基于VEGF-VEGFR2-SRC信号通路探讨补青颗粒对大鼠晶状体氧化应激的保护作用研究

发布时间：2020-08-09 05:48

【摘要】：目的探讨补青颗粒对紫外线照射所致的大鼠晶状体氧化应激平衡状态、对VEGF-VEGFR2-SRC信号通路表达的影响,为补青颗粒用于临床治疗年龄相关性白内障(ARC)提供实验依据。方法(1)SPF级雄性SD大鼠,经裂隙灯显微镜检查排除双眼晶状体疾病及其他眼部疾病。适应性喂养一周后,随机分为六组:空白对照组、模型对照组、杞菊地黄丸组、补青颗粒高、中、低剂量组,除空白对照组外,其余各组分别采用中波紫外线照射复制SD大鼠晶状体氧化应激模型,造模期间同时给予相应水溶液灌胃。阳性对照组选用杞菊地黄丸1g/ml水溶液灌胃;补青颗粒高、中、低剂量组分别给予4g/ml、2g/ml、1g/ml的水溶液灌胃;模型组、空白组均用生理盐水(10ml/kg)代替药物灌胃。实验期间对大鼠精神状况、视物情况、二便等一般情况进行每日观察及记录;对紫外线照射期间晶状体的混浊程度进行动态观察。造模成功指标:裂隙灯下观察大鼠晶状体周边皮质,可见空泡。(2)灌胃结束后,选用HE染色法观察晶状体上皮细胞病理学组织情况;酶联免疫吸附试验法测血清中SOD、GSH-PX活性变化以及MDA含量改变。取空白组、模型组、阳性对照组、补青颗粒高剂量组各组晶状体,采用实时定量聚合酶扩增反应(Real Time-PCR法)检测晶状体上皮细胞中VEGF、VEGF-R2以及SRC在RNA水平的表达;免疫组织化学法检测晶状体上皮细胞中VEGF、VEGF-R2、SRC以及P-SRC的表达情况;免疫蛋白印迹法(Western Blot法)测定晶状体上皮细胞中VEGF、VEGF-R2、SRC以及P-SRC的蛋白表达水平。结果(1)紫外线照射前期,各组大鼠无明显盲目表现,行动自如,生长状况良好,个别大鼠精神萎靡不振,偶见鼻衄等现象;后期各组大鼠均有精神不振、眼神迷离、嗜睡,明亮光线下,瞳孔缩小等白内障表现。裂隙灯下见空白对照组晶状体无混浊,始终保持透明;紫外线照射第5天,晶状体混浊不明显;照射第10天,晶状体纤维结构紊乱,水肿明显,大部分晶状体皮质区见密集中等空泡,属于Ⅱ期白内障;第15天晶状体混浊程度加深,白内障不断发展。(2)造模期间,裂隙灯观察结果示:在实验进行开始阶段,模型组在实验进行到第三天时,Ⅰ期白内障发病率为57%,与空白对照组相比,差异具有显著性(P0.05);随着紫外线照射时间的延长,模型组SD大鼠处于Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期例数以及百分比逐渐增高,与空白对照组比较有显著性差异(P0.05)。由结果可知,阳性对照组与补青颗粒各治疗组均可以延缓白内障发展,与模型组比较差异显著(P0.05);补青颗粒高剂量组效果最明显(P0.05)。(3)HE染色示:空白对照组晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LECs)为单层立方上皮细胞,镜下观察,细胞形态整齐规则,纤维排列紧密;模型组LECs形态不规则,染色深浅不一,晶状体纤维结构紊乱;阳性对照杞菊地黄丸组晶状体组织损伤减轻,LECs排列较规则,染色淡,晶状体纤维排列较完整;补青颗粒组晶状体组织损伤减轻,LECs排列致密工整,晶状体纤维排列较杞菊地黄丸组完整,尤以补青高剂量组最明显。(4)免疫组化结果示:模型组SD大鼠晶状体上皮细胞中VEGF、VEGF-R2、SRC以及P-SRC的阳性表达较空白对照组均明显升高,差异具有显著性(P0.05);药物干预后,补青颗粒组、杞菊地黄丸组VEGF、VEGF-R2、SRC以及P-SRC阳性表达明显降低,差异具有显著性(P0.05);各治疗组之间相比结果显示,补青颗粒高剂量组VEGF、VEGF-R2、SRC以及P-SRC阳性表达较杞菊地黄丸组减少,差异具有显著性(P0.05)。(5)血清结果示:相比于空白对照组,模型组SOD、GSH-PX活性明显降低,而MDA含量明显升高,差异具有统计学意义(P0.05);药物干预后,补青颗粒各治疗组与杞菊地黄丸组比较结果显示,随着补青颗粒浓度的逐渐增高,SD大鼠血清中SOD、GSH-PX活性增加越显著,MDA含量降低越明显,且两者的变化具有计量依赖性,差异显著(P0.05)。(6)Real Time-PCR结果显示:模型组与空白对照组相比,氧化应激状态下,大鼠晶状体组织中VEGF、VEGF-R2、SRC在RNA水平表达显著升高,差异显著性非常高(P0.01);中药干预后,补青颗粒组与模型组比较,VEGF、VEGF-R2、SRC在RNA水平表达有了显著降低(P0.01);而杞菊地黄丸组与模型组比较,VEGF m RNA、SRC m RNA表达差异不具有显著性(P0.05);补青颗粒高剂量组与空白对照组比较,三种因子在RNA表达差异具有显著性(P0.05)。(7)Western Blot:紫外线照射之后,模型组与空白对照组相比,大鼠晶状体中VEGF、VEGF-R2、SRC和R-SRC蛋白表达水平均有明显升高,差异非常具有显著性(P0.01);而药物干预后,各药物治疗组与模型对照组相比,VEGF、VEGF-R2和SRC蛋白表达水平,均有下降,差异具有显著性(P0.01),而杞菊地黄丸治疗组R-SRC蛋白表达水平,与模型组比较,差异不具显著性(P0.05);补青颗粒高剂量组R-SRC蛋白表达水平,与空白对照组相比,差异显著性不明显(P0.05);补青颗粒高剂量组与杞菊地黄丸组比较,具有明显的差异性(P0.01)。结论1、氧化应激可能是白内障发生的主要作用机制之一;2、补青颗粒可能通过调节晶状体中VEGF-VEGFR2-SRC等相关基因的表达,对紫外线照射所致大鼠晶状体混浊的发生和发展起到防止、延缓、保护的目的。
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
【图文】：

SRC免疫组化表达情况：

P-SRC免疫组化表达情况：

a：空白对照组；b：模型对照组；c：杞菊地黄丸组；d：补青高剂量组）

【引证文献】

相关硕士学位论文 前1条

1 范博妍;补青颗粒对H_2O_2诱导的大鼠晶状体抗氧化应激的作用及机制研究[D];宁夏医科大学;2018年

本文编号：2786698