红景天苷对帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用

发布时间：2020-08-15 22:54

【摘要】：目的利用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropy ridine,MPTP)建立帕金森病(Parkinson’s disease,PD)小鼠模型,研究红景天苷(Salidroside,Sal)对肾素-血管紧张素系统(Renin-angiotensinsystem,RAS)中AngⅡ-AT1轴的调节作用,及其对NADPH氧化酶、ROS、SOD与MDA的影响,探讨红景天苷发挥多巴胺能神经元保护作用的可能机制。方法将123只雄性C57/BL小鼠随机分为3组(n=41)。1)对照组:腹腔注射生理盐水,每天1次,连续注射7天;2)模型组:腹腔注射MPTP(30mg/kg),每天1次,连续注射7天;3)治疗组:腹腔注射MPTP(30mg/kg),1 h后腹腔注射Sal(50mg/kg),每天1一次,连续注射7 d;每次注射完毕后,观察每组小鼠行为学表现,并使用爬杆法测定小鼠运动能力;采用免疫组织化学图像分析,测定每组小鼠中脑黑质区TH和NOX2阳性表达量;采用蛋白质印迹法,测定每组小鼠中脑TH、AngⅡ、AT1和NOX2蛋白表达水平;采用试剂盒测定每组小鼠中脑黑质区SOD、MDA和ROS的水平。结果1与对照组相比,模型组小鼠表现出步态不稳、竖尾、震颤等典型帕金森病样行为学表现,自主活动减缓,随着给药次数增加,这些表现愈发明显;爬杆实验结果显示,模型组小鼠得分显著减小(8.24±0.54 vs 3.73±0.51,P0.01),说明模型组小鼠爬行时间延长,运动平衡协调能力减弱;与模型组相比,Sal治疗组小鼠行为学症状减轻;爬杆实验结果显示,治疗组小鼠得分增加(3.37±0.51 vs 5.96±1.07,P0.01),说明经过Sal治疗后,治疗组小鼠运动平衡协调能力有所提高。2免疫组化结果显示,模型组小鼠较之对照组TH阳性神经元数量大幅度减少(120.73±15.04 vs 46.93±12.59,P0.01),NOX2阳性细胞显著增加(10.09±1.10 vs 60.01±7.45,P0.01);蛋白质免疫印迹分析显示,与对照组相比,模型组小鼠TH蛋白表达水平显著降低(1.68±0.075 vs 0.55±0.118,P0.01)、AngⅡ(0.60±0.051 vs 0.80±0.071,P0.01)、AT1(0.18±0.014 vs 0.36±0.015,P0.01)及NOX2(0.41±0.03 vs 1.04±0.07,P0.01)表达水平升高;试剂盒检测结果显示,与对照组相比,模型组小鼠中脑黑质区SOD活力下降(123.15±13.33 vs 85.96±13.22,P0.01)、ROS(47.74±7.88 vs 102.88±11.22,P0.01)及MDA(0.85±0.088 vs 1.30±0.081,P0.01)产生增多,说明给予MPTP处理后,RAS中AngⅡ-AT1轴可影响NOX2、SOD、ROS和MDA产生水平,使中脑黑质发生氧化应激损伤,从而促使神经元变性坏死。3与模型组相比,治疗组小鼠免疫组化结果显示,TH阳性神经元丢失程度减轻(46.93±12.59vs 76.03±18.02,P0.01),NOX2阳性细胞减少(60.01±7.45 vs 35.05±5.49,P0.01);蛋白质免疫印迹分析显示,与模型组相比,治疗组小鼠中脑黑质区TH(0.55±0.118 vs 1.02±0.085,P0.01)及AngⅡ(0.80±0.071 vs 1.08±0.128,P0.01)表达水平升高,AT1(0.36±0.015 vs 0.26±0.028,P0.01)及NOX2(1.04±0.07 vs 0.69±0.05,P0.01)表达水平下降;试剂盒检测结果显示,治疗组小鼠SOD活力升高(85.96±13.22 vs 100.74±11.53,P0.01),ROS(102.88±11.22 vs 68.86±8.04,P0.01)及MDA(1.30±0.081 vs 1.04±0.079,P0.01)产生量减少,说明给予Sal治疗后,可通过调节AngⅡ-AT1轴,减少NOX2、ROS及MDA产生,起到抗氧化应激损伤效应,发挥保护多巴胺能神经元的作用。结论Sal在一定程度上可通过调节RAS中AngⅡ-AT1轴表达,影响NDAPH氧化酶活性,保护抗氧化系统SOD活力,减少氧化应激产物ROS和MDA产生,从而减轻模型动物中脑黑质区的氧化应激损伤,最终发挥保护多巴胺能神经元的效应。
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5;R-332
【图文】：

小鼠,神经纤维,黑质致密部,检测结果

*P＜0.05 vs. control group.#P＜0.05 vs. model group.图 1 各组小鼠爬杆实验得分ig.1 The score of pole test comparison among the groups(n=1学检测结果脑黑质 TH 阳性神经元表达检测结果检测结果显示，对照组黑质致密部 TH 阳性神经元元数量多，分布密集，神经纤维清晰；模型组与对整，TH 阳性神经元大量减少，减少达 61.13%，神比，TH 阳性神经元只减少了 37.02%，神经纤维较TH 阳性神经元丢失程度减轻，TH 阳性神经元完整，神经纤维清晰（图 2）。对图像结果进行数学意义（P＜0.01，表 2，图 3）。

致密部,免疫组织化学染色,神经纤维,黑质致密部

*P＜0.05 vs. control group.#P＜0.05 vs. model group.图 1 各组小鼠爬杆实验得分Fig.1 The score of pole test comparison among the groups(n=10)1.2.3 免疫组织化学检测结果1）各组小鼠中脑黑质 TH 阳性神经元表达检测结果TH 免疫组化检测结果显示，对照组黑质致密部 TH 阳性神经元呈条带状且排列规则，阳性神经元数量多，分布密集，神经纤维清晰；模型组与对照组相比，黑质致密部形状不完整，TH 阳性神经元大量减少，减少达 61.13%，神经纤维稀疏；治疗组与对照组相比，TH 阳性神经元只减少了 37.02%，神经纤维较稀疏；治疗组与模型组相比，TH 阳性神经元丢失程度减轻，TH 阳性神经元较模型组多62.01%，细胞结构完整，神经纤维清晰（图 2）。对图像结果进行数据分析，三组之间差异具有统计学意义（P＜0.01，表 2，图 3）。

致密部,TH阳性神经元,测定值,小鼠

*P＜0.05 vs. control group. #P＜0.05 vs. model group图 3 小鼠中脑黑质致密部 TH 阳性神经元测定值red values of TH positive expression in the SN of the mid黑质 NOX2 阳性表达检测结果检测结果显示，对照组黑质区 NOX2 阳性细组 NOX2 阳性细胞多，分布密集，可见核浓照组相比，NOX2 阳性细胞少量增多，治疗组分布弥散，胞浆染色较浅（图 4）。对图像有统计学意义（P＜0.01，表 3，图 5）。

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