山枝子茎叶水提物对小鼠化学性和药物性急性肝损伤保护作用的研究

发布时间：2020-08-26 17:51

【摘要】：目的:研究山枝子茎叶水提取物(SZZJYA)对小鼠化学性和药物性急性肝损伤的作用及可能机制。方法:(1)SZZJYA对四氯化碳(CCl_4)致小鼠急性肝损伤保护作用:采用CCl_4腹腔注射(i.p.)小鼠,建立化学性急性肝损伤模型。把昆明种小鼠随机分为6组,每组10只,即正常对照组(NC)、模型对照组(MC)、阳性对照组(联苯双酯,DDB)、SZZJYA高剂量组(SZZJYA_H)、SZZJYA中剂量组(SZZJYA_M)、SZZJYA低剂量组(SZZJYA_L)。SZZJYA各剂量组和阳性对照组分别给予SZZJYA(5.00、2.50、1.25g/kg)和DDB(150mg/kg),其余2组给予花生油经口灌胃(i.g.),每天1次,连续7天。末次给药1h后,除NC组外,其余五组用0.18%CCl_4花生油溶液(0.18%CCl_4,0.018ml/kg)对小鼠进行腹腔注射,诱导急性肝损伤模型。20h后采集小鼠的血清及肝组织并称重,测定肝脏系数、脾脏系数、胸腺系数;检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBIL)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、白球比(A/G);检测肝组织中丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力;HE染色观察肝组织的病理形态改变;免疫组化法检测肝组织中PCNA蛋白表达量。(2)SZZJYA对D-氨基半乳糖(D-GalN)致小鼠急性肝损伤保护作用:采用D-GalN腹腔注射小鼠,建立化学性急性肝损伤模型。把昆明种小鼠随机分为6组,每组10只,即NC组、模型组、阳性对照组(DDB)、SZZJYA_H组、SZZJYA_M组、SZZJYA_L组。NC组和模型组采用生理盐水(NS)经口灌胃,其余四组给予相应药物进行干预,每天灌胃1次,连续7天。末次给药1h后,除NC组外,其余五组用D-GalN溶液(700mg/kg)对小鼠进行腹腔注射,诱导急性肝损伤模型。20h后采集小鼠的血清及肝组织并称重,测定肝脏、脾脏、胸腺的系数;检测血清中ALT、AST、ALP、TBIL、TP、ALB、GLB、A/G;检测肝组织中MDA、GSH含量和SOD、GSH-PX活力;HE染色观察肝组织病理形态改变;免疫组化法检测肝组织中Bax和Bcl-2蛋白表达量。(2)SZZJYA对对乙酰氨基酚(APAP)致小鼠急性肝损伤保护作用:采用APAP腹腔注射小鼠,建立药物性急性肝损伤模型。把昆明种小鼠随机分为6组,每组10只,即正常对照组、APAP模型组、阳性对照组(DDB)、SZZJYA_H组、SZZJYA_M组、SZZJYA_L组。正常对照组和模型组采用生理盐水(NS)经口灌胃,其余四组给予相应药物进行干预,每天灌胃1次,连续7天。末次给药1h后,除正常对照组外,其余五组用APAP溶液(120mg/kg)对小鼠进行腹腔注射,诱导急性肝损伤模型。20h后采集小鼠血清及肝组织并称重,测定肝脏、脾脏、胸腺的系数;检测血清中ALT、AST、ALP、TBIL、TP、ALB、GLB、A/G;检测肝组织中MDA、GSH含量和SOD、GSH-PX活力;HE染色观察肝组织病理形态改变;免疫组化法检测肝组织中TNF-α和iNOS蛋白表达量。