基于细胞焦亡机制探讨肾脑复元汤对缺糖缺氧PC12细胞的保护作用

发布时间：2020-09-04 19:57

　　 目的:本研究通过采用细胞培养、形态学检查及染色、生化检测和Western Blot等技术手段,观察肾脑复元汤(ShenNaoFuYuan decoction,SNFYD)含药血清对缺糖缺氧(Oxygen-Glucose Deprivation,OGD)PC12细胞的保护作用,及其对NLRP3/Caspase-1、IL-1β/IL18焦亡通路相关细胞因子表达的影响,并以此探讨肾脑复元汤通过抑制焦亡、减轻损伤以保护PC12细胞的可能机制,为其应用于缺血性中风治疗提供实验依据。方法:1、肾脑复元汤含药血清制备:取SD大鼠灌服肾脑复元汤,连续3天,采集腹主动脉血液,离心分离血清,灭活后冻存备用。2、PC12的培养与模型建立:PC12细胞株为购入成品,使用含10%FBS及1%双抗的DMEM-HG完全培养液进行培养,根据检测的指标与实验目的,予接种至相应孔板。种板后待细胞贴壁,对数生长时,予更换无糖培养液,并置于三气培养箱中,温度37℃,通以95%N2-5%CO2进行培养。OGD时间为4小时,再换回原培养条件,恢复糖、氧供应,并根据分组进行药物处理。3、肾脑复元汤含药血清培养液对PC12干预:OGD后的细胞设三组,SNFYD组为实验组,使用含10%肾脑复元汤含药血清的完全培养基进行培养;阴性对照组为空白血清组,使用10%空白大鼠血清加入完全培养基进行干预;阳性对照组选择NLRP3抑制剂INF39为干预药物,以1μM浓度加入完全培养基进行培养。4、检测相关数据:各组细胞于倒置显微镜下观察形态,AO/EB染色后荧光显微镜下检测凋亡程度,CCK8法检测活性、Western blot法检测焦亡通路NLRP3/Caspase-1—IL-1β/IL18细胞因子的表达情况。结果:OGD造模后,PC12损伤明显,焦亡通路的各细胞因子明显升高,使用肾脑复元汤含药血清及INF39干预受损的PC12细胞后,PC12细胞形态、活性均见好转,相应地NLRP3/Caspase-1焦亡通路激活减弱,表明该通路的抑制与细胞状态的好转有相关性,而肾脑复元汤与INF39均能抑制该通路的激活。提示肾脑复元汤可能通过抑制NLRP3/Caspase-1及下游焦亡通路,减少神经细胞炎性凋亡,从而保护神经组织,达到治疗脑梗塞的目的。结论:肾脑复元汤含药血清对缺氧缺糖PC12细胞模型有保护作用,这一作用可能与抑制焦亡有关,NLRP3/Caspase-1及下游的IL-18、IL-1β细胞因子可能是抑制焦亡的关键靶点。
【学位单位】：湖南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R285.5

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本文编号：2812515