加味补中益气汤对EAMG大鼠疗效观察及免疫学机制探讨

发布时间：2020-08-07 23:36

【摘要】：目的:观察加味补中益气汤对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠肌无力症状的改善及治疗过程中大鼠血清ACh R-Ab、TGF-β_1、补体C3、总Ig G和胸腺及脾脏组织液中IL-2、IL-6、IL-17A、IFN-γ的水平的变化,探讨中药治疗重症肌无力(MG)的免疫学机制,为中医药治疗MG提供有意义的实验研究依据。方法:将72只健康雌性LWEIS大鼠(年龄42-62天,体重150-160g),随机数字法取12只作为对照组,其余60只为模型组。运用人工合成的鼠源性ACh R-α亚基97~116肽段为免疫原诱导模型组LWEIS大鼠建立实验动物模型。每只大鼠给予皮下注射乳剂200μl,含鼠源性ACh R-α亚基97~116肽段100μg,在大鼠的背部取4点及双足垫注射,背部每点含40μl,足垫每点含20μl。每只对照组大鼠给予200μl的佐剂与PBS的混合乳剂。初次免疫后第30天及第45天分别于背部4点及双足垫给予同等剂量乳剂免疫。初次免疫50天后开始评价模型,通过抓握实验综合评价大鼠肌力的情况,检测大鼠血清中ACh R-Ab的水平,进行新斯的明试验以及重复神经电刺激测肌电图等判断模型是否成功。最终纳入模型标准的LWEIS大鼠共50只,将造模成功的大鼠随机分成5组,空白组10只给予生理盐水每天3ml灌胃,模型组10只给予生理盐水每天3ml灌胃,中药高浓度组10只给予浓度为64.8mg/kg·d灌胃,中浓度组10只给予浓度为32.4mg/kg·d灌胃,低浓度组10只给予浓度为16.2mg/kg·d灌胃,西药组10只给予浓度为5.4mg/kg·d灌胃,期间记录肌力评分,连续灌胃4周后,采用抗原包被法测ACh R-Ab OD值,酶联免疫法检测血清补体C3、TGF-β_1、Ig G的含量,从脾脏和胸腺提取组织液测IL-17A、IL-6、IL-2,INF-γ的含量。结果:1.根据模型的判定标准,最终纳入EAMG成功模型共50只,造模成功后大鼠出现活动迟缓,毛发不泽。正常组大鼠活动正常,毛发光泽。2.模型组在ACh R-Ab水平及肌力测定方面与空白组有显著统计学意义(p0.01)。3.治疗四周后,取大鼠血清测ACh R-Ab的变化,用药组及模型组与空白组相比,有统计学意义(p0.01),中药组及西药组与模型组相比,有统计学意义(p0.01),中药的高、中浓度组与西药组相比无统计学意义(p0.05),中药低浓度与高浓度及西药组相比有统计学意义(p0.05)。4.大鼠血清测补体C3、TGF-β_1、Ig G滴度的变化,用药组及模型组与空白组相比,有统计学意义(p0.01),中药组及西药组与模型组相比,有统计学意义(p0.01),中药的高、中、低浓度组与西药组相比无统计学意义(p0.05),中药低浓度与中药高、中浓度相比,无统计学意义(p0.05)。5.取大鼠的脾脏和胸腺组织提取组织液,测IL-17A,IL-6,IL-2水平的变化,模型组及用药组与空白组相比,有统计学意义(p0.01),中药组及西药组与模型组相比,有统计学意义(p0.01),中药的高、中、低剂量组与西药组相比,无明显统计学意义(p0.05),中药低浓度与高、中浓度相比,无统计学意义(p0.05)。6.取胸腺、脾脏组织液测INF-γ滴度的变化,模型组及用药组与空白组相比,有统计学意义(p0.01),中药组及西药组与模型组相比,有统计学意义(p0.01),中药高、中浓度组与西药组相比无统计学意义(p0.05),中药低浓度与高浓度、西药组相比有统计学意义(p0.05)。结论:(1)采用鼠源性ACh R-α亚基97~116肽段免疫LWEIS大鼠能成功制备EAMG模型,成功率相对较高。(2)加味补中益气汤能显著减少EAMG大鼠的症状评分,缓解肌无力症状,提示加味补中益气汤对EAMG大鼠模型治疗有效。(3)加味补中益气汤对EAMG大鼠肌无力症状的免疫学机制可能是,一方面上调血清中通过调节TGF-β_1、补体C3的水平表达,减少了神经肌肉接头处的炎症反应;另一方面通过下调中枢免疫器官(胸腺)或/和外周免疫器官(脾脏)组织液中IL-17A,IL-6,IL-2,INF-γ的水平表达,抑制T细胞和B细胞增殖,降低了血清Ig G水平和ACh R-Ab含量,从而减轻肌无力症状。
【学位授予单位】：河南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
【图文】：

图 1： 空 白 组 与 模 型 组 大 鼠 血 清 中 AChR-Ab 的 对 比以看出：ChR 抗 体 （ OD 值 ） 方 面 ， 模 型 组 高 于 空 白 组 ， 具 有 统）。斯的明实验n 后 观察大鼠，大鼠的活动能力较前比较明显增多 ，精得 到改善，在 lennon 评分方面，模型组高于空白组，p<0.05）。见表 3： 3： 模 型 组 大 鼠 在 注 射 新 斯 的 明 前 后 lennon 评 分 比 较 (x n 注 射 前 注 射 后5 0.00± 0.00 0.00± 0.05 1.909± 0.13 1.42± 0.00

统计学 意义（p<0.05）。3.4 重 复神经电刺 激测肌电图:在本实验中，用随机数字法在造模大 鼠 选 出 5 只 做 肌 电 图 ， 测 得 第 5 个 电 位 对 第 1 个 电 位 的 变 化 百 分 比 表 示 减值大于 10%，在检测肌电图后给予大鼠缝合，手术创口涂搽青霉素预感染。 如图 2-7：图 2 EAMG1 号 图 3 EAMG2 号 图 4EAMG3 号

第三章：加味补中益气汤对 EAMG 大鼠的疗效与机制研究（实验 2）表 5 各组大鼠肌力评分的比较 ( x s) △ 与 空 白 组 相 比 ， p<0.01， ▲ 与 模 型 组 相 比 ， p<0.01，▲ ▲与 低 浓 度 组 相 比 ， p<0.05 与 西 药 组 相 比 ， p>0.05组 别 例 数 肌 力空 白 组 10 0± 0模 型 组 10 1.88± 0.103△西 药 组 10 0.7± 0.1414△ ▲▲ ▲ 浓 度 组 10 0.74± 0.1505△ ▲ △ △▲ ▲ 浓 度 组 10 0.82± 0.1619△ ▲ △ △▲ ▲ 浓 度 组 10 0.93± 0.1889△ ▲

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 黄莎;谭利明;;重症肌无力的免疫发病机制研究进展(英文)[J];Neuroscience Bulletin;2010年01期

2 ;TUMOR NECROSIS FACTOR-ALPHA POLYMORPHISM AND SECRETION IN MYASTHENIA GRAVIS[J];Chinese Medical Sciences Journal;2005年02期

本文编号：2784686