龟板提取物靶向Notch信号通路抗帕金森病的分子机制研究
发布时间：2020-08-26 09:22
【摘要】：目的:帕金森病是一种中老年人常见的神经系统退行性疾病,其病理特征为黑质致密区多巴胺能神经元变性缺失和路易小体形成,导致纹状体多巴胺不足,基底节神经调节功能紊乱,临床主要表现为静止性震颤、肌强直、运动迟缓和姿势不稳等症状。目前对帕金森病的治疗只能缓解临床症状,不能根治或延缓其病情自然发展。NSCs是一种终生具有自我更新能力的细胞,在特定条件诱导下,能够向特定类型神经元或神经胶质细胞分化,正常成年哺乳类动物脑内保留有NSCs。内源性NSCs如能被特异性地诱导分化成为多巴胺神经元以替代变性缺失的神经元,将为帕金森病的治疗带来新的希望。Notch信号通路可以抑制NSCs向神经元分化,促进NSCs向放射状胶质细胞分化,显示Notch信号通路是调控NSCs分化的重要途径。龟板作为中医补肾法的重要药物,其水煎液已被研究证实对帕金森病具有治疗作用,其提取物对诱导NSCs定向分化为多巴胺能神经元具有重要的调节作用。但龟板对NSCs分化的调节作用,是否靶向Notch信号通路,目前仍不明确。因此,本课题拟探讨龟板水煎液对帕金森病的治疗作用与Notch通路的相关性,阐明Notch通路在龟板提取物促NSCs向多巴胺神经元分化中的调控机制,为中医补肾法在帕金森病治疗中提供新思路。方法:1.龟板水煎液对PD模型大鼠的治疗作用用6-OHDA注射法建立PD大鼠模型,分组为:正常组、假手术组、PD模型组、阳性药物组、龟板水煎液低剂量组、龟板水煎液高剂量组,采用HE染色法从形态学上观察PD模型大鼠病理形态学上的变化;免疫组化观察龟板水煎液对 PD 模型大鼠中α-synuclein、TH、Notch1 的作用;Western-blot 法检测α-synuclein、TH、Notch1的蛋白表达水平;qRT-PCR法检测TH的mRNA表达。2.龟板提取物对NSCs分化过程中Notch通路分子表达的影响从孕14天SD大鼠取原代NSCs培养,采用免疫荧光染色法鉴定NSCs的多向分化能力。先用浓度为30μg/ml的龟板提取物PTE(2B)、十八酸乙酯(S6)和4-甾酮(S9)刺激NSCs分化5天,采用免疫荧光染色法检测TH和Notchl的表达。再分别用三个不同浓度的2B、S6和S9对NSCs分化刺激7天,采用Western-blot法检测TH和Notch1的蛋白表达水平。3.龟板提取物对转染Hes1-siRNA后Notch信号通路分子表达的影响培养P19细胞,转染Hes1-siRNA,用不同浓度的2B、S6和S9对其刺激7天,采用Western-blot法检测TH和NF200的蛋白表达水平。结果:1.PD模型组黑质路易小体表达增多,龟板水煎液组表达减少,纹状体没有显著差异;PD模型组黑质和纹状体中的TH表达减少,α-synuclein和Notch1表达增多;龟板水煎液低、高剂量组的TH表达增多,且量效关系明显,α-synuclein和Notch1表达减少。2.刺激NSCs分化5天后,30μg/ml的2B、S6和S9组的TH表达均升高,Notch1表达均减少;刺激NSCs分化7天后,各浓度2B、S6和S9组的TH蛋白表达均有不同程度增多,均以中剂量组(30μg/ml)较为显著;2B组和S9组的Notch1蛋白表达均有不同程度的减少,而S6组的Notch1蛋白表达则有所增多。3.转染Hes1-siRNA后,各浓度的2B、S6和S9组的TH和NF200蛋白表达升高,其中S6量效关系明显,S9随浓度加大而TH和NF200表达降低。结论:1.龟板水煎液对PD模型大鼠有治疗作用,能减轻黑质路易小体的表达,减少脑组织内原有多巴胺神经元的缺失,量效关系明显,这可能是通过抑制Notch1的表达实现的。2.龟板提取物(2B、S6、S9)可能通过抑制Notch1或Hes1促进NSCs向多巴胺神经元分化。
【学位授予单位】：广州中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
【图文】：
逦广州中医药大学２０１７届硕士学位论文逦逡逑路易小体是帕金森病脑内主要的特征性病理标志物，也是其诊断的重要依逡逑据，位于神经元胞质中，显微镜下为圆形粉红色均质状结构，中央呈致密核心，逡逑周围有细丝状晕圈［７１］。ＨＥ染色后显微镜下观察，ＰＤ模型组脑黑质和纹状体中均逡逑可见数量不等的路易小体，表明ＰＤ大鼠模型造模成功。在脑黑质切片中，与ＰＤ逡逑模型组相比，阳性药物组、龟板水煎液低剂量组和龟板水煎液高剂量组的路易小逡逑体表达均显著减少（户＜０．０１）；而在纹状体切片中，各组路易小体的表达没有逡逑显著差异。逡逑？
Ａ脑炓质逦Ｂ纹状体逡逑图１－１邋ＰＤ模型组脑黑质和纹状体中的路易小体（ＨＥ染色）（Ｘ邋１０００）逡逑＊邋？；邋■邋Ｈ邋＾逡逑＃逦＼逦＾逦、“逡逑？‘逦．邋＃逦％逡逑＊邋＼邋＾邋．＊逡逑＇邋？逦ｔ邋＊邋ｒ，邋＇逦．．逡逑阳性药物组逡逑？邋？，逦？／邋，Ｖ：、逡逑＜逦＇邋ａ邋ｆｔ逦．．逦－ｒ／．逡逑p海危浚义希缅危垮义希掊澹掊澹颍у澹湾澹浚у澹у澹垮义希咤澹危保跺义希海觯骸觯垮危骸鲥澹诲澹掊我铮浚㈠义希茫у澹В垮危ВВ郑蝈危蓿郑皱危颍В掊危А觥觯蹋掊澹簦澹
本文编号：2804996
【学位授予单位】：广州中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
【图文】：
逦广州中医药大学２０１７届硕士学位论文逦逡逑路易小体是帕金森病脑内主要的特征性病理标志物，也是其诊断的重要依逡逑据，位于神经元胞质中，显微镜下为圆形粉红色均质状结构，中央呈致密核心，逡逑周围有细丝状晕圈［７１］。ＨＥ染色后显微镜下观察，ＰＤ模型组脑黑质和纹状体中均逡逑可见数量不等的路易小体，表明ＰＤ大鼠模型造模成功。在脑黑质切片中，与ＰＤ逡逑模型组相比，阳性药物组、龟板水煎液低剂量组和龟板水煎液高剂量组的路易小逡逑体表达均显著减少（户＜０．０１）；而在纹状体切片中，各组路易小体的表达没有逡逑显著差异。逡逑？
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