油橄榄叶降糖有效部位体外活性评价及其物质基础研究

发布时间：2020-08-22 22:44

【摘要】：本论文以油橄榄叶降糖有效部位为研究对象,分别开展其对糖代谢关键酶α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制作用。在此基础上,利用离线二维高速逆流色谱技术对油橄榄叶降糖有效部位中的主要有效成分进行了分离制备,从中得到3个化合物。具体的研究内容包括以下2个方面:1.将油橄榄叶降糖有效部位在BMKX-4大孔吸附树脂柱上进行吸附,依次用20%、40%、60%、80%乙醇梯度洗脱,得到A、B、C、D 4个组分,然后分别考察A、B、C、D这4个组分对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制作用,并利用高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)对各组分中4个共有化合物羟基酪醇乙酰脂(X1)、橄榄苦苷(X2)、女贞苷(X3)、2″-epifraxamoside(X4)进行分析,考察其含量与酶抑制活性的相关性。结果表明,组分A对α-葡萄糖苷酶的抑制作用最强,组分C对α-淀粉酶的抑制作用最强。X1、X3与对α-葡萄糖苷酶的抑制率呈正相关,X2、X4与抑制作用呈负相关;X2、X4与对α-淀粉酶的抑制率呈正相关,X1、X3与抑制作用呈负相关。验证了本课题组前期筛选得到的油橄榄叶降糖有效部位对糖代谢过程中的两种关键酶均具有较好的抑制作用,其中X1、X3可能是抑制α-葡萄糖苷酶的主要活性成分,而X2、X4可能是抑制α-淀粉酶的主要活性成分。2.利用离线二维高速逆流色谱技术,对油橄榄叶降糖有效部位中的主要有效成分进行了分离制备的研究。首先,利用高速逆流色谱建立了一种快速分离制备油橄榄叶降糖活性部位中橄榄苦苷的方法。优化的色谱条件为:正丁醇-乙酸乙酯-甲醇-水-氯仿(1:19:1:19:0.4,v/v)作为两相溶剂系统,上相作为固定相,下相作为流动相,转速为900 rpm,同时考察了流速及进样量对橄榄苦苷分离度的影响,得出当流速为1.5m L·min-1,进样量浓度为20 mg·m L-1时,利用该方法,从油橄榄叶降糖有效部位中分离得到的橄榄苦苷,其纯度达到90.5%,且可以进行大量制备。其次,是将除去大量橄榄苦苷后所有的洗脱液(包括保留在柱色谱中的组分),优化后选择溶剂系统正丁醇-乙酸乙酯-水(1:2:3,v/v),上相作为固定相,下相作为流动相,转速为900 rpm,流速为2.0 m L·min-1,进样量浓度为2 mg·mL-1。采用高速逆流色谱的双洗脱模式,分离得到羟基酪醇和木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷2个化合物,其纯度分别为95.3%和91.2%。
【学位授予单位】：甘肃中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284
【图文】：

图 1-2 4 个组分在 232 nm 波长处的 HPLC 色谱图3.小结与讨论本节利用大孔吸附树脂 BMKX-4，分别用不同比例的乙醇，将油橄榄叶降糖有效部位分为 4 个组分，并利用 HPLC 对 4 个组分进行分析。由图 1-2 可知：利用大孔吸附树脂从油橄榄叶降糖有效部位分离得到的 A、B、C、D 4 个组分所含的化合物基本一致但是各个化合物的含量差异很大。

1-3 各样品对两种酶的抑制活性（a 为 α-葡萄糖苷酶，b 为 α-淀粉酶） 为 20%、40%、60%、80%的洗脱组分，E 为橄榄苦苷，以上浓度均为 2波糖，浓度为 5 mg·mL-1；与 F 组比较，*P<0.05；与 E 组比较，#P<0分析法步探究抑制 α-葡萄糖苷酶和 α-淀粉酶活性的物质基础，利用 HP物质的分析检测。各组分中所含的化合物差异较大，经外标法苷的含量依次为 19.50%，57.67%，52.96%，23.26%。在波长为面积归一化法计算，选取了在色谱图中分离度较好且峰面积个化合物进行研究。本课题组前期已知 X1为羟基酪醇乙酰脂，贞苷，X4为 2″-epifraxamoside[31]。通过 HPLC 对 A、B、C、D4 为 C 组分的色谱图，表 1-5 为 4 个峰在各个组分中的峰面积

图 1-4 组分 C 的 HPLC 色谱图将 X1、X2、X3、X4在样品 A、B、C、D 中的峰面积值进行均数化处理，用以衡量样品中各共有峰所对应的化学成分含量的变化情况，所得数据均进行四舍五入保留四位小数。表 1-5 4 个共有化合物在各样品中的峰面积及量化峰值化合物 部位 峰面积 量化峰值 化合物 部位 峰面积 量化峰值A 35.5 0.7175 A 7612.1 0.5085X1B 87.1 1.7605 X2B 22510.7 1.5036C 61.6 1.2451 C 20678.3 1.3812D 13.7 0.2769 D 9082.3 0.6067A 39.5 0.3169 A 648.1 0.4439X3B 260.4 2.0493 X4B 1945.4 1.3324C 176.2 1.3866 C 2225.3 1.5240D 32.2 0.2534 D 1021.7 0.6997

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本文编号：2801245