基于MAPK通路探讨盐酸小檗碱对大鼠主动脉内皮细胞的凋亡作用

发布时间：2020-08-23 19:56

【摘要】：目的:使用盐酸小檗碱对大鼠主动脉内皮细胞进行干预研究,观察其增殖活性和凋亡情况,以探讨盐酸小檗碱促凋亡的相关分子机制,为抗血管生成治疗提供可能的药物干预方向。方法:25?mol/L,50?mol/L,75?mol/L浓度小檗碱分别干预大鼠主动脉内皮细胞24h,48h,72h。通过MTT方法检测内皮细胞的增殖活性。后续实验以25?mol/L,50?mol/L,75?mol/L药物浓度作用48h。通过流式细胞仪检测内皮细胞的凋亡率,观察早期凋亡率及晚期凋亡率。通过Western Blot实验方法检测盐酸小檗碱作用内皮细胞48h后BAX蛋白、BCL-2蛋白、p38MAPK、ERK1/2及p-ERK1/2通路蛋白的表达情况。结果:25?mol/L,50?mol/L,75?mol/L浓度小檗碱作用24h(P0.01),48h(P0.01),72h(P0.01)显著抑制内皮细胞增殖活性。流式散点图可以观察到,随着药物浓度的递增,细胞凋亡率逐渐增加,特别是早期凋亡率。与对照组相比,25?mol/L,50?mol/L,75?mol/L浓度组总凋亡率和早期凋亡率具有显著性差异。75?mol/L盐酸小檗碱作用于内皮细胞的凋亡率可达到14.74%±1.66%(P0.01),主要以早期凋亡率为主,可达到12.99%±1.40%(P0.01);50?mol/L盐酸小檗碱作用于内皮细胞的凋亡率可达到13.18%±0.75%(P0.01),其中早期凋亡率为10.6%±0.62%(P0.01);低浓度组25?mol/L盐酸小檗碱作用于内皮细胞的凋亡率可达到9.93%±3.14%(P0.05),其中早期凋亡率可达到7.81%±2.14%(P0.01)。Western Blot结果显示:与对照组相比,盐酸小檗碱干预组可显著抑制抑凋亡蛋白BCL-2蛋白的表达(P0.05),降低p-ERK1/2与ERK1/2的比值(P0.05);与对照组相比,显著促进75?mol/L组BAX(P0.05)和p38MAPK(P0.05)信号通路蛋白的表达。结论:(1)盐酸小檗碱具有抑制大鼠主动脉内皮细胞增殖,促进内皮细胞凋亡的作用。(2)盐酸小檗碱促进内皮细胞的凋亡可能与BCL-2蛋白的下调,BAX蛋白的上调有关,可能与ERK1/2通路及p38MAPK通路有关。
【学位授予单位】：右江民族医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
【图文】：

18图 1-3 倒置显微镜观察盐酸小檗碱作用内皮细胞 48 小时的生长情况 。Fig 1-3: The growth of endothelial cells treated with berberine hydrochloride for 48 hours were obunder inverted microscope.3.2 盐酸小檗碱诱导内皮细胞凋亡这一部分研究研究了盐酸小檗碱对大鼠主动脉内皮细胞的凋亡作用，通过流式仪检测内皮细胞的凋亡率。结果初步证明盐酸小檗碱具有促进大鼠主动脉内皮细胞亡作用，是一种潜在的抑制内皮细胞增殖促进细胞凋亡的药物。为了探索盐酸小檗碱引起内皮细胞凋亡中的作用，我们分别用 25 mol/L、50μm

和 75μmol/L 浓度小檗碱干预内皮细胞 48h，采用流式细胞仪检测 Annexin V 阳性的细胞。图 2-1 为设立的同型对照组，用作调流式细胞仪的补偿和电压。流式散点可以观察到，随着药物浓度的递增，细胞凋亡率逐渐增加，特别是早期凋亡率。表示：与对照组相比，高中低浓度组总凋亡率和早期凋亡率具有显著性差异，75μm酸小檗碱显著促进内皮细胞发生凋亡，凋亡率可达到 14.74%±1.66%（P<0.01），主早期凋亡率为主，可达到 12.99%±1.40%（P<0.01）；50μmol/L 盐酸小檗碱作用于内胞的凋亡率可达到 13.18%±0.75%（P<0.01），其中早期凋亡率为 10.6%±0.62%（P<低浓度组25μmol/L盐酸小檗碱作用于内皮细胞的凋亡率可达到9.93%±3.14%（P<其中早期凋亡率可达到 7.81%±2.14%（P<0.01）。与低浓度组总凋亡率比较，高浓（P<0.05）具有显著性差异。

和 75μmol/L 浓度小檗碱干预内皮细胞 48h，采用流式细胞仪检测 Annexin V 阳性的细胞。图 2-1 为设立的同型对照组，用作调流式细胞仪的补偿和电压。流式散点可以观察到，随着药物浓度的递增，细胞凋亡率逐渐增加，特别是早期凋亡率。表示：与对照组相比，高中低浓度组总凋亡率和早期凋亡率具有显著性差异，75μm酸小檗碱显著促进内皮细胞发生凋亡，凋亡率可达到 14.74%±1.66%（P<0.01），主早期凋亡率为主，可达到 12.99%±1.40%（P<0.01）；50μmol/L 盐酸小檗碱作用于内胞的凋亡率可达到 13.18%±0.75%（P<0.01），其中早期凋亡率为 10.6%±0.62%（P<低浓度组25μmol/L盐酸小檗碱作用于内皮细胞的凋亡率可达到9.93%±3.14%（P<其中早期凋亡率可达到 7.81%±2.14%（P<0.01）。与低浓度组总凋亡率比较，高浓（P<0.05）具有显著性差异。

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 周军挺;王丽;吴婷;杨婷婷;鄢连和;;小檗碱抗人结直肠腺癌的作用及其机制[J];中草药;2017年03期

2 张勇;黄春来;付婷婷;陈小青;王丽萍;庄永泽;;小檗碱对果糖诱导人肾小管细胞内质网应激PERK凋亡通路的影响[J];解放军医学杂志;2017年01期

3 Shengyan Xi;Kunhan Chuang;Kwangming Fang;Yimin Lee;Jinggung Chung;Yaochen Chuang;;Effect of berberine on activity and mRNA expression of N-acetyl transferase in human lung cancer cell line A549[J];Journal of Traditional Chinese Medicine;2014年03期

4 金鑫;宋霞;曹永兵;姜远英;孙青煈;;小檗碱的结构改造及其药理活性的研究进展[J];药学实践杂志;2014年03期

5 刘真;肖斌;毛旭虎;邹全明;;炎症与肿瘤的关系研究进展[J];现代生物医学进展;2009年03期

6 ;Neutral sulfate berberine modulates cytokine secretion and increases survival in endotoxemic mice[J];Acta Pharmacologica Sinica;2006年09期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 徐西强;盐酸小檗碱治疗骨肉瘤的作用及其机制[D];华中科技大学;2012年

本文编号：2801956