高效液相色谱荧光标记测定栝楼中脂肪酸和酚酸

发布时间：2020-08-01 09:39

【摘要】：栝楼作为果实类中药材,富含黄酮、皂苷、生物碱、不皂化物等化学有效成分。但是其有效成分至今不甚明确,药理活性较强的脂肪酸、三萜皂苷、生物碱、黄酮等成分的化学研究虽有报道但深度不够。栝楼药材的质量检测缺乏有效的检测标准,所以将药材的特定化学组分含量作为药材的检测标准具有一定的意义,而建立快速稳定的含量测定方法是监管药材、完善药材质量评价技术体系的关键。本论文围绕栝楼的脂肪酸和酚酸活性成分分离分析开展,采用高灵敏荧光探针和反向反相高效液相色谱技术,考察了超声萃取和基质固相萃取两种方法对栝楼中脂肪酸和酚酸的萃取效率,为科学评价栝楼中脂肪酸和酚酸的含量建立稳定、快速、可靠的分析方法。本论文的主要研究内容如下:第一章简述了固相萃取的方法应用进展,介绍了各种固相萃取剂的制备方法以及在各种组分测定中的研究进展。第二章合成了荧光标记试剂2-(9-吖啶酮) 乙酰肼(OAAH),采用1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)为荧光标记试剂和脂肪酸的缩合剂,在20 min内完成了脂肪酸的荧光标记衍生。通过对衍生化反应条件和色谱条件的优化,并将该方法用于栝楼根、茎、叶、种和皮中脂肪酸的分离分析。结果表明,建立的脂肪酸分离分析方法线性范围宽、重现性好,适用于天然植物中的脂肪酸分析测定。第三章合成了一种氨基修饰的介孔氧化硅材料作为固相萃取剂,采用基质固相萃取的方法达到对栝楼脂肪酸的快速分离和分析。优化了基质固相萃取条件,确定了采用20 mg栝楼样品最佳条件为:分散剂用量,30 mg;洗脱溶剂,甲醇与盐酸体积比6:4;研磨时间,120 s。采用基质固相分散方法测得的栝楼各部位脂肪酸含量与超声萃取方法测得的脂肪酸含量差别在5%以内。表明本文合成了一种新型脂肪酸固相萃取剂,提高了脂肪酸萃取效率,简化了萃取步骤。第四章采用超声萃取的方式提取了栝楼中的酚酸,利用紫外检测器检测,通过色谱条件的优化,建立了有效的色谱分离方法,完成了对8种酚酸的分离测试,并将其用于栝楼中的酚酸的测定。
【学位授予单位】：青海师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284.1
【图文】：

溶胶-凝胶涂层,基本步骤

图 1-1 溶胶-凝胶涂层技术的基本步骤着缩合的进行，硅氧烷键数量逐渐增加，单个分子在溶胶中桥连聚集在液几百纳米的固体颗粒胶体悬浮液。当溶胶颗粒聚集或交联成网络时，形成后，挥发物被挥发掉，相应的薄膜可以浸涂在基质上，即可得到固相微萃用这种办法，聚乙二醇涂层已基本用于苯系物 BTEX 的测定[4， 5]。聚二甲与氯甲酸异丁酯衍生化作为涂层被应用到右美沙芬[6]]和硒代氨基酸的测定烷 PDMS 的混合聚合物和聚乙烯醇涂层在农药[7，8]、多环芳烃[9]和相关的到广泛应用。通过苯基三甲氧基硅烷[10]水解缩合，将非极性的苯嫁接在石英到对非极性化合物，如苯、甲苯、乙苯、2-辛酮、苯甲醛、苯乙酮、二甲等有机物的分离测定。各种冠醚涂料已经用于测定苯系物 BTEX[11]、有芳香胺、和酚类化合物[14-15]。涂层的极性决定了吸附分离性能。碳基材16]和一卤代苯[17]，而富含羟基的多烯涂层[18]更多应用于多氯联苯(PCDs)基甲基丙烯酸酯[19]涂层可分析复杂体系如啤酒中的芳香化合物。用溶胶-凝胶技术和交联方法可得到丙烯酸酯/硅氧烷共聚物混合涂层，这

路线图,吖啶酮,乙酰肼,路线

2-(9 吖啶酮)-乙酰肼的合成路线)2-(9-吖啶酮)-乙酸的合成 150 mL 圆底烧瓶中依次加入吖啶酮 10 g，氢氧化钾 15 g，二甲基亚砜 1-125℃下搅拌 20 min。在 30 min 内逐滴滴加 30 mL 溴乙酸乙酯溶液。搅物转移至装有 10g 氢氧化钾的 300 mL 溶液的烧杯中，将混合物在 100℃in。冷却至室温，然后过滤。滤液用 4 mol/L 盐酸调节 pH 值至 3。通过过体，用水洗涤，将粗产品在室温下干燥 48 h 后，用乙腈、吡啶(体积比 1: 3 次，得到金黄色晶体，产率为 81.0 %。)2-(9-吖啶酮)-乙酸乙酯的合成 250 mL 圆底烧瓶中加入 2-(9-吖啶酮)-乙酸(5 g)和乙醇(150 mL)，室温搅in 内滴加 20 mL 浓硫酸的溶液。在剧烈搅拌下将混合物在 80℃加热回流旋转蒸发仪蒸出未反应的溶剂乙醇，然后将烧瓶中的残余物转移到装有后滴加饱和碳酸钠溶液至溶液中和至 pH 值为 7.0。然后过滤回收析出的沉洗涤三次。将所得产物在室温下干燥 2 天，得到黄色结晶，产率为 85.2％)2-(9 吖啶酮)-乙酰肼的合成

路线图,乙酰肼,吖啶酮,脂肪酸

高效液相色谱荧光标记测定栝楼中脂肪酸和酚酸分别称取适量的脂肪酸标准品于 N，N 二甲基甲酰胺(DMF)中配成浓度脂肪酸单标溶液，放置在 4℃的黑暗环境下避光保存。脂肪酸的混合标准溶酸单标于使用前采用乙腈溶剂稀释获得。称取3.5 mg OAAH溶于10 mL乙腈mol/L 的衍生试剂溶液。所有试剂均放在 4℃冰箱中保存。2.2.2.2 标准品的衍生化向含有适量所提取样品或标准品的 2 mL 安瓿瓶中依次加入 100 μL 衍生(0.02 mol/L) EDC，封口后于 85 ℃水浴反应 20 min。然后在室温冷去，待冷入适量乙腈定容至 1 mL。经过 0.22 μm 有机滤膜后取 10 μL 进样分析。

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