丁郁柿蒂汤干预延迟性CINV对SP及NK-1受体表达的影响研究

发布时间：2020-09-04 21:06

　　目的化疗后恶心、呕吐作为化疗药物带来的主要副作用之一,是临床面临的高发难题。其中临床上对延迟性化疗后呕吐(Delayed Chemotherapy-induced Nausea and Vomiting,CINV)的控制最为不足。目前现代医学对其未有有效的根治方法。这严重影响了患者的治疗积极性及基础生理体质。中医治疗恶心呕吐的方剂很多,但是延迟性CINV由于其本身的特殊性,在临床中使用一般药物较难治疗。本研究结合延迟性CINV患者“肝郁”的基础生理体质及中医辨证治疗恶心呕吐的基本治法,运用含有丁香和郁金这对相畏药物、针对延迟性CINV“肝郁脾虚”基本病机的丁郁柿蒂汤,研究丁郁柿蒂汤对延迟性CINV的治疗效果。并通过检测丁郁柿蒂汤对延迟性CINV模型大鼠P物质(Substance P,SP)及NK-1受体表达的影响,研究丁郁柿蒂汤对延迟性CINV的干预机制。对挖掘中药相畏理论及进一步开发中药的配伍应用和指导临床具有现实的指导意义。方法SPF级雄性Wistar大鼠48只,于实验前先置于实验室适应性饲养一周。除空白组外均采用慢性束缚法复制肝郁型大鼠模型。肝郁造模完成后,去除体重不合格之大鼠。再通过统计学完全随机分组法分组,将实验大鼠分为6组,每组6只大鼠,分别为:空白组、模型组、阿瑞匹坦组、丁香柿蒂汤组、郁金组、丁郁柿蒂汤组。将大鼠高岭土适应性饲养3天后,腹腔注射顺铂6mg/kg复制延迟性CINV大鼠模型,于造模前1小时分别给药灌胃治疗并于第一次灌胃后每12小时灌胃一次。丁香柿蒂汤组、郁金组组、丁郁柿蒂汤组灌胃治疗药物剂量分别为7.3、4.9、12.2g·kg~(-1)·d~(-1);阿瑞匹坦组第一天灌胃治疗药物剂量为0.0114g·kg~(-1)·d~(-1),第二、三天给药剂量为0.007g·kg~(-1)·d~(-1)。于延迟性CINV造模后每12小时称量计算一次高岭土食用量。在延迟性CINV造模72小时后取下腔静脉血及回肠和延髓组织,运用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测P物质含量,运用实时荧光定量PCR法(Real-time qPCR)检测组织PPTA和NK-1受体mRNA表达。结果(1)动物模型成功的指标评判结果:1%蔗糖水偏好实验结果:模型组与郁金组蔗糖水偏好度较其余组低,结果具有统计学意义(P0.01);与空白组相比,模型组大鼠高岭土食用量升高(P0.01)。(2)丁郁柿蒂汤治疗作用的结果:与模型组相比,丁香柿蒂汤组、阿瑞匹坦组、丁郁柿蒂汤组高岭土摄食量总体呈降低状态(P0.01,P0.05),丁郁柿蒂汤组高岭土摄食量降低尤为显著(P0.01,P0.05)。郁金组大鼠高岭土食用量开始与模型组相近(不具有统计学意义),后升高(P0.05),在注射顺铂注射液36小时后降低(P0.01)。(3)Elisa法检测血清、回肠、延髓中SP含量:与空白组相比,模型组血清、回肠、延髓中SP均明显升高(P0.01)。与模型组相比,阿瑞匹坦组、丁香柿蒂汤组、丁郁柿蒂汤组血清、回肠、延髓中SP均降低(P0.05、P0.01),其中丁郁柿蒂汤组SP的降低最为显著。郁金组大鼠SP在血清、回肠中表达量较高,与空白组具有显著统计学意义(P0.01),与模型组无统计学意义;在延髓中表达量减少,与模型组相比具有统计学意义(P0.05)。(4)RT-qPCR法检测回肠、延髓中前速激肽原A(Preprotachykinin A,PPTA)mRNA表达:与空白组相比,模型组PPTA mRNA表达明显升高(P0.01);与模型组相比,阿瑞匹坦组、丁香柿蒂汤组、丁郁柿蒂汤组回肠、延髓中PPTA mRNA表达均降低(P0.05、P0.01),其中丁郁柿蒂汤组降低最为显著(P0.01)。郁金组,在回肠PPTA mRNA表达升高,与模型组相似,差异无统计学意义;在延髓PPTA mRNA表达降低,与阿瑞匹坦组、丁香柿蒂汤组相近,与模型组比,差异具有显著统计学意义(P0.01)。(5)RT-qPCR法检测回肠、延髓中神经激肽-1受体(natural killer cell-1 receptor,NK-1)mRNA表达:在回肠、延髓,与空白组相比,模型组NK-1受体mRNA表达明显升高(P0.01);与模型组相比,阿瑞匹坦组、丁香柿蒂汤组、丁郁柿蒂汤组NK-1受体mRNA表达均降低(P0.05、P0.01),其中丁郁柿蒂汤组NK-1受体mRNA表达的降低最为显著(P0.01)。郁金组,在回肠NK-1受体mRNA表达升高,与空白组比差异具有显著统计学意义(P0.01),与模型组比差异无统计学意义;在延髓NK-1受体表达明显降低,与空白组相比差异无统计学意义,与模型组比差异具有显著统计学意义(P0.01)。结论(1)综合慢性束缚法与腹腔注射顺铂注射液成功建立肝郁脾虚延迟性CINV模型。(2)丁郁柿蒂汤干预延迟性CINV具有减毒增效的功能。丁郁柿蒂汤用于治疗肝郁脾虚证型呕吐疗效显著。(3)丁郁柿蒂汤干预延迟性CINV的分子机制与SP及其受体NK-1相关。丁郁柿蒂汤通过降低SP合成前体PPTA mRNA的表达、SP含量与NK-1受体mRNA的表达抑制化疗后恶心呕吐。
【学位单位】：甘肃中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

