两株娃儿藤内生真菌Diaporthe pseudomangiferae和Aspergillus flavus中的化学成分

发布时间：2020-08-02 15:30

【摘要】：内生真菌独特的生存环境使其具有产生新颖化合物的潜力,是活性天然产物的重要来源。间座壳属真菌Diaporthe pseudomangiferae以及曲霉属真菌Aspergillus flavus是从有毒药用植物娃儿藤中分离得到的两株内生真菌。为获得结构新颖的活性化合物,本研究综合利用多种色谱分离技术(硅胶柱色谱,凝胶柱色谱,反相制备液相色谱等)对这两株内生真菌乙酸乙酯部位的化学成分进行了系统研究。同时运用UV,IR,MS,1DNMR,2DNMR,ECD等光谱、波谱技术对分离得到的单体化合物进行结构测定或鉴定。共从两株内生真菌中获取了50个化合物(1*-50),包括21个新化合物:从D.pseudomangiferae中分离鉴定了 28个化合物(1*-28),其中10个为新化合物(1*-10*);从A.favus中分离鉴定了 22个化合物(29*-50),其中11个为新化合物(29*-39*)。化合物1*-6*为dothiorelone G(Csn-B)的衍生物。化合物29*是两个杜松烷型倍半萜通过酯键形成的二聚体。化合物30*-36*均为4,5位双键且15位为羧基的杜松烷型倍半萜。本研究对分离得到的化合物进行了系统的体外药理模型筛选,包括抗纤维化、细胞毒、肝保护、抗菌、抗炎、抗糖尿病等活性。结果显示:(1)化合物1*,4*,10*,14,16,19,20,27具有抑制人肺成纤维细胞活化的作用,抑制率分别为17.36%,59.17%,64.04%,62.92%,41.05%,32.85%,52.05%,46.26%(10μM)。(2)化合物18,19,21,23对人胃癌细胞BGC-823具有选择性细胞毒作用,IC50分别为8.14,4.39,1.47,8.56μM。化合物43对人结直肠癌细胞HCT-116,人肝癌细胞HepG2,人胃癌细胞BGC-823,人肺癌细胞A549,人乳腺癌细胞MCF7具有细胞毒活性,IC50分别为4.66,7.37,6.42,3.76,6.91 u。化合物49对人乳腺癌细胞MCF7具有选择性细胞毒活性,IC50为2.58μM。(3)在抗糖尿病模型中,化合物18具有抑制PTP1B酶的活性,IC50为1.44μM。(4)化合物32-36,39,42-44,46可以改善扑热息痛(APAP,8mM)对人肝癌细胞HepG2的损伤。此外,本研究对杜松烷型倍半萜的生源途径进行探讨。推测化合物29*-36*以及40-42是由关键中间体Ⅰ和Ⅱ转化形成。其中,中间体Ⅱ经过Bayer-Villiger反应形成1,2位裂环或2,3位裂环的杜松烷型倍半萜。
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R284.1;R285
【图文】：

化合物,信号,高分辨质谱,结构鉴定

逦２７逦２８逡逑图２．１化合物１－２８的结构逡逑２．１．３新化合物的结构鉴定逡逑化合物邋１＊邋ａｅｅｔｏｘｙｌｄｏｔｈｉｏｒｅｌｏｎｅ邋Ｂ逡逑ＯＨ邋Ｏ逦ＯＨ邋Ｏ逡逑Ｈ邋愚，，２＂逡逑图２．２化合物１＊的结构及其主要的１Ｈ－＾邋ＣＯＳＹ和ＨＭＢＣ信号逡逑化合物１＊白色粉末；高分辨质谱（ＨＲ－ＥＳＩ－ＭＳ）显示准分子离子峰ｍ／ｚ逡逑４０３．１７２８邋［Ｍ邋＋邋Ｎａ］＋，提示化合物１＊的分子式为Ｃ２０Ｈ２８Ｏ７。屮ＮＭＲ图谱（表２．３）逡逑３６逡逑

