鲜、干铁皮石斛多糖成分及抗氧化活性的差异研究

发布时间：2020-08-18 20:54

【摘要】：目的:鲜药是中医临床上传统的特色用药之一,具有源远流长的历史。石斛是传统鲜药,中医认为石斛具有“生者优良”的特点,讲究“鲜品为上”。现代研究也表明鲜石斛比干品具有更显著的药理活性,因此,2015版《中国药典》将石斛饮片的干品和鲜品分开介绍。目前关于石斛的化学成分及药理活性的研究多集中于石斛干品,缺乏鲜、干石斛在化学成分和功效活性上差异的系统深入研究,限制了鲜石斛的市场应用和产品开发。本论文从体内外抗氧化活性、多糖活性、多糖含量、多糖结构方面对鲜、干铁皮石斛进行了系统研究,明确了鲜、干铁皮石斛多糖成分及抗氧化活性差异的原因,初步阐明了铁皮石斛抗氧化活性物质基础,验证了石斛“生者优良”的科学内涵,为铁皮石斛鲜药的开发提供了理论依据。方法:本论文首先以DPPH·、ABTS~+·和·OH为指标,对鲜、干铁皮石斛的体外抗氧化活性进行对比分析,在此基础上,进一步通过构建CCl_4所致急性肝损伤小鼠模型,考察鲜、干铁皮石斛对小鼠肝组织和血清中T-AOC、GSH、CAT、MDA和SOD生化指标的影响,探讨鲜、干铁皮石斛的体内抗氧化活性差异;制备得到鲜、干铁皮石斛多糖,考察鲜、干铁皮石斛多糖体内外抗氧化活性差异;为探究活性差异的原因,对鲜、干铁皮石斛中的总多糖、甘露糖进行了含量测定,结合高效凝胶渗透色谱法和气相色谱-液质联用技术对多糖的分子量排布和单糖组成差异进行了比较分析。结果:1.相对于干铁皮石斛,鲜品及其多糖具有更好的体外抗氧化活性鲜、干铁皮石斛对DPPH·、ABTS~+·和·OH自由基都有较强的清除能力,且鲜品对各自由基的最大清除率分别达到了52.56%、61.24%、28.71%,干品的的最大清除率仅为41.34%、48.01%、15.84%,鲜品的抗氧能力显著强于其干品(p0.05);提取分离得到鲜、干铁皮石斛多糖,体外抗氧化结果表明:鲜多糖对自由基的最大清除率分别为45.7%、42.4%、28.71%,干多糖的最大清除率分别为40.09%、35.13%、21.98%,鲜铁皮石斛多糖的抗氧化能力显著强于其干品多糖(p0.05)。2.鲜铁皮石斛及其多糖体内抗氧化活性优于干品构建CCl_4所致急性肝损伤小鼠模型,考察鲜、干铁皮石斛对小鼠血液及肝脏T-AOC、GSH、CAT、MDA和SOD生化指标的影响,探讨鲜、干铁皮石斛的体内抗氧化活性差异。结果表明:鲜、干铁皮石斛均具有提高由CCl_4所致肝损伤模型小鼠肝组织和血清中的T-AOC、GSH、CAT和SOD水平,和降低MDA水平的能力,且铁皮石斛鲜品明显优于其干品(p0.05);对鲜、干铁皮石斛多糖体内抗氧化研究结果表明,鲜多糖的体内抗氧化作用也明显优于(p0.05)干多糖。3.鲜铁皮石斛多糖、甘露糖含量均高于干品,两者多糖组成存在显著差异为探究活性差异产生的原因,对鲜、干铁皮石斛中多糖和甘露糖进行了含量测定,铁皮石斛鲜品中多糖和甘露糖含量分别为512 mg·g~(-1)、489.5 mg·g~(-1),均明显高于其干品(348.7 mg·g~(-1)和291.3 mg·g~(-1))(p0.05);HPLC-GPC结果显示,鲜石斛多糖的分子量为1572 KDa,且排布较均一,而干多糖被降解成了三个不同分子量的多糖片段,分别为1572 KDa、583 KDa和8 KDa;GC-MS结果表明,鲜、干石斛多糖的单糖组成成分相同,但是单糖相对含量的比重存在明显的差异。鲜石斛多糖中葡萄糖、甘露糖、鼠李糖的相对含量分别为1.000、0.830和0.008,而干多糖中三者的相对含量分别为0.719、1.000和0.001。结论:本研究表明,鲜铁皮石斛的体内外抗氧化活性均优于干品,具有显著性差异;活性差异原因主要有两个方面:一是铁皮石斛鲜药中多糖的含量明显高于干品;二是铁皮石斛在加工过程中多糖结构发生了改变,造成其活性降低。
【学位授予单位】：安徽中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284
【图文】：

自由基清除,铁皮石斛,抗氧化活性

第一章鲜、干铁皮石斛及多糖体外抗氧化活性研究围内，随着样品浓度增大，清除作用也逐渐增强，且都是呈线性关系的（R98）。由图可知，在 DPPH·自由基清除方面，VitC 的作用明显强于（p < 0.0O 和 DDO 样品，最大清除率高达 95%。并且，FDO 和 DDO 对 DPPH·自由除作用相比较下，FDO 的最大清除率达到了 52.56%；而 DDO 在相同浓度下除率只有 41.34%。所以，本实验结果表明，在清除 DPPH·自由基能力方面O 优于（p < 0.05）DDO。

自由基清除,自由基

图 2-2 FDO 和 DDO 对 ABTS·+自由基清除活性的影响(x s)Fig2-2 The scavenging effects of FDO and DDO onABTS free radical4.1.3 FDO 和 DDO 对·OH 自由基清除的能力比较·OH 自由基是由生物机体产生的高活性、毒性强的一种自由基，对生物大子、细胞等具有极大的损伤作用，·OH 自由基的清除能力是常见的评价和衡量氧化物质的抗氧化能力强弱的重要指标之一。如图 2-3 所示，FDO 和 DDO 对·O自由基都具有较强的清除能力，但是清除作用明显低于 VitC。且 FDO 的清除用显著高于（p < 0.05）DDO。所以，本实验的结果表明，在·OH 自由基清除用方面，FDO 优于 DDO。

比较图,·OH自由基,自由基清除

图 2-3 FDO 和 DDO 对·OH 自由基清除活性的影响(x s)Fig2-3 The scavenging effects of FDO and DDO on hydroxyl free radical4.2 鲜、干铁皮石斛多糖体外抗氧化能力的比较4.2.1 FDOP 和 DDOP 对 DPPH·自由基清除的能力比较图 2-4 结果显示，在一定的浓度范围内，FDOP 和 DDOP 样品对 DPPH·自由基都有一定的清除作用，清除效率随着浓度的增大逐渐增强，但是在相同浓度下，清除效果存在一定的差异，且清除能力均都低于 VitC。在对 DPPH·自由基清除的能力方面的比较，FDOP 的自由基清除率在 33.72-45.70%，而 DDOP 的清除率仅在 30.24-40.10%。因此，本试验结果表明，FDOP 对 DPPH·自由基清除的能力强于 DDOP（p < 0.05）。

【参考文献】