药典所载四种陈皮的比较研究

发布时间：2020-07-22 08:07

【摘要】：【目的】以中医药理论为基础,运用生药学鉴定方法对药典所载陈皮进行性状比较研究,通过薄层鉴别建立四种陈皮的薄层鉴定方法,通过建立陈皮有效成分的含量测定方法及结合药理药效实验,以及通过GC-MS对四种陈皮挥发油进行测定及结合药理实验进行比较研究,对药典四种陈皮进行比较研究,以期为找寻广陈皮有效替代品提供参考和为开发陈皮临床应用以及质量标准提供科学依据。【方法】1、运用生药学鉴定方法,对药典所载四个品种陈皮进行性状鉴别和显微鉴定,分析四个品种陈皮性状和显微差异。2、通过药典所载对陈皮、枳壳和化橘红等柑橘属的薄层鉴定方法,分别对上述三种药材进行薄层鉴定,使用聚酰胺薄膜层析方法对三种中药材的薄层进行检识,比较两种方法。3、建立陈皮中主要活性成分的HPLC含量测定方法,并结合正常小鼠小肠推进和止咳祛痰实验,分析比较药典所载四种陈皮的差异。4、运用现代提取分析技术,提取药典所载四种陈皮中的挥发油,通过GC-MS分析,分析不同陈皮间挥发油中的成分的差异性。5、以药典所载四大陈皮中的挥发油为供试品,对兔离体小肠平滑肌的影响,以找寻与陈皮功能主治相吻合的活性成分,探讨其对兔离体小肠平滑肌的量效曲线关系,并初步探讨其药效作用机制。【结果】1、在性状鉴别方面,可以通过果皮厚度、气味差异以及对光透视的油室大小和密集程度对其进行区分,而其他方面的特征对陈皮品种的鉴别也起到一定的辅助作用;在显微鉴定方面,可以通过橙皮苷结晶和草酸钙结晶形态和数量进行区分。2、照2015版《中华人民共和国药典》第四部:薄层色谱法(通则0502)试验,药典所载薄层方法无法将三种药材中的橙皮苷、新橙皮苷和柚皮苷完全区分,聚酰胺薄膜层析法可同时鉴别三种药材中的橙皮苷、新橙皮苷和柚皮苷。3、建立了陈皮主要活性成分含量测定的方法,并对药典所载四个品种来源陈皮中的橙皮苷、川陈皮素、七甲氧基黄酮和橘皮素进行了含量测定。结合正常小鼠小肠推进和止咳祛痰实验,大红袍、茶枝柑、温州蜜柑和福橘水煎液均对小鼠小肠推进有促进作用,且均具有一定的止咳祛痰的作用。其中大红袍和茶枝柑中橙皮素、川陈皮素、七甲氧基黄酮和橘皮素的含量相近,但茶枝柑的小肠推进的促进作用最为显著且止咳祛痰效果最佳。4、陈皮挥发油的提取作用实验结果表明,大红袍的挥发油得率为3.47%,茶枝柑的挥发油得率为4.54%,温州蜜柑的挥发油得率为3.57%,福橘的挥发油得率为6.14%;通过GC-MS得到江西新干产大红袍陈皮样品挥发油的总离子流图,发现药典所载四种陈皮均含有α-蒎烯、桧烯、β-蒎烯、β-月桂烯、α-萜品烯、D-柠檬烯、g-萜品烯、萜品油烯、香茅醛、b-榄香烯、(Z)-石竹烯、大根香叶烯、g-榄香烯等13种共有成分。通过使用past软件对GC-MS数据进行主成分分析和聚类分析大致可将陈皮分为广东新会茶枝柑样品与其它地区样品两类。5、药理试验不同浓度的挥发油对不同部位离体小肠平滑肌大体都有一定的舒张作用,其中终浓度为1×10~-55 mL/mL陈皮挥发油对离体小肠的舒张作用最为明显,可以该浓度作为离体小肠的最大抑制浓度;相比较其他两种陈皮而言,福橘与蜜柑挥发油对十二指肠的抑制作用较为显著,且具有成一定量效关系(*P0.05,**P0.01)。乙酰胆碱能使离体兔肠肌痉挛,且乙酰胆碱对兔离体肠肌的最大致痉挛终浓度为5.0×10-7 mol/L(即给药浓度1.0×10-3mol/L,10μL);磷酸组胺能使离体兔肠肌痉挛,磷酸组胺对兔离体肠肌的最大致痉挛浓度为1.5×10-5 mol/L(即1.5×10-2mol/L,20μL);陈皮挥发油能有效抑制乙酰胆碱、磷酸组胺所导致的小肠痉挛。【结论】1、可以通过性状鉴别和显微鉴定的方法,比较药典所载四种陈皮的性状和显微特征,初步对药典所载四种陈皮进行区分鉴别。2、照2015版《中华人民共和国药典》第四部:薄层色谱法(通则0502)试验,药典所载薄层方法无法将三种药材中的橙皮苷、新橙皮苷和柚皮苷完全区分,聚酰胺薄膜层析法可同时鉴别三种药材中的橙皮苷、新橙皮苷和柚皮苷。以氯仿-甲醇-丙酮=15:3.5:1.5为展开剂,10%三氯化铝乙醇溶液为显色剂,对陈皮、枳壳和化橘红提取物中的橙皮苷、新橙皮苷和柚皮苷等黄酮苷类成分进行聚酰胺薄膜层析定性鉴别效果较好,且分离效果良好,斑点圆润。表明该方法简便、快捷、清晰、准确可靠,专属性强,通用性好,可作为枳壳、陈皮和化橘红中的橙皮苷、新橙皮苷和柚皮苷的定性鉴别。3、通过建立陈皮有效成分的含量测定方法,结合药理实验,对药典所载四种陈皮进行比较研究,找出与广陈皮相近的其他品种陈皮。4、通过使用past软件对GC-MS数据进行主成分分析和聚类分析大致可将陈皮分为广东新会茶枝柑样品与其它地区样品两类,可用于新会陈皮和其它不同品种来源陈皮的鉴别。5、陈皮挥发油能够抑制乙酰胆碱与磷酸组胺所造成的离体肠痉挛,表明了陈皮挥发油对胃肠道抑制作用可能是通过影响神经递质乙酰胆碱、组胺的分泌来抑制胃肠蠕动或是直接作用于胃肠平滑肌来减少胃肠运动频率的。
【学位授予单位】：江西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R284.1
【图文】：

