山楂降血糖、降血脂活性成分及机理初探

发布时间：2020-08-03 08:34

【摘要】：本论文对山楂多酚和多糖中的活性物质进行分离纯化、结构鉴定和作用机理初探,同时对山楂脂类提取物进行成分分析和活性评价。以期促进山楂的开发利用,为山楂资源的开发利用奠定理论基础。主要研究方法及结果如下:(1)以‘山里红’山楂为材料,采用乙醇浸提、有机溶剂分级萃取、薄层层析、柱层析等分离纯化方法,同时结合活性追踪分离模式对山楂多酚中的活性成分进行提取和分离纯化;采用紫外分光光度法、荧光色谱法对山楂多酚活性成分的作用机理进行初探;采用核磁共振波谱法结合文献数据对活性成分的结构进行鉴定。得到结果如下:山楂多酚乙酸乙酯萃取物(AF)具有最强的α-葡萄糖苷酶和胰脂肪酶抑制活性,其抑制率的IC_(50)值分别为(98.26±0.21)μg/mL和(6.37±0.61)mg/mL。山楂多酚二氯甲烷萃取物(DF)具有最强的胆固醇脂酶抑制活性和DPPH?清除能力,AF次之。DF抑制胆固醇脂酶和清除DPPH?的IC_(50)值分别为(6.88±0.26)mg/mL和(65.31±0.21)μg/mL。从AF中分离纯化得到5个单体化合物(A-E),鉴定出分别为熊果酸(B)、山奈酚(D)、槲皮素(E),其中化合物A和化合物C的结构还有待进一步鉴定。对单体化合物B、C、D、E进行活性研究,结果显示4个化合物表现出不同强度的α-葡萄糖苷酶、胰脂肪酶抑制活性和DPPH?清除能力,其中化合物E(槲皮素)对上述酶具有最强的的抑制能力和最强的DPPH?清除能力。研究槲皮素对α-葡萄糖苷酶的抑制机理,结果显示槲皮素对α-葡萄糖苷酶的抑制作用是可逆非竞争性抑制,并计算得到其抑制常数Ki为0.08 mmol/L。进一步试验结果显示,槲皮素是通过引起α-葡萄糖苷酶构象的改变从而产生抑制作用。(2)以‘山里红’山楂为材料,采用有机溶剂除脂、超声波辅助热水浸提、乙醇沉淀、Sevage除蛋白、膜分离、柱层析等分离纯化方法,同时结合活性追踪分离模式对山楂多糖中的活性成分进行提取和分离纯化;采用紫外分光光度法、荧光色谱法对山楂多糖活性成分的作用机理进行初探;采用红外光谱法、GPC法、柱前衍生化-HPLC法对活性均一多糖的一级结构进行鉴定。得到结果如下:从山楂粗多糖中分离纯化得到6个多糖组分PCF1-PCF6,其中PCF1显示出较好的α-葡萄糖苷酶和胰脂肪酶抑制活性。对PCF1进行进一步的纯化,得到均一多糖PCF1-1。研究PCF1-1对α-葡萄糖苷酶的抑制机理,结果显示PCF1-1对α-葡萄糖苷酶的抑制作用是可逆混合性抑制,并计算得到其抑制常数Ki为0.66 mg/mL。对PCF1-1的一级结构进行测定,结果表明其重均分子量Mw为26530 Da,数均分子量Mn为8755 Da,Z均分子量Mz为7.339×10~4 Da,且主要由甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和岩藻糖九种单糖组成。同时也使用红外光谱对其特征性官能团进行了分析。(3)以‘山里红’山楂为材料,采用石油醚浸提法得到山楂脂类提取物;采用紫外分光光度法对其生物活性进行测定;同时采用滴定法对其理化指标进行检测;最后采用气相色谱质谱联用法对其脂肪酸组成进行分析。结果显示:山楂脂类提取物对α-葡萄糖苷酶和胰脂肪酶均有一定的抑制作用,也同样对DPPH?具有清除能力。经测定其酸值为(62.73±0.92)mg/g,过氧化值为(12.98±0.35)mmol/mL,皂化值为(593.89±3.21)mg/g,碘值为(102.82±0.91)g/100g。山楂脂类提取物由10种脂肪酸组成,其中以不饱和脂肪酸为主,主要为亚油酸(44.47%)、亚麻酸(24.76%)、棕榈酸(12.26%)和肉豆蔻酸(6.23%)。
【学位授予单位】：浙江师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285;R284
【图文】：

12山楂乙酸乙酯萃取物(AF)的分离流程如图 2.1 所示。采用干法上样：称取酸乙酯萃取物（AF）20 g，用乙酸乙酯溶解后与等质量的 100-200 目硅胶混合匀，50℃ 烘干后研磨得到均匀粉状硅胶样品。取上述的硅胶样品上样，进200-300 目的硅胶柱层析。洗脱剂采用石油醚（PE）-乙酸乙酯（ETOAC）-甲（MeOH），洗脱梯度依次为 PE：ETOAC（100%PE，9:1，8:2，7:3，6:4，54:6，3:7，2:8，1:9，100% ETOAC）；ETOAC：MeOH（100% ETOAC ，8:26:4，5:5，4:6，3:7，1:9，100% MeOH）。每 150 mL 的洗脱液收集为一瓶，共集 167 瓶，减压浓缩后，经薄层层析、紫外灯检测及显色剂（硫酸-乙醇）显色合并较纯的相同组分，经减压蒸馏，获得 5 个不同的组分（Ⅰ-Ⅴ）。之后将五

测定了不同浓度 AF 对 α-葡萄糖苷酶的抑制活性，结果见图2.3 和图 2.4。从图中可以看出，在实验浓度范围内，随着浓度升高，AF 对 α-葡萄糖苷酶抑制率也逐渐上升，当浓度大于 300 μg/mL 后，α-葡萄糖苷酶抑制率升高的速度渐缓。此外，AF 对 α-葡萄糖苷酶抑制的 IC50值为（98.26±0.21）μg/mL，阳性对照-阿卡波糖的 IC50值为（0.16±0.02）μg/mL。两者虽相差较大，但由于阿卡波糖为纯化学物质，而 AF 为天然植物萃取物，结果同样能说明 AF 具有 α-葡萄糖苷酶抑制能力。

测定了不同浓度 AF 对 α-葡萄糖苷酶的抑制活性，结果见图2.3 和图 2.4。从图中可以看出，在实验浓度范围内，随着浓度升高，AF 对 α-葡萄糖苷酶抑制率也逐渐上升，当浓度大于 300 μg/mL 后，α-葡萄糖苷酶抑制率升高的速度渐缓。此外，AF 对 α-葡萄糖苷酶抑制的 IC50值为（98.26±0.21）μg/mL，阳性对照-阿卡波糖的 IC50值为（0.16±0.02）μg/mL。两者虽相差较大，但由于阿卡波糖为纯化学物质，而 AF 为天然植物萃取物，结果同样能说明 AF 具有 α-葡萄糖苷酶抑制能力。

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本文编号：2779376