白芥子贴对哮喘大鼠免疫功能基因表达调控的研究

发布时间：2020-08-02 15:11

【摘要】：目的本实验通过基因芯片技术建立基因功能表达谱数据库,筛选与哮喘大鼠免疫功能相关基因,为白芥子贴治疗哮喘提供实验依据。方法将雄性清洁SD大鼠30只,4~6周龄,体重(150±20)g,按均衡随机法(按体重分层)分为3组,分别为正常组(A组)、模型组(B组)、治疗组(C组),每组实验动物10只。第1天,模型组、治疗组两组分别用新鲜配制的OVA,100mg辅以氢氧化铝凝胶200mg及生理盐水1ml的混悬液在大鼠两腹股沟、后足跖,共4点做皮下注射,每点0.2ml,同时腹腔注射0.2ml,正常组不做任何处理。第15天处死模型组中的5只大鼠,收集并保存需检测部位的标本,以便于确认造模是否成功,其余5只留用作为治疗对照。第15~24天治疗组开始进行白芥子贴贴敷治疗,穴位贴敷前用8%硫化钠在穴位处脱毛,将药丸放在医用脱敏胶贴上,分别贴于大鼠肺俞(双)、定喘、膻中、膏肓(双)处,每天1次,每次贴敷2~4h,贴敷治疗后,将实验组致敏的大鼠置于密闭容器内用超声雾化器雾化吸入1%OVA生理盐水悬液,每天30min,进行激发诱喘1次,连续10天。模型组剩余5只予以空白贴敷,处理方法同治疗组。正常组自由进食常规饲料和水。第25天处死大鼠,采集肺组织标本。进行RNA的提取及鉴定、基因芯片的检测。结果1.哮喘大鼠在行为学以及病理学方面均有明显改变,揭示白芥子贴治疗疗效显著。2.从散点图、火山图中可以得出,正常组与模型组相比,上调、下调基因表达差异显著;模型组与治疗组相比,下调基因表达差异显著;治疗组与正常组相比,上调基因表达差异显著。3.送检9只大鼠的肺组织中提取的基因,将所得基因结果根据基因库等数据进行剔除,按照p0.05,以基因表达倍数值的绝对值≥2.0为阈值来确定差异表达基因。结果有统计学意义,这些基因与哮喘的发病相关。正常组与模型组差异表达基因结果中,下调基因有:gavor、MTA-TC1900000、MTA-TC0800002、RGD7740611-1、Dbp、blykly、Scd1;上调基因有:Loc100909700、MTA_TC0200000、Ccr3、derchoy、barsar、Srpx、Ccl2、Fcamr、Sele;模型组与治疗组差异基因表达中,下调基因有Sele、Fcamr、derchoy;上调基因有glogey、Mzbl;正常组与治疗组差异基因表达中,上调基因有Loc100909700、Ccr3;下调基因有Dbp,差异基因表达有统计学意义。4.将正常组、模型组和给药组的差异表达基因进行比较,通过热图可以发现,基因的上调下调维持着大鼠的免疫功能,差异有统计学意义,与哮喘有关的上调基因有9个分别是:LOC100909700、Sele、Srpx、derchoy、barsar、Ccr3、Fcamr、Ccl2、MTA-TC0200000;下调的基因有8个分别是:RGD7740611-1、blykly、MTA-TC1900000、gavor、Scd1、Meyflo、MTA-TC0800002、Dbp。结论1.本次实验大鼠在行为学上有明显变化,在病理学改变中,变化显著。研究证明本实验造模成功,经白芥子贴贴敷治疗后,气道免疫-炎症及气道重塑有所改善,白芥子贴贴敷治疗疗效显著。2.差异表达基因的上下调变化,与哮喘免疫学发病机制相符合,其中参与免疫调节的基因有:MTA-TC1900000、RGD7740611-1、Srpx、Fcamr、Ccl2;参与气道免疫-炎症的基因有:Loc100909700Ccr3;参与神经免疫调节的基因有:MTA-TC0800002、参与遗传免疫的基因有:MTA-TC0200000。3.根据实验研究表明,差异表达基因在哮喘时和治疗后差异显著,通过散点图、火山图、热图比较可以发现,大鼠致敏后基因改变明显,参与气道炎症反应的基因原本下调变为上调,参与机体免疫功能的基因原本上调变为下调,部分不表达或低表达基因开始表达;经过治疗后基因上调、下调改变与正常组相一致,但是数值仍有相差,说明白芥子贴有一定的治疗效果,为哮喘免疫方面的治疗研究奠定基础。
【学位授予单位】：山西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

散点图,散点图,白芥子,基因表达调控

白芥子贴对哮喘大鼠免疫功能基因表达调控的研究；C2，C4，C9，通过 3 组结果中筛选基因，进行对比分析差异表达基因散点图结果附图，具体结果如下（图 1-图

散点图

模型组与治疗组差异基因散点图结果比较

散点图,散点图,倍数,蓝色

图 3 治疗组与正常组差异基因散点图结果比较于展示两个样本的分布集中程度，以及差异基因的信号值差异基因，蓝色表示下调差异基因。落在图形中 y=x 直，其代表这个探针点在两张芯片中信号值差异（Fold Ch两侧 45°线之外的点，其代表这个探针点在两张芯片中信号，而红色代表 2 倍上调基因，蓝色代表 2 倍下调基因。从与模型组比较中发现部分上、下调基因差异表达倍数大于发现部分下调基因差异表达倍数大于 2，显著性较高；正调基因差异表达倍数大于 2，显著性较高。

【参考文献】