山楂不同炮制品对高脂膳食诱导肥胖大鼠的预防作用研究

发布时间：2020-07-25 12:16

【摘要】：山楂是一种大宗常用中药材,为蔷薇科植物山楂Crataegus pinnatifida Bge.及其变种山里红Crataegus pinnatifida Bge.var.major N.E.Br.的干燥成熟果实。临床上,山楂常用炮制品包括:生山楂、炒山楂、焦山楂和山楂炭,其性味、功效和主治显著不同。通过检索发现,生山楂广泛用于具有减肥功效的保健食品。那么,山楂其它炮制品是否具有减肥功效,至今尚无系统报道。本文首次利用肥胖动物模型并结合体外胰脂肪酶抑制实验对不同炮制品进行了减肥功效评价,并对比分析了山楂不同炮制品主要黄酮类成分的含量差异。主要内容如下:(1)利用生山楂饮片,按照传统工艺制备了山楂不同炮制品,应用HPLC法测定了其水提液中儿茶素、表儿茶素、牡荆素鼠李糖苷、金丝桃苷、槲皮素和异槲皮素含量,发现生山楂中相关成分含量分别为0.238%、0.029%、0.021%、0.393%、0.206%、0.064%,经炮制其含量显著下降,炒山楂分别下降了 13.31%、44.22%、11.25%、41.90%、42.73%、14.33%,焦山楂下降了25.05%、54.07%、31.74%、77.52%、94.74%、68.53%,山楂炭下降了 25.86%、82.03%、55.05%、82.72%、95.66%、72.34%。(2)利用体外抑制活性实验,对比测定了山楂不同炮制品对胰脂肪酶的抑制活性。发现山楂不同炮制品对胰脂肪酶均有一定的抑制活性,其中焦山楂抑制活性最强,其IC50为3.105mg/mL。(3)以正常饲料饲喂大鼠为正常对照,以高脂饲料饲喂制备单纯性肥胖大鼠模型,分别灌胃生山楂、炒山楂、焦山楂和山楂炭,评价其对模型大鼠的影响,以奥利司他和辛伐他汀为阳性对照药物。每周分两次测定大鼠体重及摄食量,观察大鼠一般状态,30天后测定Lee's指数,取样测定体脂率、脏器指数,取血凝固后取血清测定TG、TC、LDL-C、HDL-C的含量及胰脂肪酶活性,取肾周、附睾脂肪进行HE染色,取肝脏、胰脏进行油红O染色。实验期间各组大鼠整体精神状态良好,摄食量正常并未出现明显差异,与模型组相比,山楂不同炮制品均能显著减缓大鼠体重增长,其中焦山楂和山楂炭分别降低了31.2%、33.3%;焦山楂能显著降低大鼠的Lee's指数,降低了7.3%;炒山楂、焦山楂能显著减少大鼠体内脂肪堆积,分别降低了42.7%、45.5%;炒山楂、焦山楂能显著降低大鼠的肝脏指数,分别降低了 12.9%、13.9%,以及其脾脏指数分别降低了22.7%和18.2%。与模型组相比,焦山楂、山楂炭能极显著降低大鼠血清中TC、TG含量,分别降低了31.3%、29.5%和38.4%、40.4%,且使大鼠血清中LDL-C的含量分别降低了36.5%、38.5%;各山楂给药组均能极显著地抑制胰脂肪酶活性,最高降低率达到95.4%。与模型组相比,同一视野下,山楂不同炮制品组大鼠脂肪细胞较小且数量多,其中尤以焦山楂效果最为显著,其肾周、附睾脂肪细胞直径分别降低了34.4%、21.0%;各给药组肝脏中脂滴含量明显减少,尤以焦山楂作用显著,其脂滴含量降低了96.8%。本文结果说明:山楂不同炮制品均具有一定的肥胖抑制活性,其中焦山楂活性最强,建议相关减肥保健食品或药品选用焦山楂。根据炮制对山楂中六种黄酮类成分的影响,黄酮类成分可能与山楂减肥功效无关或与其降解产物有关,建议进一步对其进行深入研究,以揭示其活性成分及其变化规律。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

胰脂肪酶,立体结构

Ｎ－末端含有的催化中心主要包括丝氨酸１５２、组氨酸２６３和天冬氨酸１７６。其中，逡逑丝氨酸１５２不管是在催化过程还是活性屮心的组成上都是必需的胰脂肪酶立逡逑体结构见图１－１。逡逑脂肪酶对肠道中脂肪的消化和吸收过程有着举足轻重的作用。在人类的日常逡逑饮食中，大约９０％脂肪来源于混合甘油三酯，但是混合甘油三酯不能被人体直接逡逑吸收利用，首先要经历一个有胰脂肪酶催化的脂肪水解的过程使其转化为小分子逡逑的甘油单酯和脂肪酸等后，才能被吸收入血，再被人体利用，多余的被储存起来，逡逑成为其他组织利用的能量，能量摄入过度就会造成脂肪堆积，最终导致肥胖［８４］。逡逑１４逡逑

