雷公藤多苷对耐顺铂人上皮性卵巢癌的顺铂增敏作用及机制的体外研究

发布时间：2020-07-21 12:00

【摘要】：目的:我们前期研究发现雷公藤内酯醇(triptolide,TP)可抑制耐顺铂人上皮性卵巢癌细胞生长,促进细胞凋亡。但TP属实验用品尚未应用于临床,临床上广泛用于治疗免疫性疾病的成品药是雷公藤多苷(tripterygium glycosides,GTW),而TP是GTW的主要活性成分。GTW能抑制鼻咽癌细胞以及多种血液系统恶性肿瘤细胞生长,但GTW对耐顺铂人上皮性卵巢癌的作用未见文献报道。因此,本课题通过体外实验观察雷公藤多苷对耐顺铂人上皮性卵巢癌SKOV3/DDP细胞株的顺铂增敏作用,探讨其作用机制,为雷公藤多苷有望成为耐顺铂卵巢癌的辅助治疗或顺铂增敏药物提供实验依据。方法:1.用不同浓度(0、0.625、1.25、2.5、5、10、20、40、80μg/ml)顺铂(DDP)分别处理SKOV3/DDP细胞24h后,Cell Counting Kit-8(CCK8)法检测SKOV3/DDP细胞的存活率。2.用不同浓度(0、50、200、800、1600、3200μg/ml)GTW分别处理SKOV3/DDP细胞24h后,CCK8法检测SKOV3/DDP细胞的存活率。3.将对数生长期SKOV3/DDP细胞随机分为8组:(1)空白对照组、(2)10μg/ml DDP组、(3)50μg/ml GTW组、(4)800μg/ml GTW组、(5)3200μg/ml GTW组、(6)10μg/ml DDP+50μg/ml GTW组、(7)10μg/ml DDP+800μg/ml GTW组、(8)10μg/ml DDP+3200μg/ml GTW组,相应药物作用24h后,CCK8法检测各组细胞的存活率。4.流式细胞术检测上述各组细胞凋亡率。5.细胞划痕实验观察以上8组细胞给药前后细胞的平均迁移距离。6.Transwell迁移实验观察以上8组细胞迁移能力改变。7.Transwell侵袭实验观察以上8组细胞侵袭能力改变。8.Western blot技术分析以上8组细胞Gst-π、MDR1、STAT3、p-STAT3蛋白水平的表达变化。结果:1.不同浓度(0.625、1.25、2.5、5、10、20、40、80μg/ml)DDP作用SKOV3/DDP细胞24h后,细胞存活率分别为:96.119±3.467%、80.646±3.054%、66.808±3.705%、51.642±1.316%、43.712±1.533%、34.403±2.917%、31.156±1.193%、27.240±2.220%。0.625μg/ml DDP对细胞活性无影响(P0.05),最低有效抑制浓度为1.25μg/ml(P0.01),且随DDP浓度增高,细胞存活率显著降低(P0.01)。2.不同浓度(50、200、800、1600、3200μg/ml)GTW作用SKOV3/DDP细胞24h后,细胞存活率分别为:98.064±1.474%、93.942±2.756%、64.748±3.557%、27.883±2.841%、12.899±2.351%。50μg/ml GTW对细胞活性无影响(P0.05),最低有效抑制浓度为200μg/ml(P0.05),且随GTW浓度增高,细胞存活率降低(P0.05)。3.GTW与DDP联用对SKOV3/DDP细胞生长的影响:10μg/ml DDP+50μg/ml GTW组与10μg/ml DDP组相比,细胞存活率无统计学差异(P0.05);800μg/ml、3200μg/ml GTW与DDP联合组与对应单药组相比,细胞存活率均显著下降(P0.01),且GTW浓度愈高,细胞存活率越低(P0.01)。4.DDP、GTW及两者联合作用于SKOV3/DDP细胞后细胞凋亡率改变:各组细胞平均凋亡率分别为:(1)3.623±1.608%,(2)12.090±1.418%,(3)3.860±1.434%,(4)13.107±2.231%,(5)17.920±1.136%,(6)13.563±3.133%,(7)19.053±0.963%,(8)34.580±2.722%。