陈皮挥发油,主要成分,黄酮苷类,新橙皮苷

α-蒎烯（α-Pinene） γ-松油烯（γ- terpinene）图 2 陈皮挥发油中四种主要成分Figure 2 Four main components in the volatile oil of dried tan2.2 黄酮类黄酮类化合物是陈皮的一大类生理活性成分，包括黄酮苷类和苷类主要为橙皮苷（hesperidin）、新橙皮苷（neohesperidin）、柚皮皮苷（narirutin）等。皮达等[13]对陈皮的黄酮苷类成分进行了薄层有橙皮苷、新橙皮苷和柚皮苷。以上四种黄酮苷类化合物的结构OOOH OOOHOOHHH2CCH3OHOOH3OOOOHOHOHOOCH3OHOH HO

技术路线图,陈皮,小肠推进,川陈皮素

陈皮素、七甲氧基黄酮和橘皮素）含量测定方法，并结合现代药理实验（小肠推进试验、止咳化痰实验），最后通过 GC-MS 分析比较四者挥发油的含量，结合药理实验（兔离体肠实验），从活性成分（橙皮苷、川陈皮素、七甲氧基黄酮和橘皮素）及挥发油含量差异，药理作用的差异方面，开展四大陈皮的比较研究，找寻与广陈皮成分疗效相近的陈皮样品，为开发陈皮的临床应用和建立其客观评价的质量标准提供科学依据。技术路线图如图 1。

性状鉴定,陈皮,福橘,性状特征

15图 7 四种陈皮的性状鉴定图Figure 7 Character identification of four tangerine peels（1：大红袍；2：茶枝柑；3：温州蜜柑；4：福橘）表 4 四种陈皮性状特征表Tab 4 Identification and Contrast Results of Four Peel Characters of Citrus tangerine

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