羟基红花黄色素A及其制剂对糖尿病慢性溃疡的修复作用研究

发布时间：2020-07-19 23:47

【摘要】：目的:通过筛选适宜的中药单体,进一步构建了互穿网络结构凝胶敷料体系,探讨其对糖尿病溃疡的修复作用及其相关机制。并进一步将其与具有促血管新生作用的化药小分子联合应用以期对糖尿病溃疡产生协同修复效果,明确其相关作用机制。方法:1.通过细胞实验和动物实验筛选获得具有加快慢性创伤修复的中药单体羟基红花黄色素A(HSYA),并在体外对其创伤愈合机制做了进一步的研究。2.构建了携载HSYA的水凝胶敷料,建立了HSYA的体外分析方法,并对凝胶的形态、孔隙率和药物释放等进行了考察。建立了环形夹板糖尿病溃疡模型进行载药凝胶的体内药效学评价,采用Masson染色,测定修复皮肤内的VEGF、TGF-β 1的含量,考察HSYA水凝胶的溃疡修复效果。3.进一步协同去铁胺(DFO)制备了以京尼平为交联剂的HSYA/DFO共载水凝胶,通过体内外一系列实验考察了 HSYA/DFO共载水凝胶对糖尿病溃疡的治疗效果并研究了相关作用机制。体外研究中考察了HSYA/DFO联用对细胞分泌HIF-1α、迁移及血管新生的影响。体内研究中考察了HSYA/DFO水凝胶敷料对糖尿病溃疡愈合率的影响,并通过对愈后皮肤进行HE染色、CD31、HIF-1 α组织免疫荧光染色、光声观察血流情况等来考察皮肤溃疡修复质量。结果:1.HSYA具有抗炎作用且存在浓度依赖性,同时还具有促进角化细胞的迁移和新生血管的生成作用,能促使伤口的再上皮化,加快皮肤溃疡愈合速度。2.建立了 HPLC测定HSYA的体外分析方法。筛选获得壳聚糖-明胶质量比为5:5的水凝胶体系为优化载药体系,制备的凝胶呈现多孔的三维状结构,携载HSYA后,1h的药物释放百分率约为40%,其后HSYA 一直持续释放直到10h,具有一定的缓释效果,且其易于涂布,吸水性和透气性良好。体内实验结果表明HSYA具有较强的加速溃疡愈合的活性,与空白对照组及其他用药组相比,HSYA凝胶修复后的皮肤组织中VEGF和TGF-β1含量表达最高,且愈后皮肤有部分毛囊、血管等皮肤附属器生成,但与正常皮肤相比,仍显示有较大差距。3.HSYA和DFO的联合用药对成纤维细胞分泌HIF-1 α、角化细胞向伤口处的迁移及血管新生产生了一定程度的协同作用。体内药效学与组织染色结果表明,HSYA-DFO凝胶与HSYA-DFO溶液均能通过上调HIF-1 α的含量,促进血管新生,从而加速伤口的上皮化,促进溃疡愈合,其中HSYA-DFO凝胶修复后的皮肤质量最佳,新生表皮与肉芽组织厚度最高,真皮层血流更丰富,最接近于正常皮肤。结论:HSYA具有促进糖尿病溃疡修复的效果。通过本研究构建的水凝胶敷料联合携载HSYA与DFO时,能产生协同加速糖尿病溃疡修复的效果。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5
【图文】：

细胞生存,表皮细胞

不同中药单体作用人永生化表皮细胞24h后的细胞生存率(n=5.*:P}0.05,#:P<0.01，和空白对照组相比)

糖尿病大鼠,情况,溃疡

周监测血糖结果显示大鼠血糖稳定在２０？３０ｍｍｏｌ／ｌ之间，且体重增长缓慢，出现逡逑多尿、多食、毛发暗黄的表现，认为糖尿病模型建立成功，可以进一步进行溃疡造逡逑模（图１．３和图１．４）。随机血糖结果的影响因素较多，如饮食量，活动状态等，逡逑大鼠血糖波动也属于正常现象。溃疡造模后大鼠血糖仍维持在较高水平，体重也仍逡逑然呈缓慢增长的趋势。这也说明了整个实验过程大鼠都是维持糖尿病状态的。逡逑＾逦４０逡逑■0邋３５逡逑１２ｓ：逡逑ｉ邋２０邋－逡逑ｔｏ逡逑８逦１５逡逑吾１０逡逑＾逦５逦＊￣￣＊￣￣＇——￣＾￣￣？逡逑＿0逡逑ＣＱ逦０逦Ｉ逦Ｉ逦Ｉ逦ｉ逡逑３逦７逦１２逦１６逦２３逦３０逦３４逦４１逦４８逡逑Ｔｉｍｅ（ｄ）逡逑－？－Ｃｏｎｔｒｏｌ邋Ａｓｔｒａｇａｌｏｓｉｄｅ邋ＨＳＹＡ邋Ｐａｅｏｎｉｆｌｏｒｉｎ邋－＾－Ｎｏｒｍａｌ逡逑图１．３糖尿病大鼠血糖变化情况（ｎ＝５）逡逑１１逡逑

糖尿病大鼠,体重变化,情况

图１．４糖尿病大鼠体重变化情况（ｎ＝５）逡逑１．３．２．２不同中药单体的溃疡修复结果逡逑从图１．邋５可以看出，正常大鼠创伤的总体愈合率要高于溃疡组大鼠，其中前六逡逑天具有显著性差异（Ｐ＜0．邋０５），证明已成功建立糖尿病溃疡模型。与糖尿病溃疡空逡逑白对照组相比，ＨＳＹＡ用药组能明显促进糖尿病溃疡的愈合，前三天有显著性差异逡逑（Ｐ〈０．０５）。而其余用药组也能在一定程度上促进伤口的愈合，但与空白组相比，逡逑均无显著性差异。总体而言，本次实验建立的渍疡大鼠模型本身具有较强修复能力，逡逑短时间能实现伤口的修复，但各用药组在愈合率上仍能体现出一定的差异，尤其是逡逑在创伤愈合早期的时候。可以初步判定，ＨＳＹＡ具有较好地加速溃疡愈合的效果。逡逑根据ＭＴＴ和动物实验的结果，最终选择ＨＳＹＡ进一步进行后续研究．逡逑１２逡逑

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