莪术含药血清调节大鼠HSCs中Hh及Wnt途径相关因子表达的机制研究
发布时间：2020-08-08 14:23
【摘要】：目的研究莪术含药血清调节瘦素(leptin)活化的大鼠肝星状细胞(HSCs)中刺猬(hedgehog,Hh)信号途径和Wnt信号途径相关因子表达的机制。方法将30只清洁级sprague-dawley(SD)大鼠,按随机数字表法,均分3组。分别给予莪术水煎剂、秋水仙碱、生理盐水灌胃取血制备含药血清。用高效液相色谱法(HPLC),测定莪术含药血清中莪术的有效成分。体外培养大鼠HSCs,分为8组:空白组、模型(leptin)组、Hh通路抑制剂(Cyclopamine)组、莪术组、Cyclopamine+莪术组、Hh通路激动剂(Purmorphamine)组、Purmorphamine+莪术组、秋水仙碱组。除空白组外,其余各组均给予0.1μg/m L leptin诱导后,各组再给予相应药物干预24 h,收集细胞。MTT法检测HSCs增殖情况,RT-PCR法检测Shh、Gli1、SFRP1、β-catenin的m RNA表达,Western blot检测Shh、Gli1、SFRP1、β-catenin蛋白表达,免疫荧光检测Gli1和β-catenin在不同组别HSCs中的表达。结果同空白组相比,用leptin活化HSCs后,Shh、Gli1、β-catenin表达均显著上调(均P0.01),SFRP1表达显著下调(P0.01)。同模型(leptin)组相比,Cyclopamine、莪术含药血清、秋水仙碱分别干预后,Shh、Gli1、β-catenin表达均显著下调(均P0.01),SFRP1表达显著上调(P0.01);莪术含药血清与Cyclopamine协同干预后,Shh、Gli1、β-catenin表达显著下调(均P0.01),SFRP1表达显著上调(P0.01);Purmorphamine干预后,Shh、Gli1、β-catenin表达显著上调(均P0.01),SFRP1表达显著下调(P0.01)。同Purmorphamine组相比,用莪术含药血清干预Purmorphamine组后,Shh、Gli1、β-catenin表达显著下调(均P0.01),SFRP1表达显著上调(P0.01)。结论莪术含药血清能调控leptin诱导活化的大鼠HSCs中Hh途径和Wnt途径相关因子的表达,而抑制HSCs的增殖。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
【图文】：
A.姜黄素、莪术醇混合标准品；B.莪术含药血清；C.空白血清；1.姜黄素；2.莪术醇图 1 姜黄素、莪术醇混合标准品、莪术含药血清及空白血清的 HPLC 图Fig.1 HPLC chromatograms of hybrid reference substance, ezhu drug-containingserumand normal saline serum3.2 莪术含药血清对 HSCs 增殖抑制情况实验结果：同空白组相比，模型(leptin)组 OD 值显著增高(P＜0.01)。同模leptin)组相比，Hh 通路抑制剂(Cyclopamine)组、莪术组、Cyclopamine+莪术组 O均显著降低(均 P＜0.01)；秋水仙碱组的 OD 值明显降低(P＜0.05)；Hh 通路激(Purmorphamine)组OD值显著增高(P＜0.01)。同 Hh通路激动剂（Purmorphamin相比，Purmorphamine+莪术组的 OD 值显著降低(P＜0.01)。（见表 1）表 1 不同组别 HSCs 的增殖抑制情况( ±s, n=6)Tab.1 Proliferation inhibition of HSCs in different groups ( ±s, n=6)组别 剂量 OD 值
Cyclopamine+莪术 20 μmol/L+6.25 g/kg 0.372±0.007**0.742±0.031**Hh 通路激动剂(Purmorphamine) 1 μmol/L 0.696±0.011**1.985±0.043**Purmorphamine+莪术 1 μmol/L+6.25 g/kg 0.556±0.008△△1.724±0.027△△秋水仙碱 0.1 mg/kg 0.541±0.012**1.755±0.040**图 2 图 3
