芍药苷抑制TLR4介导的炎症反应保护小鼠肝缺血再灌注损伤

发布时间：2020-08-25 04:18

【摘要】：目的:探讨芍药苷(paeoniflorin,PF)对肝缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)损伤的保护作用并探讨其作用机制。方法:将C57BL/6小鼠随机分为:假手术组(Control组)、芍药苷对照组(PF组)、肝缺血再灌注损伤模型组(IR组)、芍药苷干预组(PF+IR组),共四组。其中芍药苷给予剂量为100 mg/kg,分三次灌胃给药。模型组和药物干预组小鼠肝缺血1.5 h再灌注6 h,检测血清中丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)的活性,酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子-?(tumor necrosis factor-?,TNF-?)和白细胞介素-1?(interleukin-1?,IL-1?)的水平。苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色后镜下观察组织损伤的形态学变化,末端脱氧核苷酸转移酶介导dUTP缺口末端标记测定法(terminal deoxynucleotidyl transferase mediated d UTP nick-end labeling,TUNEL)法结合Caspase-3试剂盒检测细胞凋亡情况和Caspase-3活性水平。组织免疫化学(immunohistochemistry,IHC)法测定高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)的表达,定量逆转录聚合酶链反应(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,q RT-PCR)法检测细胞膜上模式识别受体Toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)和炎症因子TNF-?、IL-1?mRNA的水平。免疫荧光法(immunofluorescence,IF)和流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测中性粒细胞的数量和表达变化。Western blot进一步检测TLR4及下游信号分子:磷酸化的c-Jun氨基末端激酶(p-c-Jun N-terminal kinase,p-JNK)、磷酸化的细胞外调节蛋白激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated kinase,p-ERK)、磷酸化的p38(phosphorylated p38,p-p38)以及磷酸化的转录因子NF-?B(phosphorylated NF-?B,p-NF-?B)蛋白表达的变化。结果:与Control组相比,IR组血清中转氨酶活性明显升高,芍药苷干预后血清中ALT、AST降低,HE染色和TUNEL结果显示芍药苷抑制了肝细胞凋亡,减轻了肝缺血再灌注诱导的损伤。芍药苷可下调炎症因子TNF-?、IL-1?的mRNA水平以及蛋白表达水平,而且抑制了中性粒细胞的活化和募集。芍药苷下调HMGB1和TLR4,也降低了p-JNK、p-ERK、p-p38以及p-NF-?B的蛋白表达水平。结论:芍药苷对小鼠肝缺血再灌注诱导的损伤确实具有保护作用,可能是通过作用于HMGB1及TLR4-MAPKs信号通路减少了炎症因子TNF-?、IL-1?的释放减少了细胞凋亡,同时抑制中性粒细胞浸润阻止炎症反应放大以达到保护肝脏的作用。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

【参考文献】