化合物,信号,甲基,乙酰化衍生物

北京协和医学院＆中国医学科学院逦硕士研究生学位论文逡逑显示化合物邋１＊具有邋２邋个芳香氢信号邋ｄ＇Ｈ邋６．２６邋（１Ｈ，ｄ，邋Ｊ＝邋２．２邋Ｈｚ．邋Ｈ－６邋），邋６．２０邋（１Ｈ，邋ｄ，Ｊ逡逑＝２．２邋Ｈｚ，Ｈ－４）；邋３邋个甲基信号＆邋２．０３邋（３Ｈ，邋ｓ，Ｈ－２＂），邋１．２５邋（３Ｈ，ｔ，■／＝邋７．１邋Ｈｚ，Ｈ－２，），０．８９逡逑（３Ｈ，邋ｔ，７．５邋Ｈｚ，Ｈ－１６）。１３Ｃ邋ＮＭＲ图谱（表２．２）显示化合物１＊具有３个羰基信号逡逑处２０８．６邋（Ｃ－９），１７３．５邋（Ｃ－１），邋１７２．９邋（Ｃ－ｒ）；邋６邋个芳香碳信号处１６１．３（（：－５），１５９．８（（：－逡逑７），邋１３７．０邋（Ｃ－３），邋１２１．２邋（Ｃ－８），邋１１１．７邋（Ｃ－４），邋１０２．７邋（Ｃ－６）；邋１邋个连氧次甲基信号扣邋７６．９逡逑（Ｃ－１４）；邋７邋个亚甲基信号扣６１．８（（：－１，），４５．０（（：－１０），４０．５（（：－２），３４．６（（：－１３），２８．１（＜：－逡逑１５），２６．２（０１２），２５．４（（：－１１）和３个甲基信号处２１．１（（：－２＂），１４．５（（：－２，），９．９（（：－１６）。逡逑比对核磁数据，推测化合物１＊是化合物１４的Ｃ－１４位羟基乙酰化衍生物。ＨＭＢＣ逡逑图谱显示Ｈ－１４，邋Ｈ－２〃与Ｃ－ｌ〃相关，Ｈ－１２，邋Ｈ－１６，邋Ｈ－２＂与Ｃ－１４相关进一步确定化合逡逑物１＊的结构如图２．２所示。采用手性柱对化合物１＊进行分析（图２．３），发现化逡逑合物１＊存在（＋）／（－）两种异构体，比例为５：邋３。结合１＊的［６１招值（＋邋１．６０，邋ｃ邋０．２５，逡逑ＭｅＯＨ），判断化合物１＊为未完全消旋的外消旋体。综上

化合物,信号,乙酰化衍生物,外消旋体

比对核磁数据，推测化合物１＊是化合物１４的Ｃ－１４位羟基乙酰化衍生物。ＨＭＢＣ逡逑图谱显示Ｈ－１４，邋Ｈ－２〃与Ｃ－ｌ〃相关，Ｈ－１２，邋Ｈ－１６，邋Ｈ－２＂与Ｃ－１４相关进一步确定化合逡逑物１＊的结构如图２．２所示。采用手性柱对化合物１＊进行分析（图２．３），发现化逡逑合物１＊存在（＋）／（－）两种异构体，比例为５：邋３。结合１＊的［６１招值（＋邋１．６０，邋ｃ邋０．２５，逡逑ＭｅＯＨ），判断化合物１＊为未完全消旋的外消旋体。综上，化合物１＊命名为逡逑ａｃｅｔｏｘｙｄｏｔｈｉｏｒｅｌｏｎｅ邋Ｂ。逡逑：：：＾－邋Ｕ｜逦ｎ－ｏ－，，…逦逦逦邋．．Ｔ｜１．｜ｉｒ＾Ｌ川」■邋ｌ邋■逡逑图２．３化合物１＊的手性分析图逡逑化合物邋２＊邋（１５ｉＳ）－ａｃｅｔｏｘｙｄｏｔｈｉｏｒｅｌｏｎｅ邋Ａ逡逑ＯＨ邋Ｏ逦３逦Ｏ邋Ｂ逡逑0邋１邋0邋１，邋ｚ逦0邋１邋0邋１，邋２，逡逑Ａ逡逑图２．４化合物２＊的结构及其主要的１Ｈ」Ｈ邋ＣＯＳＹ和ＨＭＢＣ信号逡逑３７逡逑

【参考文献】