人参皂苷Rb1修复局灶性脑缺血后失衡的神经营养因子

发布时间：2020-08-17 08:57

【摘要】：[目的]目前脑卒中仍是导致长期残疾的主要原因,至今尚无特效的治疗药物。人参皂苷Rb1是目前发现能有效治疗脑血管疾病的三七中重要的活性成分。大脑皮层是支配躯体感觉和运动的重要结构,对许多化学损害较为敏感尤其是缺血。通过研究人参皂苷Rb1对大鼠局造性脑缺血脑源性神经营养因子及其前体脑源性神经营养因子的影响及可能的机制,探求人参皂苷Rb1对脑缺血的保护作用机制。[方法]将48只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、人参皂苷组(100mg/kg)和尼莫地平组(1mg/kg),每组12只,每组又分为3天,7天,14天三个亚组。采用光化学诱导大鼠局灶性脑缺血的方法建立脑缺血模型,术后当日开始给药,2次/日,各假手术组和模型组术后4 h腹腔注射等量生理盐水。于术前、术后(当日,3 天、7 天、14 天)根据 corner test,adhesive tape-removal test和改良神经功能缺损评分(mNSS)检测神经功能缺损评分,样本给药3,7,14天后取脑组织,用western blotting和免疫组织化学方法检测皮层的TrkB、sortilin,tPA,PAI-1和p75NTR的表达变化,ELISA检测mBDNF和proBDNF的浓度变化。[结果]行为学检测结果:脑缺血后大鼠出现不同程度感觉运动障碍,通过Corner test,Adhesive tape removal test和mNSS对大鼠进行神经缺损评估。研究发现,与模型组相比,人参皂苷Rb1组和尼莫地平组大鼠的感觉运动障碍均显著改善(P0.05)。①Corner test:与假手术组比较,模型组偏好向右侧转身(P0.01);与模型组比较,人参皂苷Rb1组和尼莫地平组向右转身次数减少(P0.05),并且随用药时间延长,呈现出时间依赖性。②Adhesive tape removal test:与假手术组比较,模型组大鼠接触胶带时间和撕除胶带时间均延长(P0.05);与模型组比较,人参皂苷Rbl组和尼莫地平组接触胶带和撕除胶带时间缩短(P0.05),尤其7天和14天时明显缩短(P0.05)。③mNSS:假手术组未见神经功能缺损(评分均为0);模型组mNSS评分高于假手术组(P0.01);与模型组相比,人参皂苷Rb1组和尼莫地平组神经功能缺损程度评分降低(P0.05);与3天组比较,7天组和14天组神经功能缺损评分降低但无显著差异(P0.05)。Western blotting检测结果可见:①与假手术组相比,模型组TrkB,sortilin,P75NTR,tPA和PAI-1蛋白表达明显增加(P0.05);②与模型组相比,人参皂苷Rb1和尼莫地平治疗明显降低sortilin、P75NTR和PAI-1蛋白表达(P0.P5),尤其以给药14天降低显著(P0.05);③与模型组相比,人参皂苷Rb1和尼莫地平治疗使TrkB和tPA表达显著上调(P0.05),且呈现时间依赖性,尤其以用药14天增加显著(P0.05)④人参皂苷Rb1和尼莫地平组间比较无显著差异(P0.05)。免疫组织化学法检测结果可见:①假手术组几乎未见P75阳性表达;脑缺血后3天、7天、14天均可见胞浆和胞膜内大量P75阳性表达(P0.05),随时间延长表达稍有下降,光密度值升高(P0.05),光密度值随时间延长稍有下降;给予人参皂苷Rb1和尼莫地平治疗3天、7天、14天均可减少P75阳性表达(P0.05),且呈现时间依赖性;人参皂苷Rb1和尼莫地平组各时间点比较无显著差异(P0.05)。②假手术组可见少量sortilin阳性表达细胞;与假手术组比较,缺血模型组出现大量胞浆着色的阳性细胞(P0.05),光密度值明显升高(P0.05);PNS-Rb1和尼莫地平治疗组在3天、7天、14天均见sortilin阳性表达明显减少(P0.05),且呈现时间依赖性,用药14天时sortilin阳性表达下降明显,光密度值随时间延长下降明显(P0.05)。人参皂苷Rb1和尼莫地平组比较无显著差异(P0.05)。③假手术组胞浆和胞膜区可见少量TrkB阳性表达,模型组胞浆着色的阳性细胞数目增加(P0.05),阳性表达的光密度值升高(P0.05);人参皂苷Rb1和尼莫地平治疗组在3天、7天、14天均见TrkB阳性表达明显增加(P0.05),且呈现时间依赖性,光密度值升高(P0.05)。人参皂苷Rb1和尼莫地平组各时间点比较无显著差异(P0.05)。Elisa结果可见:与假手术组比较,模型组mBDNF/proBDNF表达水平均升高(P0.05);与模型组比较,人参皂苷Rb1和尼莫地平组mBDNF表达水平进一步升高(P0.05),而proBDNF表达水平下降(P0.05),且呈现时间依赖性。与3天组比较,人参皂苷Rb1和尼莫地平14天组BDNF/proBDNF表达水平差异显著(P0.05)。[结论]人参皂苷Rb1能显著改善缺血性卒中引起的感觉运动功能障碍,且时间依赖性的增加BDNF,TrkB以及其加工酶(组织纤溶酶原激活剂,TPA)的表达,同时,减少proBDNF,p75NTR,sortilin以及Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制因子(PAI-1)的表达,最终介导神经元的保护作用。因此,人参皂苷Rb1可能是通过激活BDNF/TrkB信号通路和抑制proBDNF/sortilin/p75NTR信号通路改善脑缺血感觉运动障碍。
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5
【图文】：

