复方淫羊藿制剂对NCI-H460细胞裸鼠移植瘤的抑制作用和对免疫低下小鼠的作用研究

发布时间：2020-09-03 07:19

　　目的:通过体内裸鼠移植瘤试验和免疫低下小鼠试验研究,探究复方淫羊藿制剂(Compound of epimedium preparation,CEP)对人肺癌细胞和对免疫低下小鼠的作用。方法:1、建立NCI-H460肺癌细胞裸鼠移植瘤模型,按模型组,环磷酰胺(CTX)阳性组,CEP高中低剂量组进行分组(各5只)。另取5只未接种细胞的裸鼠作为空白组,空白组和模型组灌胃等体积的蒸馏水,CTX组以0.025 g/kg的剂量腹腔注射,CEP组分别以生药量浓度9.6 g/kg、4.8 g/kg、2.4 g/kg的剂量灌胃。阳性组隔天给药一次,其他组每天一次,持续给药13天;在给药期间,隔天测量一次瘤体积,停药次日,先将裸鼠称重,测量移植瘤体积,再处死裸鼠,剥离瘤体待用;2、ELISA法测裸鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的含量;羟胺法测定肿瘤组织中超氧化物歧化酶(SOD)含量;硫代巴比妥酸法测定肿瘤组织中丙二醛(MDA)的含量;3、HE染色法观察各组瘤组织的病理形态学变化;免疫组化法观察CEP对裸鼠h植瘤瘤组织中Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2、p53蛋白表达的影响;4、采用RT-PCR检测CEP对裸鼠移植瘤组织中的Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2、p53以及VEGF基因表达的影响。5、建立小鼠免疫低下模型,按模型组,CEP高中低剂量组进行分组(各8只)。另取8只正常小鼠作为空白对照组,空白对照组和模型组灌胃等体积的蒸馏水,CEP组分别以生药量浓度9.6 g/kg、4.8 g/kg、2.4 g/kg的剂量灌胃,每天给药一次,持续给药两周;6、分别测定各组小鼠的肝脏指数、脾脏指数等,通过碳廓清试验来检测小鼠的单核-巨噬细胞功能,通过足趾增厚法来检测试验小鼠的迟发型变态反应能力,以及通过溶血素测定来检测试验小鼠的体液免疫功能;7、测定试验小鼠血清的免疫球蛋白(IgG)的含量;ELISA法测小鼠血清中白细胞介素-2(IL-2)和γ-干扰素(IFN-γ)的含量。结果:1、成功建立NCI-H460肺癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型,成瘤率100%。2、CTX组和CEP高、中剂量组裸鼠移植瘤的体积和瘤重均明显比模型组小(p0.05或p0.01);CTX组和高中低3个剂量的CEP组的抑瘤率分别达到59.77%、58.12%、48.21%、40.56%。3、CTX组和CEP各给药组荷瘤裸鼠血清中的TNF-α含量显著比模型组高(p0.05或p0.01),IL-6水平明显比模型组高(p0.01)。4、各给药组的瘤组织中MDA含量与模型组相比显著降低(p0.01或p0.05);SOD活力比模型组显著增高(p0.05或p0.01)。5、免疫组化结果显示:相比模型组,CTX组和CEP高、中剂量组均能明显提高瘤组织中的Caspase-3、Caspase-9、Bax蛋白的表达(p0.01),且能能明显降低Bcl-2蛋白在瘤组织中的表达(p0.05或p0.01),并且存在剂量依赖型关系;CTX组的p53蛋白表达量较模型组有显著的提高(p0.01),CEP各给药组与模型组相比均没有明显差异(p0.05)。6、RT-PCR结果显示:CTX组和CEP高、中剂量组的Caspase-3基因、Caspase-9、Bax基因的表达较模型组均有明显上调(p0.05或p0.01),并且对Bcl-2、VEGF的表达具有明显下调的作用(p0.05或p0.01)。低剂量组p53、VEGF基因的表达量较模型组有明显的下调(p0.05或p0.01)。7、CEP低剂量组对小鼠免疫器官指数、迟发性变态反应、单核-巨噬细胞功能、血清溶血素水平和细胞因子的作用无明显影响;中剂量组对小鼠的迟发性变态反应和血清溶血素水平有明显影响(p0.01或p0.05);高剂量组对小鼠免疫器官指数、迟发性变态反应、单核-巨噬细胞功能、血清溶血素水平均有显著影响(p0.05或p0.01),也可以显著提高免疫低下小鼠的IgG、IL-2水平(p0.05或p0.01)。结论:CEP能抑制NCI-H460细胞裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与清除自由基、提高TNF-α和IL-6的分泌、并通过上调Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白及基因的表达,下调Bcl-2和VEGF的表达来诱导肿瘤细胞凋亡。CEP具有提高免疫低下小鼠免疫力的作用,其抗肿瘤作用可能与诱导肿瘤细胞凋亡和提高机体免疫功能有关。
【学位单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

裸鼠,皮下部,裸小鼠,裸鼠移植瘤

复方淫羊藿制剂对 NCI-H460 细胞裸鼠移植瘤的抑制作用和对免瘤模型建立的情况右后肢皮下部位，即接种 NCI-H460 细胞悬液的在第 4 天后看到结节状。在第 10 天时，用游标，通过肿瘤体积计算公式： V=ab2/2（a 为长只裸小鼠的瘤体积约为 90-120 mm3左右，成瘤鼠的观察情况各组裸鼠状态正常。给药后，与模型组相比，行为活动均无明显异常，瘤体生长相对缓慢。模型组小。裸鼠生长及瘤体情况见图 1-1。

生长曲线,裸鼠移植瘤,生长曲线,体重

4.8 151.67±170.39 1566.06±897.180.75±02.4 109.03±63.13 1663.37±803.99 0.86±0模型组比较，*p < 0.05，**p < 0.01。Note:*p < 0.05 or**p 表 1-5 CEP 对裸鼠体重的影响（ x ± s，n = 5）Tab.1-5 Effects of CEP upon weight of nude mice（ x ± s，剂量（g/kg）体重（g）给药前给组 — 22.55±0.92 23.3组 — 21.35±1.05 20.76 组 0.025 21.39±1.18 19.88组 9.6 20.39±1.26#19.28组 4.8 21.72±1.25 21.3组 2.4 20.14±1.52##19.05模型组比较，*p < 0.05，**p < 0.01；与空白组比较，#p < p < 0.05 or**p < 0.01 vs model group,#p < 0.05 or##p < 0.0

裸鼠移植瘤,给药,血清

24图 1-4 CEP 对裸鼠移植瘤体积的影响Fig.1-4 Effects of CEP on tumor volume in nude mice模型组比较，*p < 0.05，**p < 0.01。Note:*p < 0.05 or**p < 0.0荷瘤裸鼠血清IL-6、TNF-α含量的影响 1-6 得出，与模型组相比，各给药组荷瘤裸鼠血清，其中除了 CEP 低剂量组的提高不具有显著差异性均具有显著差异性（p < 0.01）。各给药组荷瘤裸鼠血比模型组高（p < 0.05 或 p < 0.01）。 CEP 对裸鼠血清响分别见图 1-5 以及图 1-6。

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