青蒿素对过氧化氢诱导的视网膜色素上皮细胞氧化应激损伤抑制作用的研究
发布时间：2020-07-26 19:00
【摘要】：目的探讨青蒿素对过氧化氢诱导的视网膜色素上皮层细胞(ARPE-19)氧化应激损伤的抑制作用。方法将ARPE-19细胞接种于96孔板,每孔7×10~3个细胞,细胞贴壁后分别加入不同浓度青蒿素,每组浓度做5个平行复孔,筛选对细胞增殖有效的最佳药物浓度。将APRE-19细胞分成四组,对照组:不做特殊处理;过氧化氢组:应用终浓度为100μmol/L的过氧化氢处理细胞24 h;青蒿素组:应用青蒿素30μmol/L,处理细胞24 h;青蒿素预保护组:应用30μmol/L青蒿素处理细胞24 h后加入终浓度为100μmol/L的过氧化氢处理24 h。利用MTT法检测青蒿素对过氧化氢诱导ARPE-19细胞损伤后的细胞增殖率;检测各组细胞内超氧化物歧化酶(SOD)含量和活性氧(ROS)阳性细胞数;通过Hoechst33342染色法及JC-1检测细胞线粒体膜电位观测各组细胞凋亡情况;Western Blot法检测各组细胞内凋亡标志蛋白Caspase-3、PARP及Bcl-2相对表达量;检测抗氧化应激通路Nrf2/HO-1/Keap1中Nrf2、HO-1、Keap1蛋白相对表达量。结果1、MTT法检测发现青蒿素浓度在30μmol/L对ARPE-19细胞增殖作用最强(均为P0.01)。青蒿素预保护组与过氧化氢组相比,细胞增殖率升高,凋亡细胞数显著减少,差异均有统计学意义(均为P0.05)。2、青蒿素组ARPE-19细胞SOD含量显著增加(P0.05);与过氧化氢组相比,青蒿素预保护组细胞内SOD含量明显增高(P0.05),说明青蒿素能增加细胞内抗氧化物质,减少细胞凋亡。与对照组相比青蒿素组ROS阳性细胞减少(P0.05);与过氧化氢组相比,青蒿素预保护组ROS阳性细胞亦明显减少(P0.05),说明青蒿素可减少过氧化氢诱导细胞内活性氧物质积聚。3、Hoechst33342染色中,青蒿素预保护组与过氧化氢组相比ARPE-19细胞凋亡数量减少;JC-1法检测线粒体膜电位,荧光染色显示青蒿素预保护组与过氧化氢组相比绿色荧光减少,红色荧光增多,说明青蒿素减少细胞线粒体膜电位的缺失,使凋亡细胞数减少。Western Blot检测发现,青蒿素能促进ARPE-19细胞内AKT的磷酸化表达,青蒿素预保护组与过氧化氢组相比细胞内活化的Caspase-3、PARP表达量降低,Bcl-2表达增高。差异有统计学意义(均为P0.05)4、Western Blot检测抗氧化应激通路Nrf2/HO-1/Keap1,青蒿素预保护组与过氧化氢组相比ARPE-19细胞内Nrf2、HO-1相对表达升高,Keap1相对表达降低。差异有统计学意义(P0.05)。结论1、青蒿素能促进ARPE-19细胞增殖,增加ARPE-19细胞内抗氧化物酶SOD的含量,减少氧化应激导致的细胞内活性氧物质聚集,从而减少过氧化氢诱导ARPE-19细胞凋亡。2、青蒿素可以降低Caspase-3、PARP的表达,减少过氧化氢诱导ARPE-19细胞凋亡;促进抗氧化应激Nrf2/HO-1/Keap1通路中抗氧化应激分子Nrf2及其下游靶分子HO-1表达,抑制过氧化氢诱导ARPE-19细胞氧化应激损伤。
【学位授予单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：
或 GAPDH 作为内参照。实验重复 3 次后进行统计学分析。计学处理PSS 19.0 统计学软件进行统计分析。符合正态分布的计量资料用示，两两比较采用 t 检验，使用单因素方差分析进行多组间比较，认差异有统计学意义。结 果蒿素对 ARPE-19 细胞增殖的影响 法检测不同浓度青蒿素对 ARPE-19 细胞增殖率的影响，结果显50 μmol/L 浓度之间对细胞均具有增殖作用，青蒿素浓度为 30 增殖作用最强 (均为 P<0.01)，见图 1。MTT 实验中青蒿素预保组相比细胞增值率明显增加(P<0.05，F=24.41)，见图 2。