动障碍的作用，通过Ｃｏｍｅｒ邋ｔｅｓｔ，Ａｄｈｅｓｉｖｅ邋ｔａｐｅ邋ｒｅｍｏｖａｌ邋ｔｅｓｔ和ｍＮＳＳ对大鼠进行逡逑评估。研究发现与模型组相比，ＰＮＳ－Ｒｂｌ组和尼莫地平组大鼠的感觉运动障碍均逡逑显著改善（图１，尸＜０．０５）。逡逑ｌ．ｌＣｏｒｎｅｒｔｅｓｔ：与假手术组比较，模型组偏好向右侧转身（图１Ａ－Ｃ，Ｐ＜０．０１）；逡逑与模型组比较，ＰＮＳ－Ｒｂｌ组和尼莫地平组向右转身次数减少（图１Ａ－Ｃ，Ｐ＜ａ0５），逡逑并且随用药时间延长，呈现出时间依赖性。逡逑１．２逦Ａｄｈｅｓｉｖｅ邋ｔａｐｅ邋ｒｅｍｏｖａｌ邋ｔｅｓｔ：与假手术组比较，模型组大鼠接触胶带时间和撕逡逑除胶带时间均延长（图１Ｄ－Ｅ，与模型组比较，ＰＮＳ－Ｒｂｌ组和尼莫地平逡逑组接触胶带和撕除胶带时间缩短（图１Ｄ－Ｅ，Ｐ＜０．０５），尤其７天和１４天时明显逡逑缩短（图１Ｄ－Ｅ，尸＜ａｏ？）。逡逑１．３逦ｍＮＳＳ：假手术组未见神经功能缺损（评分均为０）；模型组ｒｎＮＳＳ评分高于逡逑假手术组（图ＩＦ

影响逡逑与假手术组相比，模型组ＴｒｋＢ，邋ｓｏｒｔｉｌｉｎ，邋Ｐ７５ＮＴＲ，ｔ－ＰＡ和ＰＡＩ－１蛋白表达逡逑明显增加（图２，邋Ｐ＜ａ0５）；与模型组相比，ＰＮＳ－Ｒｂｌ和尼莫地平治疗明显降低逡逑ｓｏｒｔｉｌｉｎ，Ｐ７５ＮＴＲ邋和邋ＰＡＩ－１邋蛋白表达（图邋２Ａ－Ｄ；邋Ｉ－Ｊ，户＜０．０５），尤其以给药邋１４逡逑天降低显著（Ｐ＜ａ0５）。与模型组相比，ＰＮＳ－Ｒｂｌ和尼莫地平治疗使ＴｒｋＢ和ｔＰＡ逡逑表达显著上调（图２Ｅ－Ｆ；邋Ｇ－Ｈ，Ｐ＜ｆｔ０５），且呈现时间依赖性，尤其以用药１４天逡逑增加显著（Ｐ＜ｆｔ０５）；邋ＰＮＳ－Ｒｂｌ和尼莫地平组间比较无显著差异（Ｐ＞０．０５）。逡逑２４逡逑

４邋ＴｒｋＢ，邋Ｐ７５和Ｓｏｒｔｉｌｉｉｉ的免疫组织化学检测逡逑４．１ＰＮＳ－Ｒｂｌ对脑缺血大鼠Ｐ７５ＮＴＲ表达的影响逡逑图３显示，假手术组几乎未见Ｐ７５阳性表达（图３Ａ）；脑缺血后３天、７天、逡逑１４天均可见胞浆和胞膜内大量Ｐ７５阳性表达（图３Ａ，Ｐ＜ｆｔ０５），随时间延长表逡逑达稍有下降，Ｐ７５光密度值升高（图３Ｂ，邋Ｐ＜０．０５），随时间延长稍有下降；给予逡逑ＰＮＳ－Ｒｂｌ和尼莫地平治疗３天、７天、１４天均可减少Ｐ７５阳性表达（图３Ａ，Ｐ＜０．０５），逡逑且呈现时间依赖性；ＰＮＳ－Ｒｂｌ和尼莫地平组各时间点比较无显著差异（图３，逡逑２６逡逑

【参考文献】

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本文编号：2795105