肝郁脾虚型抑郁症大鼠海马和肠道BDNF及其受体TRKB表达与逍遥散干预研究

发布时间：2020-08-06 22:45

【摘要】：目的查阅相关文献,从肝脾与情志的关系相关理论切入论治抑郁症,进一步探讨肝郁脾虚型抑郁症的中医发病机制。动物实验采用慢性不可预计温和应激(CUMS)方法造模,成功复制肝郁脾虚型抑郁症大鼠模型。从肝郁脾虚型抑郁症机体的抑郁状态和胃肠道反应切入,研究肝郁脾虚型抑郁症发生机制中BDNF及其受体TRKB和肠道菌群如何对中枢神经系统及肠道神经系统产生影响。并结合BDNF及其受体TRKB在海马与肠道中的表达变化,肠道菌群的改变及结肠上皮超微结构的变化,探讨逍遥散治疗肝郁脾虚型抑郁症的作用机制。方法1.理论研究:查阅及整理古代及现代相关文献,梳理肝、脾两脏的生理功能与情志的关系,将肝、脾与抑郁症密切联系起来进行总结归纳,并将历代中医文献与抑郁症相关的病症进行对比总结。解析逍遥散的药物组成,整理并分析其对肝郁脾虚型抑郁症的作用机理。2.实验研究:选取SPF级别的SD雄性大鼠50只,随机分为5组,分别为正常组、模型组、氟西汀组、逍遥散组、双歧杆菌组。采用成熟的慢性不可预计温和应激方法造模,造模时间为6周,在造模期间观察大鼠宏观表征的变化,每周记录体重及摄食量,造模同时分别给每组灌胃给药6周。采用糖水偏好实验及旷场实验观察其行为学的改变。取材后采用透射电镜观察结肠上皮超微结构,主要观察肠道屏障的变化,PCR方法检测BDNF及其受体TRKB基因在海马及肠道中的表达变化。16SrDNA的方法检测结肠中肠道菌群的改变。结果1.宏观表征的变化:造模前,各组大鼠精神状态良好,比较活跃,皮毛润泽,脱毛较少,大便成形。从造模后第三周开始模型组大鼠出现精神差,倦怠,或嗜卧,反应较前迟钝,喜静喜蜷缩在角落。皮毛干枯无光泽呈黄色,脱毛多,摄食量较前减少,大便部分不成形,体重增加缓慢。2.行为学测试:糖水偏好实验结果表明模型组大鼠对糖水的偏好程度明显低于正常组及治疗组(P0.01),这反映了模型组大鼠存在精神抑郁样的变化。旷场实验结果表明模型组大鼠的活动总路程明显比其他四组缩短(P0.01),休息时间比其他四组明显增长(P0.01),在中央区活动的路程亦明显变短(P0.01);模型组大鼠在中央区活动时感觉不安,多在四周角落蜷缩。3.超微电镜观察:模型组与正常组比较大鼠结肠上皮细胞分布不匀,密度低,微绒毛肿胀且长短不一,甚者微绒毛脱失、倒伏。还可见线粒体肿胀,线粒体峭模糊,结构难以辨认,内质网明显扩张。部分细胞紧密连接间隙增宽,严重者连接复合体结构破坏。逍遥散组较模型组相比大鼠结肠在电镜下观察其结构变化明显,结肠上皮细胞排列规则,线粒体、紧密连接部分被修复。4.PCR检测BDNF及TRKB在海马和肠道的基因表达:模型组与正常组相比,BDNF及其受体TRKB在大脑海马中的表达明显下降(P0.01),而BDNF及其受体TRKB在肠道中的表达明显上升(P0.01)。三组给药组与模型组相比,结果显示氟西汀、逍遥散、双歧杆菌能显著升高海马中BDNF及TRKB的表达(P0.01),同时能降低肠道中BDNF及TRKB的表达(P0.05)。5.双歧杆菌的16SrDNA检测结果:模型组与正常组相比,双歧杆菌的表达明显下降(P0.01),双歧杆菌组与模型组相比,双歧杆菌的表达明显上升(P0.01),逍遥散组与模型组相比,结果亦有统计学意义(P0.05)。结论1.在抑郁症的发病机制上,肝郁脾虚占有重要的地位。2.肝郁脾虚型抑郁症的发病机制可能与海马中BDNF及TRKB下降,结肠中BDNF及TRKB升高,肠道屏障功能及肠道菌群的变化引起肠道动力和内脏高敏性的改变相关。3.逍遥散能有效的改善肝郁脾虚型抑郁症大鼠的抑郁状态及胃肠功能,其作用机制可能与调控海马及肠道中的BDNF及其受体TRKB的表达和肠道菌群的变化有关,并由此推测BDNF及其受体TRKB和肠道菌群在脑-肠轴的网络中起到重要作用。
【学位授予单位】：湖北中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

分布不匀,倒伏,粒体,微绒毛

图 1 正常组图 2 正常组4.2 模型组电镜结果见图 3 示模型组可见大鼠结肠上皮细胞分布不匀密度低，微绒且长短不一，甚者微绒毛脱失、倒伏，还可见线粒体肿胀，线粒体

电镜图,电镜,分布不匀,倒伏

逍遥散,微绒毛,电镜,大鼠

图 3 模型组图 4 模型组4.3 逍遥散组电镜结果见图 5、图 6 所示逍遥散组大鼠结肠电镜下显示结肠上皮细胞排则，微绒毛分布基本均匀，大小基本一致，细胞间连接完整，形成了

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