图 2 MTT 法检测各组细胞增殖率( x±s )：与对照组相比，*P<0.05；与过氧化氢组相比，#P<0.05,F=24.41 青蒿素对 ARPE-19 细胞内 SOD 含量的影响结果发现，与对照组相比，青蒿素组 ARPE-19 细胞中 SOD 含05)；与过氧化氢组相比，青蒿素预保护组细胞内 SOD 含量明05)，见图 3。说明青蒿素可以增加细胞内抗氧化物酶的含量，从-19 细胞抗氧化应激能力。
图 3 各组细胞内 SOD 含量( x±s )：与对照组相比，*P<0.05, 与过氧化氢组相比,#P<0.05，F=46.23 青蒿素对 ARPE-19 细胞内 ROS 的影响C-FHDA 荧光探针结合细胞内活性氧物质使细胞产生高强度绿色荧和数量反应各组 ROS 阳性细胞数目多少。实验发现，与对照组相比S 阳性细胞减少(P<0.05)；与过氧化氢组相比，青蒿素预保护组 RO明显减少(P<0.05)，见图 4、5。说明青蒿素保护 ARPE-19 细胞，诱导细胞氧化应激损伤产生的活性氧自由基的积聚。
本文编号：2771165
【学位授予单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：
或 GAPDH 作为内参照。实验重复 3 次后进行统计学分析。计学处理PSS 19.0 统计学软件进行统计分析。符合正态分布的计量资料用示，两两比较采用 t 检验，使用单因素方差分析进行多组间比较，认差异有统计学意义。结 果蒿素对 ARPE-19 细胞增殖的影响 法检测不同浓度青蒿素对 ARPE-19 细胞增殖率的影响，结果显50 μmol/L 浓度之间对细胞均具有增殖作用，青蒿素浓度为 30 增殖作用最强 (均为 P<0.01)，见图 1。MTT 实验中青蒿素预保组相比细胞增值率明显增加(P<0.05，F=24.41)，见图 2。
图 2 MTT 法检测各组细胞增殖率( x±s )：与对照组相比，*P<0.05；与过氧化氢组相比，#P<0.05,F=24.41 青蒿素对 ARPE-19 细胞内 SOD 含量的影响结果发现，与对照组相比，青蒿素组 ARPE-19 细胞中 SOD 含05)；与过氧化氢组相比，青蒿素预保护组细胞内 SOD 含量明05)，见图 3。说明青蒿素可以增加细胞内抗氧化物酶的含量，从-19 细胞抗氧化应激能力。
图 3 各组细胞内 SOD 含量( x±s )：与对照组相比，*P<0.05, 与过氧化氢组相比,#P<0.05，F=46.23 青蒿素对 ARPE-19 细胞内 ROS 的影响C-FHDA 荧光探针结合细胞内活性氧物质使细胞产生高强度绿色荧和数量反应各组 ROS 阳性细胞数目多少。实验发现，与对照组相比S 阳性细胞减少(P<0.05)；与过氧化氢组相比，青蒿素预保护组 RO明显减少(P<0.05)，见图 4、5。说明青蒿素保护 ARPE-19 细胞，诱导细胞氧化应激损伤产生的活性氧自由基的积聚。
【参考文献】
相关期刊论文 前2条
1 曹红卫;郭毅斌;魏利召;王宁;曲海;郑江;;青蒿素对脓毒症大鼠肝脏脂质过氧化损伤的影响[J];中国临床药理学与治疗学;2006年08期
2 曹红卫,郭毅斌,王宁,魏利召,王俊,周红,郑江;青蒿素对脓毒症大鼠的保护作用[J];第三军医大学学报;2005年17期
本文编号：2771165
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