图 8 图 9图 6-9：不同组别 HSCs 中 Shh、Gli1、SFRP1、β-catenin 蛋白表达情况Fig.6-9 The expression of Shh,Gli1,SFRP1,β-catenin protein in different groups of HSCs注：1.空白组；2.模型(leptin)组；3.Hh 通路抑制剂(Cyclopamine)组；4.莪术组；5.Cyclopamine+莪术组；6.Hh通路激动剂(Purmorphamine)组；7.Purmorphamine+莪术组；8.秋水仙碱组3.4 不同组别 HSCs 中 Gli1、β-catenin 免疫荧光表达结果显示：用红色荧光标记 Gli1 蛋白；绿色荧光标记β-catenin 蛋白。同空白组相比，模型(leptin)组和 Hh 通路激动剂(Purmorphamine)组 Gli1、β-catenin 在 HSCs中呈高表达。同模型(leptin)组相比，Hh 通路抑制剂(Cyclopamine)组、莪术组、Cyclopamine+莪术组、秋水仙碱组 Gli1、β-catenin 表达明显减弱。同 Hh 通路激动剂(Purmorphamine)组相比，Purmorphamine+莪术组 Gli1、β-catenin 表达明显减弱。（见图 10-11）。表 6 不同组别 HSCs 中 Gli1 and β-catenin 的免疫荧光表达
本文编号：2785687
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
【图文】：
A.姜黄素、莪术醇混合标准品；B.莪术含药血清；C.空白血清；1.姜黄素；2.莪术醇图 1 姜黄素、莪术醇混合标准品、莪术含药血清及空白血清的 HPLC 图Fig.1 HPLC chromatograms of hybrid reference substance, ezhu drug-containingserumand normal saline serum3.2 莪术含药血清对 HSCs 增殖抑制情况实验结果：同空白组相比，模型(leptin)组 OD 值显著增高(P＜0.01)。同模leptin)组相比，Hh 通路抑制剂(Cyclopamine)组、莪术组、Cyclopamine+莪术组 O均显著降低(均 P＜0.01)；秋水仙碱组的 OD 值明显降低(P＜0.05)；Hh 通路激(Purmorphamine)组OD值显著增高(P＜0.01)。同 Hh通路激动剂（Purmorphamin相比，Purmorphamine+莪术组的 OD 值显著降低(P＜0.01)。（见表 1）表 1 不同组别 HSCs 的增殖抑制情况( ±s, n=6)Tab.1 Proliferation inhibition of HSCs in different groups ( ±s, n=6)组别 剂量 OD 值
Cyclopamine+莪术 20 μmol/L+6.25 g/kg 0.372±0.007**0.742±0.031**Hh 通路激动剂(Purmorphamine) 1 μmol/L 0.696±0.011**1.985±0.043**Purmorphamine+莪术 1 μmol/L+6.25 g/kg 0.556±0.008△△1.724±0.027△△秋水仙碱 0.1 mg/kg 0.541±0.012**1.755±0.040**图 2 图 3
图 8 图 9图 6-9：不同组别 HSCs 中 Shh、Gli1、SFRP1、β-catenin 蛋白表达情况Fig.6-9 The expression of Shh,Gli1,SFRP1,β-catenin protein in different groups of HSCs注：1.空白组；2.模型(leptin)组；3.Hh 通路抑制剂(Cyclopamine)组；4.莪术组；5.Cyclopamine+莪术组；6.Hh通路激动剂(Purmorphamine)组；7.Purmorphamine+莪术组；8.秋水仙碱组3.4 不同组别 HSCs 中 Gli1、β-catenin 免疫荧光表达结果显示：用红色荧光标记 Gli1 蛋白；绿色荧光标记β-catenin 蛋白。同空白组相比，模型(leptin)组和 Hh 通路激动剂(Purmorphamine)组 Gli1、β-catenin 在 HSCs中呈高表达。同模型(leptin)组相比，Hh 通路抑制剂(Cyclopamine)组、莪术组、Cyclopamine+莪术组、秋水仙碱组 Gli1、β-catenin 表达明显减弱。同 Hh 通路激动剂(Purmorphamine)组相比，Purmorphamine+莪术组 Gli1、β-catenin 表达明显减弱。（见图 10-11）。表 6 不同组别 HSCs 中 Gli1 and β-catenin 的免疫荧光表达
【参考文献】
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本文编号：2785687
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