四种药用芦荟的活性成分及体外溶栓活性比较研究

发布时间：2020-08-07 10:37

【摘要】：芦荟作为一种传统的药用植物,具有抗炎、抗过敏、免疫调节、抗菌、抗肿瘤、抗病毒等多种药理活性。目前亚洲常用的药用芦荟包括库拉索芦荟(Aloe barbadensis Miller)、中华芦荟(A.vera L.var.chinensis(Haw.)Berger)、开普芦荟(A.ferox Miller)和木立芦荟(A.arborescens Miller)。蒽醌类小分子化合物和蛋白质是芦荟的两类主要活性成分,但目前尚未有对四种药用芦荟中该两类成分的系统比较研究。本论文首先采用HPLC及LC-MS分析比较四种药用芦荟中蒽醌类小分子化合物的差异,其次对蛋白质进行了凝胶电泳分析,并对四种药用芦荟中的差异表达蛋白进行了质谱鉴定及生物信息学分析,最后对芦荟的活性提取物及单体成分进行体外溶栓与纤溶的活性测定。本论文包括五个部分的内容。论文的第一部分为文献综述,首先简要介绍四种药用芦荟,然后总结了芦荟中的主要活性成分,最后对芦荟的生物活性进行了概述。论文的第二部分为四种药用芦荟中蒽醌类小分子化合物的比较分析。首先对四种药用芦荟中的蒽醌类小分子化合物进行总量测定,结果显示库拉索芦荟中蒽醌类小分子化合物的含量最高。进一步HPLC分析表明,四种药用芦荟中蒽醌类小分子化合物的成分与含量存在一定差异,这可能与品种、生长环境等有关。同时方法学验证实验表明针对蒽醌类小分子化合物建立的HPLC方法呈现出良好的线性、重现性、稳定性及灵敏度,适合四种药用芦荟中蒽醌类小分子化合物的常规分析与含量测定。而蒽醌类小分子化合物的LC-ESI-MS/MS鉴定表明Aloesin(芦荟苦素)、Isoaloesin(异芦荟苦素)、Aloenin A(芦荟宁A)等化合物在只有这四种药用芦荟时可用于区分与鉴定这四种药用芦荟。论文的第三部分为四种药用芦荟蛋白质的凝胶电泳分析。首先对适合双向电泳的芦荟蛋白质提取方法进行了比较,确定TCA/丙酮-饱和酚/SDS联合抽提法为芦荟中蛋白质提取的最佳提取方法。SDS-PAGE分析结果显示四种药用芦荟中的蛋白条带数量和光密度曲线略有差异,部分蛋白存在表达差异。进一步2-DE分析结果显示四种药用芦荟中存在54个差异表达蛋白,其中有50个通过MALDI-TOF-MS成功鉴定,功能分析结果显示库拉索芦荟中的类Ran结合蛋白1同系物C、肌动蛋白、NAD-依赖型苹果酸脱氢酶和肉桂醇脱氢酶可能是产生库拉索芦荟叶片肥厚、含水量大的成分之一。中华芦荟中的α-微管蛋白亚基和异黄酮还原酶相似蛋白可能是中华芦荟叶片表面产生白色斑点的成分之一。木立芦荟中的类生长素诱导蛋白PCNT-115异构体1可能是木立芦荟产生纵向生长而明显高于其他芦荟的成分之一。论文的第四部分为四种药用芦荟中活性成分的体外溶栓及纤溶活性测定。对四种药用芦荟中蛋白和总蒽醌提取物以及四个单体蒽醌化合物的体外溶栓与纤溶活性进行评价。结果发现四种药用芦荟中总蛋白和总蒽醌提取物均表现出一定程度的体外溶栓与纤溶活性,并且活性大小与活性物质的含量紧密相关。其中开普芦荟中蛋白提取物的体外药理活性明显强于其他三种芦荟,而库拉索芦荟中总蒽醌提取物的体外药理活性明显强于其他三种芦荟;此外芦荟苷A、芦荟苷B、芦荟苷(A/B)与芦荟大黄素四个单体蒽醌化合物也显示出一定的溶栓活性,且芦荟苷A的活性最强。总之,这些结果可为四种药用芦荟的实际应用提供一定的参考。论文的第五部分为结论与展望。本论文主要对四种药用芦荟中蒽醌类小分子化合物和蛋白质进行了系统比较分析,不仅丰富了芦荟中该两大类化合物的化学成分认识,还可为芦荟的鉴定提供一定参考。另一方面,本论文还对芦荟的溶栓活性与纤溶活性进行了评价,为芦荟在溶栓方面的应用提供科学依据。
【学位授予单位】：重庆大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R284;R285
【图文】：

形貌,外貌,芦荟,形状

重庆大学硕士学位论文更尖锐的小齿，株体老化速度快，但叶片分生能力很强，生长速福建、广东、广西、云南、四川均有种植与栽培，其形貌特点如普芦荟：又称好望角芦荟、青鳄芦荟、非洲芦荟，拉丁学名. ferox），原产于南非。叶片宽而短，皮层较厚，叶片边缘有红颜色呈深绿色，其特征是薄片呈半透明状[14]。其形貌特点如图立芦荟：又称木剑芦荟、鹿角芦荟、直立芦荟、木本芦荟、大loe arborescens Miller（A. arborescens），原产于南非，主要产于达 1-2 米，外形酷似直立的树，叶片呈细长状，长约 30 cm，宽约，背部突出，叶片边缘呈锯齿状，叶片颜色呈灰绿色[15]。其形）所示。

HPLC色谱,蒽醌类,小分子化合物,库拉索芦荟

重庆大学硕士学位论文1.34±0.01 mg/g；而库拉索芦荟、中华芦荟、开普芦荟、木立芦荟蒽醌粗提物中的蒽醌类小分子化合物的含量分别为 314.13±29.71 mg/g，232.41±31.24 mg/g，277.07±8.46 mg/g，267.83±2.12 mg/g，表明库拉索芦荟中蒽醌类小分子化合物的含量最高。2.3.2 蒽醌类小分子化合物 HPLC 分析库拉索芦荟、中华芦荟、开普芦荟、木立芦荟及芦荟苷 A、芦荟苷 B 与芦荟大黄素对照品的 HPLC 色谱图如图 2.2 所示。由此可看出四种药用芦荟中蒽醌类小分子化合物的成分存在明显差异，同时同一成分在不同芦荟中也存在明显差异，该结果也证实了芦荟中蒽醌类小分子化合物的成分及含量随品种的变化而变化。1.001.201.40(e)

色谱图,总离子流,色谱图,开普芦荟

20图 2.3 四种药用芦荟的总离子流色谱图（a）库拉索芦荟；（b）中华芦荟；（c）开普芦荟；（d）木立芦荟1-24：已知化合物；25-43：未知化合物Figure 2.3 The typical total ion chromatogram (TIC) chromatogram of four medicinal aloe(a) A. barbadensis; (b) A. vera var. chinensis; (c) A. ferox; (d) A. arborescens1-24: identified characterized compounds; 25-43: unknown compounds

【参考文献】