50μg/ml GTW组与空白对照组相比,细胞凋亡率无统计学差异(P0.05);其余药物组与空白对照组相比,细胞凋亡率均增高(P0.05);10μg/ml DDP+50μg/ml GTW组与10μg/ml DDP组相比,细胞凋亡率无统计学差异(P0.05);800μg/ml、3200μg/ml GTW与DDP联合组与对应单药组相比,细胞凋亡率增高(P0.05),且GTW浓度越高,细胞凋亡率越高(P0.05)。5.细胞划痕实验结果:各组细胞24h平均迁移距离为:(1)87.241±0.135μm,(2)29.266±1.252μm,(3)78.365±2.267μm,(4)24.324±1.947μm,(5)14.608±1.846μm,(6)25.606±1.191μm,(7)13.304±2.943μm,(8)2.901±1.005μm。各药物组与空白对照组相比,细胞迁移距离均显著缩短(P0.01);GTW单药组中,随着GTW浓度增高,细胞迁移距离减小(P0.05);GTW与DDP联合组与相应的单药组相比,细胞迁移距离均缩小(P0.05)。6.GTW联合DDP对SKOV3/DDP细胞迁移能力的影响:各组细胞穿膜个数平均值分别为:(1)82.200±1.732,(2)31.800±0.872,(3)73.600±1.039,(4)25.867±0.757,(5)21.067±0.611,(6)23.067±1.222,(7)17.267±0.808,(8)7.867±0.231。各药物组与空白对照组相比,24h细胞穿膜个数均显著减少(P0.01);GTW单药组中,随着GTW浓度增高,穿膜细胞数减少(P0.05);GTW与DDP联合组与相应的单药组相比,24h细胞穿膜数减少(P0.05)。7.GTW联合DDP对SKOV3/DDP细胞侵袭能力的影响:各组穿膜细胞数平均值分别为:(1)533.867±2.203,(2)32.733±0.462,(3)393.333±2.715,(4)161.467±0.902,(5)28.467±1.007,(6)29.467±1.102,(7)13.933±0.231,(8)8.600±0.346。各药物组与空白对照组相比,48h细胞穿膜个数均显著减少(P0.01);GTW单药组中,随着GTW浓度增高,穿膜细胞数减少(P0.05);GTW与DDP联合组与相应的单药组相比,48h细胞穿膜数减少(P0.05)。8.DDP、GTW及两者联合作用于SKOV3/DDP细胞后Gst-π、MDR1、STAT3、p-STAT3蛋白表达水平变化:各组细胞Gst-π、MDR1、STAT3蛋白表达一致(P0.05)。p-STAT3的表达:800μg/ml、3200μg/ml GTW与DDP联合组与对应单药组相比,表达下调(P0.05),且GTW浓度越高,p-STAT3表达呈逐渐下调趋势(P0.05)。结论:1.GTW具有抑制耐顺铂人上皮性卵巢癌细胞SKOV3/DDP增殖,诱导细胞凋亡的作用。2.GTW具有抑制耐顺铂人上皮性卵巢癌细胞SKOV3/DDP细胞迁移、侵袭的作用。3.800μg/ml、3200μg/ml GTW能协同DDP抑制SKOV3/DDP细胞生长,诱导细胞凋亡,增加SKOV3/DDP细胞对顺铂的敏感性,且该作用呈浓度依赖性。4.GTW能协同DDP抑制SKOV3/DDP细胞迁移、侵袭,且该作用呈浓度依赖性。5.GTW可能通过抑制SKOV3/DDP细胞STAT3信号通路中p-STAT3表达,而发挥顺铂增敏作用。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285

【参考文献】

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本文编号：2764379