结果:(1)CCl_4诱导的化学性急性肝损伤中,与模型组相比,SZZJYA各剂量组均能增加小鼠体重,降低肝脏、脾脏、胸腺的系数(P0.01或P0.05),其中SZZJYA中、高剂量组能显著降低肝脏系数、脾脏系数和胸腺系数(P0.01);SZZJYA各剂量组均能降低血清中ALT、AST、ALP的活性和TBIL含量,提高TP、ALB、GLB含量和A/G比值(P0.01或P0.05),其中SZZJYA中、高剂量能显著的降低AST、ALP活性(P0.01);SZZJYA各剂量组能不同程度升高SOD、GSH-PX活力和GSH含量,同时降低MDA含量(P0.01或P0.05),其中SZZJYA中、高剂量组的效果最显著(P0.01);在光学显微镜下观察,SZZJYA各剂量组均能不同程度的减轻小鼠肝脏损伤(P0.01或P0.05);免疫组化图像分析结果显示,SZZJYA各剂量组均能显著上调PCNA蛋白表达量(P0.01)。(2)D-GalN诱导的化学性急性肝损伤中,与模型组相比,SZZJYA各剂量组及均能显著增加小鼠体重,降低肝脏、脾脏、胸腺的系数(P0.01);SZZJYA各剂量组均能不同程度降低小鼠血清中ALT、AST、ALP活性和TBIL含量,提高TP、ALB、GLB含量和A/G比值(P0.01或P0.05),其中SZZJYA的中、高剂量能显著的降低ALP活性和TBIL含量,并升高A/G比值(P0.01);SZZJYA的中、高剂量组均能显著提高肝组织中GSH的含量,降低MDA含量(P0.01);光学显微镜下观察,SZZJYA各剂量组均能不同程度的减轻小鼠肝脏损伤(P0.01或P0.05);免疫组化图像分析结果显示,SZZJYA各剂量组均能显著上调Bcl-2和下调Bax的蛋白表达量(P0.01)。(3)APAP诱导的药物性急性肝损伤中,与模型组相比,SZZJYA各剂量组均能不同程度的增加小鼠体重,降低肝脏、脾脏、胸腺系数(P0.01或P0.05),其中SZZJYA的中、高剂量对小鼠体重、肝脏系数、胸腺系数效果最明显(P0.01);SZZJYA各剂量组均能降低小鼠血清中ALT、AST、ALP活性和TBIL含量,同时升高TP、ALB、GLB含量和A/G比值(P0.01或P0.05),其中SZZJYA中、高剂量效果最好;SZZJYA各剂量均能不同程度提高肝组织中GSH含量和SOD、GSH-PX活力,降低肝组织中MDA含量(P0.01或P0.05)。光学显微镜下观察,SZZJYA各剂量组均能不同程度的减轻小鼠肝脏损伤(P0.01或P0.05)。免疫组织化学结果得出SZZJYA各剂量组均能显著降低TNF-α和i NOS的蛋白表达量(P0.01)。结论:(1)SZZJYA对CCl_4诱导的化学性急性肝损伤小鼠具有一定保护作用,其机制可能与抑制脂质过氧化、清除氧自由基有关;(2)SZZJYA对D-GalN诱导的化学性急性肝损伤小鼠有一定保护作用,其机制可能与修复蛋白和DNA合成功能、抑制细胞凋亡有关;(3)SZZJYA对APAP诱导的药物性急性肝损伤小鼠有一定保护作用,其机制可能抑制促炎因子过表达,修复肝细胞的再生功能有关。
【学位授予单位】：广西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
【图文】：

急性肝损伤

图 1-1 SZZJYA 对 CCl4致急性肝损伤小鼠体重的影响(-x±s，n=10)：与正常对照组比较，△P<0.05，△△P<0.01；与CCl4模型组比较，*P<0.05，**P<0.

急性肝损伤

图 1-2 SZZJYA 对 CCl4致急性肝损伤小鼠肝脏系数的影响(-x±s，n=10)注：与正常对照组比较，△P<0.05，△△P<0.01；与 CCl4模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

急性肝损伤,胸腺

11图 1-3 SZZJYA对 CCl4致急性肝损伤小鼠脾脏系数和胸腺系数的影响(-x±s，n=10)注：与正常对照组比较，△P<0.05，△△P<0.01；与 CCl4模型组比较，*P<0.05，**P<0.

【参考文献】