虫草素对乳腺癌细胞辐射增敏作用及其机制的研究

发布时间：2020-08-11 20:52

【摘要】：放射治疗是各种恶性肿瘤经典的治疗方法,但由于肿瘤辐射抗拒性等问题,影响着放疗的疗效和应用。为了寻找一个新颖有效的放射增敏剂,本文基于虫草素(Cordycepin)的抗肿瘤特性,旨在探讨虫草素对人乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231辐射增敏的作用机制。MTT和克隆形成实验结果显示,虫草素对乳腺癌两种细胞系均有辐射增敏作用,能明显抑制细胞的增殖。为了探讨虫草素提高乳腺癌细胞辐射增敏的机制,我们采用流式细胞术进行分析,结果显示,虫草素可以提高电离辐射诱导的细胞凋亡能力。此外,辐照与虫草素联合处理组的活性氧(ROS)产生明显增多。通过免疫荧光检测组蛋白H2AX的磷酸化(γ-H2AX)水平,发现虫草素增加辐照诱导的γ-H2AX焦点的形成。通过实时定量荧光PCR方法以及蛋白免疫印迹试验,我们发现虫草素预处理的乳腺癌细胞系,辐照后其Nrf2的mRNA和蛋白水平显著降低,而且Nrf2的下游基因HO-1的mRNA水平变化与其趋势一致。此外,在体内实验的研究中,我们得出与体外实验一致的结果,即虫草素能够对乳腺癌细胞产生显著的辐射增敏作用以及降低Nrf2的蛋白表达水平。总之,这些结果均证实了虫草素通过Nrf2/HO-1/ROS信号轴提高对乳腺癌细胞系的辐射增敏作用。因此,我们的研究结果为虫草素在放射治疗中的功能和潜在机制提供了新的见解,并且虫草素在乳腺癌放疗临床实践中具有可观的应用潜力。目的研究3,3'-二吲哚甲烷(3,3-diindolylmethane,DIM)对2 Gy辐射损伤小鼠造血系统的保护作用。方法取雄性C57BL/6小鼠30只,随机分为对照组、照射组和照射+DIM组,每组10只小鼠。照射组和照射+DIM组小鼠接受2 Gy的137Cs γ-射线一次性全身照射。照射+DIM组小鼠在照射前30 min采用腹腔注射方法,注射浓度为75 mg/kg的DIM,对照组和照射组小鼠注射对照溶液。小鼠分别于受照后7 d和15 d每组处死5只,取外周血以测定血象,取骨髓细胞以测定有核细胞数、细胞内ROS水平以及克隆形成能力。结果与无辐照的对照组小鼠比较,照射组小鼠的外周血白细胞数量、血小板数量、骨髓有核细胞数目、粒单系集落形成单位、胸腺系数和脾脏系数显著下降,细胞内活性氧水平明显提高(P0.05)。而且受照后7 d比15 d的辐射损伤效应更加严重。但是,腹腔注射DIM则明显地降低了辐照所诱导的小鼠辐射损伤效应(P0.05)。结论DIM对于小鼠2Gy照射后造血损伤具有一定的保护作用,其作用可能是通过降低骨髓细胞中活性氧的水平。
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285
【图文】：

为了探究虫草素提高乳腺癌辐射增敏性的分子机制，首先我们采用流式细胞术逡逑检测虫草素对乳腺癌细胞凋亡的诱导作用。即Ａｎｎｅｘｉｎ邋Ｖ／Ｐ１双染色法检测其促进凋逡逑亡的效果。流式细胞仪分析结果如图２－１邋Ａ和Ｂ所示，在ＭＣＦ－７（或ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）逡逑细胞中，单独给药组细胞凋亡率为２．５邋％邋（或３．６邋％）的前提下，４邋Ｇｙ辐照后细胞凋逡逑亡率为１６．９％邋（或２１．１邋％），而虫草素＋福照组细胞凋亡率为２９．９％邋（或３２．９％），逡逑联合处理组与单纯照射组相比，细胞凋亡率有明显提高，山此可见，虫草素能够促逡逑进辐照后乳腺癌细胞的凋亡。逡逑Ａ邋ＭＣＦ－７逦…逦逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ邋Ｃｏｒｄｙｃｅｐｉｎ逦３２－，逦：３二逡逑ｆ逦ｆ邋？逦一ｓ逦■邋ＩＲ逡逑＾逦■邋ＩＲ＊Ｃｏｒｄｙｃｅｐ＜ｎ逡逑0Ｇｙ：ｉ－逦１１逡逑ＡＣ逡逑Ｍ逦１：１逦Ｉ逡逑＿逦－Ｚ－．逡逑Ａｎｎｅｘｉｎ邋Ｖ逡逑Ｄ逡逑°邋ＭＤＡ－ＭＢ－２３１逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ逦Ｃｏｒｄｙｃｅｐｉｎ逦３２１逦＊＊＊邋…ｍ逡逑１邋Ｊ逦：＇逦一逦－－ＩＲ逡逑ＩＲ＾Ｃｏｒｄｙｃｅｐｍ逡逑０Ｇｙ邋丨一逦；＾逦｜２４－逡逑－邋—邋．邋－邋－邋－邋－－邋－邋－邋？逦Ｏ逦Ｉ逡逑？■§１６．逦

本文编号：2789555