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鹿角脱盘不同提取物氨基酸分析及其抗肝癌H22作用研究

发布时间:2020-08-08 07:22
【摘要】:鹿角脱盘作为可再生的生物资源,已有2000多年的用药历史,具有产量大容易获得等优点,且抗肿瘤作用明确,但其抗肿瘤有效部位不清,作用机制不明;骨化程度高,质地坚硬不宜直接使用,极大限制了鹿角脱盘的开发利用;传统加工多以水煎煮法为主,方法单一,对鹿角脱盘加工方法和抗肿瘤作用的研究已势在必行。本实验,首先,利用酸、碱、盐、醇和水5种具有代表性的溶液对鹿角脱盘进行提取,优化得到最佳工艺参数。其次,采用柱前衍生RP-HPLC法对5种提取物的21种氨基酸组成以及含量进行比较分析,初步探索其抗肿瘤作用物质基础。最后,采用肝癌H22荷瘤小鼠模型比较5种提取物中抗肝癌活性,初步筛选抗肝癌活性部位;从免疫学角度阐释作用机制。实验结果如下:1、鹿角脱盘酸溶液、碱溶液、盐液液、醇溶液及水溶液提取物最佳工艺参数分别为:提取温度90℃、提取时间130min、料液比1:25;提取温度90℃、提取时间130min、料液比1:20;提取温度80℃、提取时间130min、料液比1:25;提取温度70℃、提取时间150min、料液比1:25;提取温度100℃、提取时间130min、料液比1:26。鹿角脱盘5种不同提取物提取率由大到小排列顺序为:酸提取物㧐碱提取物㧐水提取物㧐盐提取物㧐醇提取物,其中盐提取物和醇提取物提取率差异不具有统计学意义(P㧐0.05)。2、鹿角脱盘及其5种提取物中9种药用氨基酸占总氨基酸的比例均在60%以上,其中,碱提取物中Tyr、Leu、Lys、Asp、Phe、Met和Glu 7种氨基酸含量最高(P㩳0.05);水提取物中Asp、Gly、Met、Glu和Arg 5种氨基酸含量最高(P㩳0.05);醇提取物中Gly、Arg、Phe、Met和Glu 5种氨基酸含量最高(P㩳0.05);鹿角脱盘碱提取物的E/T值和E/N值高于同类型的阿胶以及海参胶原。鹿角脱盘5种提取物氨基酸含量由高到低依次为:水提取物㧐碱提取物㧐醇提取物㧐酸提取物㧐盐提取物㧐鹿角脱盘超微粉,其中水提取物、碱提取物和醇提取物差异不显著(P㧐0.05)。3、相较模型组,鹿角脱盘及其5种提取物均能显著抑制肿瘤生长促进肿瘤细胞凋亡(P㩳0.05);保护脾脏组织结构,诱导肿瘤组织坏死;提高免疫器官指数和脾淋巴细胞刺激指数(P㩳0.05);提高脾脏和外周血中CD4+/CD8+比值(P㩳0.05),提高血清中细胞因子IL-2、IL-6、IL-12、TNF-α、IFN-γ的含量(P㩳0.05),同时降低免疫抑制细胞因子TGF-β的含量(P㩳0.05),提高肝癌H22荷瘤小鼠的细胞免疫水平;提高血清中三种免疫球蛋白IgE、IgG、IgM的含量(P㩳0.05),提高荷瘤小鼠体液免疫水平。不同提取物抗肿瘤作用不同,其中碱提取物效果最好。
【学位授予单位】:吉林农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R285.5;R284
【图文】:

等高线图,响应曲面,酸溶液,提取物


图 1-1 酸溶液提取物各因素交互作用的响应曲面与等高线图Fig. 1-1 Response surface and contour plots for the pair-wise ineractive effect of three variables1.2.2.2 鹿角脱盘碱溶液提取物提取工艺优化采用 Design Expert 8.0.6 软件以提取率为响应值,进行 3 因素 3 水平的 Box-Behnken实验设计,实验结果如表 1-14 所示。表 1-14 碱提取物响应面实验设计及结果(x ±SD, n=3)Tab. 1-14 Design and results of response surface experiment of alkaline(x ±SD, n=3)编号 温度代码 时间代码 料液比代码 提取率(%)1 -1 -1 0 18.98±1.122 1 -1 0 20.32±1.083 -1 1 0 21.34±1.034 1 1 0 23.83±1.285 -1 0 -1 20.01±1.126 1 0 -1 21.59±1.277 -1 0 1 22.07±1.308 1 0 1 23.04±1.12

等高线图,响应曲面,等高线图,交互作用


图 1-2 碱溶液提取物各因素交互作用的响应曲面与等高线图Fig. 1-2 Response surface and contour plots for the pair-wise ineractive effect of three variables1.2.2.3 鹿角脱盘盐溶液提取物提取工艺优化采用 Design Expert 8.0.6 软件以提取率为响应值,进行 3 因素 3 水平的 Box-Behnken实验设计,实验结果如表 1-16 所示。表 1-16 盐提取物响应面实验设计及结果(x ±SD, n=3)Tab. 1-16 Design and results of response surface experiment of NaCl(x ±SD, n=3)编号 温度代码 时间代码 料液比代码 提取率(%)1 -1 -1 0 6.36±0.962 1 -1 0 7.75±1.063 -1 1 0 8.43±0.994 1 1 0 9.01±1.225 -1 0 -1 6.53±1.106 1 0 -1 7.43±1.217 -1 0 1 7.76±1.16

等高线图,响应曲面,盐溶液,提取物


图 1-3 盐溶液提取物各因素交互作用的响应曲面与等高线图Fig. 1-3 Response surface and contour plots for the pair-wise ineractive effect of three variables1.2.2.4 鹿角脱盘醇溶液提取物提取工艺优化采用 Design Expert 8.0.6 软件以提取率为响应值,进行 3 因素 3 水平的 Box-Behnken实验设计,实验结果如表 1-18 所示。表 1-18 醇提取物响应面实验设计及结果(x ±SD, n=3)Tab. 1-18 Design and results of response surface experiment of ethanol(x ±SD, n=3)编号 温度代码 时间代码 料液比代码 提取率(%)1 -1 -1 0 5.79±1.212 1 -1 0 7.25±1.023 -1 1 0 7.32±0.934 1 1 0 7.90±1.145 -1 0 -1 5.91±1.126 1 0 -1 7.20±1.177 -1 0 1 7.06±1.128 1 0 1 7.98±1.05

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