仙茅有效成分仙茅苷对急性肺损伤大鼠生物学作用研究

发布时间：2020-07-23 12:25

【摘要】：急性肺损伤(Acute Lung Injury,ALI)是常见于ICU病房中的由非心源性因素所导致的急性、顽固性的缺氧性呼吸衰竭(氧合指数300 mmHg),临床上将其严重阶段(氧合指数200 mmHg)称为急性呼吸窘迫综合征(Acute Respiratory Distress Syndrome,ARDS),但目前的研究中对其动物模型并没有明确的划分标准,在绝大多数的动物模型研究中仍然只使用ALI的概念。对此,本论文中使用ALI。ALI/ARDS因其起病急、发展快,并存在肺水肿,传统使用的呼吸支持技术和药物治疗效果不太理想,其病死率极高,已成为医学领域的研究热点和难点。已有部分相关研究表明中药仙茅中的有效成分仙茅苷具有较好的抗炎抗氧化作用,因此仙茅苷可能对以炎症和氧化应激为主要特征的ALI具有一定的生物学作用。对此,本研究通过气管暴露滴注脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导建立了ALI大鼠模型,以仙茅主要有效成分仙茅苷为研究对象,重点围绕仙茅中仙茅苷提取检测方法的建立和优化,以及仙茅苷对急性肺损伤大鼠的生物学作用和可能的机制进行了研究,为仙茅苷预防急性肺损伤提供实验线索。主要研究内容及结论如下:(1)对仙茅中仙茅苷提取的工艺参数(提取方法、提取试剂种类、提取试剂浓度、固液比,以及提取时间)分别进行了单因素试验。然后在提取试剂浓度、固液比、提取时间这三个因素中选择了3个水平纳入正交实验设计进行优化,最终得到仙茅中仙茅苷的最佳提取工艺为:80%体积分数的甲醇回流提取3 h,料液比为1:50(g:mL),提取率为0.244%。此外,建立了仙茅苷的HPLC分析方法,该色谱条件下,峰形尖锐对称,理论塔板数高,精密度、稳定性、重复性、加样回收率符合要求。(2)通过对大鼠暴露气管后滴注脂多糖溶液诱发急性肺损伤动物模型,以肺组织病理变化、病理评分、动脉血气、肺水肿、支气管肺泡灌洗液蛋白浓度,以及炎性细胞等为指标对构建的急性肺损伤大鼠模型进行评价,结果表明成功构建了LPS气管滴注诱导的ALI大鼠模型。(3)研究了仙茅苷对急性肺损伤大鼠的生物学作用。将24只大鼠随机分为4组(n=6):正常组,模型组,仙茅苷高剂量干预组(80 mg/kg)和仙茅苷低剂量干预组(40 mg/kg)。建立急性肺损伤大鼠模型前,仙茅苷高剂量和低剂量干预组分别以剂量为80 mg/kg、40 mg/kg的仙茅苷对大鼠灌胃,每天1次,连续5天;对照组和模型组以相应体积的羧甲基纤维素钠溶液灌胃,每天1次,连续5天。最后一次灌胃2 h后,麻醉大鼠,暴露气管后,对模型组、仙茅苷高剂量和低剂量干预组大鼠进行气管滴注脂多糖溶液(4 mg/kg),对照组滴注生理盐水。6小时后,抽取颈动脉血,行血气分析,收集支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar Lavage Fluid,BALF)检测BALF中总蛋白浓度和白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)含量以及进行细胞分类计数,取肺组织匀浆对MPO、MDA、SOD、CAT活性进行检测,取肺组织进行肺湿/干重比的检测。结果表明:1)与LPS组相比,仙茅苷低剂量和高剂量预处理组均能降低急性肺损伤大鼠肺组织损伤,仙茅苷高剂量干预组显著降低BALF中蛋白浓度和肺湿干重比(P0.05),表明仙茅苷可以抑制肺血管通透性的增强,减轻肺水肿的发生;2)与LPS组相比,仙茅苷低剂量给药组和高剂量干预组均能显著提高氧合指数;3)与LPS相比,仙茅苷低剂量和高剂量干预组均能显著上调肺组织中髓过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)水平(P0.05),表明仙茅苷可以上调抗氧化酶活性,减轻肺部氧化应激损伤;4)与LPS组相比,仙茅苷高剂量预处理组可以显著降低BALF中细胞总数,仙茅苷低剂量和高剂量预处理组能显著下调BALF中白细胞介素-6(IL-6)水平、降低中性粒细胞和巨噬细胞数量,表明仙茅苷可以减轻炎性浸润,下调促炎性细胞因子的释放。综上,仙茅苷可以通过调节炎症反应和氧化应激降低脂多糖诱导的急性肺损伤。
【学位授予单位】：重庆大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5
【图文】：

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图 1.1 仙茅苷化学结构图1 The chemical structure of curcu症是机体抵御外来有害刺量和长时间持续的炎症反症、哮喘等炎症相关的疾效果。在佐剂诱导的大鼠，下调血清中促炎性细胞 TNF-α 的表达，从而抑制大究表明仙茅苷可以减轻地L-6、IL-1β、TNF-α 和 COX仙茅苷通过调节炎症信号通9]。活性氧簇（ROS）是细胞在基（O2.）、羟自由基（O

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分别注入液相色谱仪。仙茅苷对照品保留时间处五个时间点的全波段扫描图如图2.1。仙茅苷的的最大吸收波长有 285 nm 和 230 nm，选择 285 nm 时基线更为平稳，所以后续选择了 285 nm 作为检测波长。使用液相色谱自带工作站软件将得到的谱图叠加后如图 2.2。根据测得的峰面积积分值，以仙茅苷浓度（C）为横坐标，仙

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10浓度对照品的 HPLC 色谱图（仙茅苷浓度从上至下依次L, 140 μg/mL, 70 μg/mL, 35 μg/mL, 17.5 μg/mL, 8.75 μg/ 2.2 HPLC chromatograms of reference substance of curculi的配制及紫外检测茅粉末 1.000 g，加 50 mL 甲醇，75 ℃下回流提体至旋转蒸发瓶，在 50 ℃，转速为 50 r/min 条件用甲醇少量多次洗涤壁上残渣，转移液体至 25 线，微孔滤膜过滤后注入液相色谱。以仙茅提取

【参考文献】