艾叶化学成分分析及其抗炎功效研究

发布时间：2020-08-25 16:56

【摘要】：艾叶在中国用药历史悠久,具有抗氧化、抗肿瘤、抗菌等多种药理作用,其化学物质多而复杂,主要化学成分包括挥发油、黄酮类、鞣质类、桉叶烷类、多糖类、三萜类及微量元素类等。随着对艾叶研究的广泛开展以及提取技术日益成熟,对化学成分生化活性的研究也进一步深入。本文旨在对研究艾叶三种提取组分的化学成分,在此基础上通过体外实验(RAW264.7巨噬细胞炎症模型)和体内实验(斑马鱼创伤性感染炎症模型)进一步研究艾叶三种提取组分的抗炎作用。首先通过气相色谱-质谱联用法确定主要波峰,查阅相关文献以及CAS号确定主要化学成分的名称。在化学成分分析的基础上通过MTT、Griess、Real-time PCR等实验方法评估艾叶三种提取组分的体外抗炎效果,并建立斑马鱼创伤感染型炎症模型对其进行体内抗炎效果研究。在体外实验中,研究结果显示,500 ng/mL的LPS刺激RAW 264.7细胞6 h后炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α表达显著升高,证明细胞炎症模型构建成功;MTT方法检测发现艾叶三种提取组分对细胞毒性均较小,且低浓度对RAW 264.7细胞具促增值作用,三种提取组分IC50值均高于50μg/ml;Griess方法检测发现艾叶三种提取组分能显著减少在LPS刺激下巨噬细胞NO的释放量,并呈浓度依赖性降低;Real-time PCR方法检测发现三种提取组分能有效降低RAW 264.7细胞在LPS刺激后IL-6、IL-1β和TNF-α炎症因子的表达和分泌。在体内实验中,观察到在荧光显微镜下斑马鱼炎症模型中经荧光标记的巨噬细胞和中性粒细胞都一定数量的减少,证明了其具有一定抗炎作用。因此,艾叶三种提取组分因其低毒、高效的抗炎作用可以作为有效治疗炎症疾病的有效药物。
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284.1
【图文】：

曲线,炎症因子,艾叶,情况

暨南大学硕士学位论文曲线后计算各上清中的 NO 含量。测量艾叶重油及纯露 NO 释放量实验方法同艾叶轻油。3 实验结果3.1 细胞炎症模型的建立参考相关文献，本实验500 ng/mL的LPS 对RAW264.7进行刺激，分为细胞组与 RAW 264.7 正常细胞组，通过 Real-time PCR 方法检测炎性因TNF-α的 mRNA 表达量，从而判断模型是否建立成功。由下图可知，经 LIL-1β、TNF-α mRNA 表达量都显著升高，证明经 LPS 刺激，部分促炎因升高，说明此模型成功建立，综合考虑选取 500 ng/mL 为工作液浓度。

艾叶,轻油,重油,蓝紫色

暨南大学硕士学位论文2 三种提取组分对细胞毒性的测定通过 MTT 方法分别检测艾叶轻油、艾叶重油、艾叶纯露对 RAW 264.7 细胞增殖的。MTT 即噻唑蓝，是一种水溶性黄色染料，活细胞中线粒体的琥珀酸脱氢酶可以将成甲瓒生成不溶于水的蓝紫色沉淀，DMSO 能将生成的甲瓒溶解掉，因此蓝紫色甲的生成量与活细胞数量成正比，间接反映了细胞在不同药物浓度时的存活率。实验艾叶轻油、艾叶重油、艾叶纯露的浓度均为浓度 400 μg/mL，200 μg/mL，100 μg/m μg/mL，25 μg/mL，12.5 μg/mL，6.25 μg/mL，3.13 μg/mL。测定细胞的 IC50 值，活性被抑制一半时所对应的药物浓度。结果如图 3.2.所示，艾叶轻油的 IC50 为 54 μg/叶重油的 IC50 为 61 μg/mL，而艾叶纯露对细胞的毒性作用较小且有一定的促增殖作以后续实验选择不大于 50 μg/mL 的药物浓度进行。

艾叶,轻油,炎性因子,重油

mL 的艾叶轻油、艾叶重油、艾叶纯露检测其对 RAW 264.7 细胞 IL-1β、IL-6 和 TNF-α mRNA 表达量的影响的影响。如图3.3-1，当加入艾叶轻油后，IL-1β、IL-6 和 TNF-α的 mRNA 表达量均显著性下降。当艾叶轻油浓度为 12.5 μg/mL 和 25 μg/mL 时 L-1β、IL-6 和 TNF-α的表达量均被明显抑制，与阳性对照药物地塞米松的抗炎效果相近甚至优于地塞米松组。如图 3.3-2，当加入艾叶重油，当浓度为 25 μg/mL IL-1β、IL-6 和 TNF-α的 mRNA 表达量明显下降。但是当艾叶重油浓度低于 25 μg/mL 时，L-1β、IL-6 和 TNF-α的表达量抑制不明显。如图 3.3-3，当加入艾叶纯露， IL-1β、IL-6 和 TNF-α的 mRNA 表达量虽然受到抑制，但是抑制效果不明显，效果不如阳性对照药物地塞米松组。图 3.3 艾叶轻油对 RAW 264.7 细胞炎性因子 IL-1β、IL-

【参考文献】