指纹图谱,混合标准,指纹图谱,黄酮

逑荆素鼠李糖苷、金丝桃苷、异槲皮素、槲皮素混合对照品溶液。混合标准品以及逡逑不同山楂样品的色谱图见图２－１、２－２。与生山楂中各峰面积进行比较，发现６种逡逑成分均呈下降趋势，其含量变化见表２－３。逡逑Ｑ０３－逦ｐ逡逑Ｑ０８－逡逑＝逦Ｅ逡逑。必逦Ａ邋１逦Ｃ邋Ｄ邋ＩＩ逡逑0ｇ0－邋逦ＩＬａ逦Ａ邋ｉｌ逦－—＿—逦逦逦逡逑ａｋ＇＇邋＇邋？ｚｍ邋３．００邋＇邋Ｖｏｃ邋＇＇邋ｅｃｏ邋？邋ｉｇｏ邋ｓｈｄ邋ｉｃｇｇ邋＇＇邋ｕ＇0２邋；２00邋＇邋＇邋ｔ邋ｓｍ邋？Ｖｉｉ邋ｔｓｅｃｉ邋＇邋ｆａｍ逡逑图２－１黄酮混合标准品指纹图谱逡逑注：图中各色谱峰分别表示Ａ：儿茶素，Ｂ：表儿茶素，Ｃ：牡荆素鼠李糖苷，Ｄ：金丝桃苷，逡逑Ｅ：槲皮素，Ｆ：异槲皮素。（见实验记录０００５５８５１－ｐ９５）逡逑？一逦Ｉ逦１逦Ｉ邋羼逦Ａ逡逑，；；■－：■邋－邋■邋＇邋．邋．邋－邋■逡逑ｉ逦ｖ逦（逡逑２逡逑■邋＊？？逡逑？？ＪＷ？逦＂＂邋ｍＩｗ＊逦＊逦＜？＊？＊？逦＊邋；＊邋＊＊ｗ逦ｓ－Ｔ＆ｏ逡逑Ｉ邋１逦ｈ邋ｉｓ逦Ｂ逡逑ｉ＇：逡逑－ｒ？邋ｗ？邋＊？－逡逑？？００逦Ｊｆ邋￥？Ｃ？逦－＊邋ｆｌｒ＊？逦Ｍ邋ＣＪＫ．Ｖ逦Ｍ邋＜Ｍ？逦ｗ0ｔ邋ＯＫ＞逦＊邋ｃ？＞逦？－？％？？＊逦？＊ｋＶ＊ｔ？逡逑—：逦Ｉ，邋１逦，，逦“，，、逦ｃ逡逑？邋？＊＞￣邋？逡逑？？￡？0：逦１１邋１１邋？（邋Ｉｍ＊逦１邋＂￣￣？＜？＊？？逦＊邋ｓ－ｋ＊？？邋１逦＊－？邋＇？＊0逦＊逦

标准曲线图

浓度（Ｕｍｏｌ／ｍｌ）为横坐标（Ｚ），其吸光度（ＯＤ）为纵坐标（Ｆ）绘制标准曲线逡逑并进行线性回归计算，得到回归方程为Ｆ＝８．３２２８Ｘ－０．００７４，邋Ｒ２＝０．９９９８。表明ｐＮＰ逡逑在０．０２＾Ｍ？０．５０ｐＭ与吸光度具有良好的线性关系。结果见图３－１。逡逑５邋逦逦逦逦逦逦逡逑ｙ＝８．３２２７８ｘ－０．００７４逡逑４逦Ｒ２＝０．９９９８逦９逡逑Ｉ邋３逦＂逡逑Ｓ逦，声逡逑Ｂ邋２逡逑＜邋＾逡逑Ａ逦ｙ－逡逑１逦ｒ／逡逑0Ｕ逦逡逑０．０逦０．２逦０．４逦０．６逡逑ｐＮＰＢ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（｜ｍｏｌ／ｍｌ）逡逑图３－１邋ｐＮＰ标准曲线图逡逑（见实验记录０００５８５２－ｐｌ９）逡逑３．４．２酶最适底物浓度筛选结果逡逑通过酶底物线性图，我们观察到底物浓度在１０ｍＭ以下时酶活随着底物浓逡逑度的增加活力上升明显，在１０ｍＭ出现拐点之后活力基本没有产生变化。因此逡逑３５逡逑

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