：2020-07-18 19:27

【摘要】：乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是乙型肝炎最常见的致病因子,严重威胁着人类的生命健康。乙型肝炎传播速度快,流行范围广,治疗难度大,迄今仍没有明显治疗效果的特效药物。中药治疗乙型肝炎是我国特有且有效的一种治疗方法,许多天然药物及一些中草药活性成分对治疗乙型肝炎不仅疗效明确,而且毒副作用相对较小,从中草药中寻找抗HBV活性先导化合物是目前抗HBV药物研发的一个重要策略。本课题组前期通过活性筛选,发现金丝草70%乙醇提取物显示较好的体外抗HBV活性。进一步研究表明,金丝草抗HBV有效成分主要集中在70%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位和正丁醇萃取部位。金丝草是禾本科金发草属植物金丝草(Pogonatherum crinitum(Thunb.)Kunth)的干燥全草,别名猫尾草、笔仔草、黄毛草。文献记载,本品性寒,无毒,具有清热、解暑、利尿等功效,常用于治疗感冒高热、中暑、尿路感染、糖尿病和黄疸型肝炎等症,现代药理研究表明金丝草具有降血糖、抑菌及保肝等作用。为寻找金丝草70%乙醇提取物抗HBV有效成分,本论文拟对其乙酸乙酯部位和正丁醇部位开展系统的分离纯化及结构鉴定工作。同时,以HBV-DNA转染人肝癌细胞所得的HepG2 2.2.15细胞为体外试验模型,以细胞培养上清液中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)的分泌变化为检测指标,筛选显示较好体外抗HBV活性的单体化合物。本论文研究结果可以为完善金丝草药材化学成分的研究内容,阐明金丝草抗HBV的药效物质提供一定的科学依据。同时,也为寻找具有天然抗HBV作用的活性化合物奠定基础,有利于金发草属药用植物的开发与应用。第一部分金丝草活性部位化学成分的研究目的:分离纯化金丝草70%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位及正丁醇萃取部位的化学成分,得到单体化合物并鉴定结构。为寻找体外抗HBV活性化合物提供一定的物质基础,为金丝草药材化学成分的深入研究提供科学依据。方法:应用大孔树脂(乙醇-水系统)、硅胶(氯仿-甲醇系统)、聚酰胺(乙醇-水系统)、Sephadex LH-20(甲醇-水系统)等柱色谱技术,结合重结晶、半制备HPLC等方法分离纯化金丝草70%乙醇提取物乙酸乙酯、正丁醇部位的化学成分。依据化合物理化性质及波谱数据(MS、~1H-NMR、~(13)C-NMR、HMBC、HSQC)鉴定化学结构。结果:从金丝草70%乙醇提取物的乙酸乙酯及正丁醇萃取部位分离得到了11个单体化合物,鉴定了其中8个化合物结构,推测了1个化合物结构。鉴定结构的8个化合物分别为,6,8,4?-三羟基-7,3?-二甲氧基异黄酮(1)、槲皮素-7,4?-二甲醚-5-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(2)、8-[1-(3,4-二羟基苯基)乙基]槲皮素(3)、金圣草素-7-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、山柰酚-3-O-(2??,3??-二-O-E-p-香豆酰基)-α-L-吡喃鼠李糖苷(5)、1,3,7-三羟基Tk吨酮-2-C-β-D-吡喃葡萄糖苷(6),木犀草素-6-C-β-D-吡喃波依文糖苷(7)、木犀草素-6-C-β-D-吡喃葡萄糖苷(8);推测结构的1个化合物为芹菜素-6-C-α-L-鼠李糖基-(1→4)-α-L-鼠李糖苷(9)。分离得到的化合物均属黄酮类化合物。结论:化合物1~6、化合物9均为首次从金发草属植物中分离得到。第二部分单体化合物体外抗HBV活性检测目的:对化合物1~8进行体外抗HBV活性检测,筛选其中显示抗HBV活性的单体化合物,为进一步阐明金丝草抗HBV药效物质提供一定的科学依据。方法:选用HepG2 2.2.15细胞为体外试验模型,以细胞培养上清液中HBsAg和HBeAg的分泌变化为检测指标,检测各单体化合物的体外抗HBV活性。结果:化合物3、化合物5、化合物7和化合物8一定程度上抑制了HepG22.2.15细胞分泌HBsAg,IC_(50)分别为96.6、127.1、72.4和54.5μg/mL;化合物7、化合物8对HBeAg的分泌也有一定的抑制作用,IC_(50)分别为81.0、61.3μg/mL。结论:从金丝草中分离得到的部分黄酮类单体化合物显示良好的体外抗HBV活性。
【学位授予单位】：承德医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R284;R285

【参考文献】