糖水,偏爱度,大鼠,高岭土

图 1 糖水偏嗜实验各组大鼠糖水偏爱度4.3 各组大鼠的高岭土摄食量（见表 2-3，图 2）高岭土适应期第三天（-24-0h），与空白组相比各组大鼠高岭土摄食量均稍增高（P<0.01）。腹腔注射顺铂注射液（即延迟性 CINV 造模）后 0-24h，与空白相比，模型组大鼠高岭土摄食量明显升高，差异具有显著统计学意义（P<0.01）与模型组相比，丁香柿蒂汤组、丁郁柿蒂汤组高岭土摄食量均降低（P<0.01），瑞匹坦组高岭土摄食量处于增高状态，在 12-24 小时中此增高差异与模型组相比有统计学意义（P<0.01），郁金组不具有统计学差异。腹腔注射顺铂注射液后 24-36与模型组相比，阿瑞匹坦组大鼠高岭土摄食量降低最为显著（P<0.01），郁金组鼠高岭土摄食量明显增高（P<0.05）。腹腔注射顺铂注射液后 36-48h，郁金组大高岭土摄食量明显降低，与模型组相比具有显著统计学意义（P<0.01）。腹腔注顺铂注射液后 48-72h，与空白组相比，模型组大鼠高岭土摄食量明显升高（P<0.01

△型,高岭土,顺铂,大鼠

组 1.011±0.080△△ 1.171±0.371△△型组 1.251±0.070**3.131±0.072**2.596±0.082**2.058±0坦组 1.303 ±0.071**2.760±0.063**△△ 3.206±0.070**△△0.751±0蒂汤组 1.246±0.071**2.511±0.108**△△ 1.246±0.062**△△1.500±0组 1.258±0.049**2.970 ±0.082**2.413±0.776*2.846±0蒂汤组 1.303±0.071**1.861 ±0.083*△△ 1.243±0.069**△△1.251±0别 36-48h 48-60h 60-72h 0-7组 0.345±0.079△△ 0.130±0.050△△0.124±0.010△△ 0.500±0型组 1.258±0.163**1.151±0.089**1.135±0.066**1.888±0坦组 0.623±0.037**△△0.748±0.057**△△ 0.751±0.033**△△1.474±0蒂汤组 0.748±0.034**△△0.745±0.068**△△ 0.498±0.057**△△1.206±0组 0.623±0.008**△△0.622 ±0.041**△△ 0.750±0.057**△△1.665±0蒂汤组 0.713±0.077**△△0.617±0.020**△△ 0.374±0.009**△△1.010±0注：与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与顺铂模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。

延髓,统计学意义,郁金,空白

低（P<0.05、P<0.01），其中丁郁柿蒂汤组 SP 的降低最为显著。郁金组大鼠血清、回肠中表达量较高，与空白组具有显著统计学意义（P<0.01），与模型统计学意义；在延髓中表达量减少，与模型组相比具有统计学意义（P<0.05）表 4 各组大鼠血清、回肠、延髓 SP 的表达 ( x s，n=6）ng/mL组别血清 SP 回肠 SP延髓 SP空白组 0.100±0.007△△ 1.471±0.166△△ 0.787 0.064△△顺铂模型组 0.203±0.009**2.496±0.213**1.799±0.217**阿瑞匹坦组 0.157±0.004**△△1.676±0.113△△ 1.276±0.037**△丁香柿蒂汤组 0.172±0.012**△2.018±0.191**△△1.344±0.077**△郁金组 0.203±0.003**2.248±0.185**1.302 ±0.025**△丁郁柿蒂汤组 0.152±0.003**△△1.630±0.142△△ 1.058 ±0.055**△：与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与顺铂模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。

【参考文献】