当归蛋白自组装效应及其应用初探

发布时间：2020-07-19 23:36

【摘要】：当归是我国传统中药之一,但针对其药理作用研究主要集中于当归多糖及小分子等,对其含量丰富的当归蛋白质的研究却很少。本研究从当归饮片中分离出当归蛋白(ASPR),探究了ASPR的自组装效应及其对难溶性药物阿魏酸(FA)的装载能力,继而初步探索了纳米颗粒的各项生物活性,以期得到一种能够包埋药物并具有生物安全性的新型纳米载体。通过硫酸铵沉淀及Sephadex G-50凝胶过滤层析从当归饮片中得到当归糖蛋白ASPR,该蛋白分子量为18.33kDa,于溶液中主要以单体形式存在且会部分形成二聚体。通过动态光散射检测pH、温度及处理时间对ASPR自组装效应的影响。研究结果表明,0.5mg/mL ASPR在pH 8.0条件下,经过100 ℃加热15 min后可自组装形成粒径均一的纳米颗粒ASPR-NP。本研究发现,加热可使ASPR的ANS荧光的波长移动,荧光强度下降,α-螺旋含量降低,β-折叠含量升高。这些结构变化表明ASPR结构展开,疏水基团暴露,从而聚集形成ASPR-NP纳米颗粒。ASPR热处理前先加入阿魏酸甲醇溶液(20mg/mL),可进一步得到包埋FA的纳米颗粒ASPR-FA-NP。应用100kDa超滤管纯化得到当归蛋白自组装颗粒ASPR-NP及当归蛋白装载FA颗粒ASPR-FA-NP,ASPR-NP平均粒径为129.76±3.28 nm,Zeta电势为-11.64±2.66mV;ASPR-FA-NP平均粒径为 226.3±18.3nm,Zeta电势为-14.65±5.01mV。二者在扫描电镜下均呈不规则球形。最终得到的纳米颗粒可置于4 ℃短期保存,-20 ℃长期保存。与同等组装含量的ASPR相比,ASPR-NP的DPPH自由基清除率显著提高150%(P0.05),ASPR-NP的ABTS自由基清除率极显著提高398%(P0.01)。ASPR-NP能够装载FA,本研究中FA包埋率约为30%,ASPR-FA-NP载药率约为65%。与参与装载的等量ASPR相比,ASPR-FA-NP清除自由基能力显著提高155%(P0.05),与空载体ASPR-NP相比,ASPR-FA-NP清除ABTS自由基能力则极显著提高79%(P0.01)。MTT试验表明,ASPR、ASPR-NP及ASPR-FA-NP皆具有促进正常肝细胞L-02增殖作用,与空载体ASPR-NP相比,ASPR-FA-NP能够选择性保护正常肝细胞并抑制肝癌细胞增殖。将ASPR和ASPR-NP进行FITC标记后,通过激光共聚焦显微镜显示ASPR及ASPR-NP可跨膜进入Hep G2细胞的线粒体。最后,通过溶血实验检验ASPR、ASPR-NP及ASPR-FA-NP的生物相容性,发现三者对健康红细胞均无明显的溶血现象。综上所述,ASPR具有装载难溶性药物FA能力,制备方法简便,形成的颗粒具有多方面的生物活性且安全性高。本课题的研究结果进一步拓宽了当归蛋白的应用价值,同时为纳米药物载体的设计提供了新的方向。
【学位授予单位】：福州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R284
【图文】：

逡逑线衍射和核磁共振光谱学，己经确定了一些ＰＲ－１０蛋白质的晶体结构，如图１－３逡逑所示。ＰＲ－１０蛋白三维结构由Ｃ末端三个ａ螺旋（ｃｔｌ至《３），七股反平行的炉折逡逑叠包围（／？１至Ｗ）和九个接合环（Ｌ１至Ｌ９）组成［６５］，将两个折叠（＃１，炽）逡逑中间间隔着两个较短的螺旋结构（《１，ａ２），连续的片折叠链（＾２－＾７）通过五个逡逑发夹环连接，使链＾７返回与灼的氢键连接。六个＾凸起扭曲了邋＾片的规律性，逡逑赋予它高度弯曲的形状。ＰＲ－１０蛋白结构的另一个重要特征是在

本文编号：2763123