龙血竭羟丙基-β-环糊精包合物温敏凝胶的制备与评价

发布时间：2020-09-03 19:14

　　目的:制备龙血竭羟丙基-β-环糊精包合物(HP-β-CD)温敏凝胶,并对其进行体外评价建立质量标准草案,考察其对实验大鼠宫颈柱状上皮异位模型的影响。方法:(1)采用HPLC法测定龙血竭药材、龙血竭HP-β-CD、龙血竭HP-β-CD温敏凝胶中龙血素A、B的含量。(2)采用水溶液搅拌法制备包合物,以包合率和包合物收率为评价指标,结合正交试验法,以包合时间、包合温度及主客分子质量比为影响因素,优选龙血竭HP-β-CD的制备工艺,通过紫外扫描(UV)、差示扫描量热法(DSC)、薄层色谱法(TLC)以及水溶性对包合物进行鉴定和评价。(3)采用冷溶法制备龙血竭HP-β-CD包合物温敏凝胶,以试管倒置法测定胶凝温度及胶凝时间,以胶凝温度和胶凝时间为评价指标,筛选基质种类及用量,优选龙血竭HP-β-CD温敏凝胶的制备工艺,并进行小试工艺的验证。(4)采用TLC法对龙血竭HP-β-CD温敏凝胶中的龙血竭进行鉴别,采用HPLC法测定其中龙血素A、B的量,并对其胶凝温度、胶凝时间、粘度、pH值、密度、体外释放度进行考察。(5)以Eckstein刺激性评价标准为指标,进行龙血竭HP-β-CD包合物温敏凝胶对大鼠阴道刺激性的考察;采用阴道灌洗法对龙血竭HP-β-CD包合物温敏凝胶在大鼠阴道内滞留时间进行考察;对宫颈柱状上皮异位大鼠动物模型的建立方法进行考察;以阴道外观、阴道病理形态学、子宫组织切片图和子宫解剖图为综合指标,考察龙血竭HP-β-CD包合物温敏凝胶对宫颈柱状上皮异位大鼠动物模型的影响。结果:(1)龙血素A、B在275nm处均有最大吸收;线性关系考察中,龙血素A、B的峰面积均与进样量有良好的线性关系,其线性范围分别为16.5~198.0μg/ml、15.0~180.0μg/ml,回归方程分别为y_a=18.335x-13.171(r=0.99915)、y_b=15.662x-9.1581(r=0.99915),三种供试品龙血素A、B的回收率均合格(龙血竭药材为99.2%,99.0%;龙血竭HP-β-CD为100.9%,100.2%;龙血竭HP-β-CD温敏凝胶为100.7%,101.9%)。(2)龙血竭HP-β-CD包合物制备的最佳条件:包合时间2h,包合温度40℃,龙血竭与HP-β-CD质量比为1:10,紫外扫描、差示扫描量热法的结果均得出龙血竭与HP-β-CD形成了包合物,且水溶性显著高于龙血竭药材的水溶性。(3)龙血竭HP-β-CD温敏凝胶最佳成型条件:32%P407、4%P188和0.2%HPMC加适量水,搅匀,于4℃条件下放置24h使溶胀,搅拌使溶解,加入40%包合物,搅拌均匀,再加入0.05%尼伯金乙酯,5%甘油,搅匀,于105℃下杀菌30min,即得;小试工艺稳定,重复性好。(4)所得温敏凝胶液均匀细腻,为深红棕色;龙血素A、B的平均含量分别为0.241mg/g和0.253mg/g;TLC法可鉴别出龙血竭;胶凝温度稳定在34±1.0℃范围内;胶凝时间为93~111s;胶凝后粘度均在20000mPa?s以上;pH值为4.48~4.57;密度为1.1195~1.1267mg/g;以水为释放介质,4h时体外释放为81.4%~89.8%。(5)龙血竭HP-β-CD温敏凝胶对大鼠阴道的刺激性评价结果与生理盐水相似;在大鼠阴道内的滞留时间大于4h;14天后,中剂量组(0.2ml/只/天)对宫颈柱状上皮异位大鼠动物模型的治疗结果评分(评分越低,疗效越好)远低于模型组和阳性对照组。结论:所建立的龙血素A、B分析方法准确可靠;龙血竭HP-β-CD包合物及其温敏凝胶的制备工艺稳定可靠,重复性好;体外评价中建立了质量标准草案;对宫颈柱状上皮异位大鼠动物模型有治疗效果,中剂量(0.2ml/只/天)时治疗效果最佳。
【学位单位】：云南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R283.6
【部分图文】：

龙血素A,系统适应性,理论塔板数,含量测定

龙血素 A 龙血素 B图 1-1 龙血素 A、B 紫外吸收光谱图色谱条件[5]: 使用 Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm )色谱柱；乙腈 1 %冰醋酸（ 38 : 62 ）为流动相；采用检测波长 275 nm；供试品进样量为 10μL；流速为 1.3 mL/min；柱温为 40℃。结果表明，系统适应性良好，结果见表 1-1。理论塔板数以龙血素 A 计算不低于 6000。表 1-1 系统适应性试验结果名称成分（龙血素 A/B）理论塔板数分离度对称因子对照品A 16384 2.4 0.99B 16639 2.3 0.98供试品药材含量测定A 16023 2.8 0.97B 15394 2.6 0.96包合物含量测定A 15203 2.4 0.96B 15394 2.7 0.99

龙血素A,龙血素B,线性,范围

图 1-3 龙血素 A、龙血素 B 线性与范围2.7 仪器精密度试验精密取龙血素 A、B 的对照品溶液（第一章 2.6 项下混合对照品溶液中，龙血素 A 对照品浓度为 66.0μg/ml，龙血素 B 对照品浓度为 60.0μg/ml），按第一章“2.4”项下色谱条件测定峰面积，连续测 6 次，结果表明，龙血素 A、B 峰面积的RSD 值均小于 2%，仪器精密度合格。结果见表 1-3。表 1-3 精密度试验结果序号 1 2 3 4 5 6RSD（%）龙血素峰面积（mAU*s）A 1158 1174.3 1163.6 1165.8 1159.4 1173.6 0.59B 988.9 1003.5 996.8 1005.6 993.7 999.5 0.62

紫外扫描,图谱,龙血竭,包合物

1.包合物；2.HP-β-CD；3.物理混合物；4.龙血竭图 2-1 紫外扫描图谱由紫外扫描图谱可知，包合物在 285nm 左右有一个吸收峰，HP-β-CD、物理混合物、龙血竭在 285nm 处没有吸收峰，故表明龙血竭与 HP-β-CD 形成了新的物相。2.3.2 差示扫描量热法（DSC）精密称取 HP-β-CD、龙血竭 HP-β-CD 的物理混合物、龙血竭 HP-β-CD 包合物、龙血竭粉末四个样品各 5mg 进行差示扫描热分析：氧化铝为参比物，量程为±100μV，升温范围为 30～350℃，升温速率为 10℃/min，得 DSC 图谱，结果如图 2-2。

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