川芎嗪对慢性低灌注脑损伤小鼠的神经保护作用及机制研究

发布时间：2020-09-04 19:56

　　 目的:本研究采用单侧颈总动脉永久性结扎方法建立慢性低灌注脑损伤(chronic cerebral hypoperfusion,CCH)动物模型,观察川芎嗪对慢性低灌注脑损伤的改善效果,并寻找川芎嗪改善慢性低灌注脑损伤的机制,旨在为川芎及其提取物川芎嗪临床治疗脑缺血疾病提供理论及实验依据。方法:将健康的C57BL/6雄性小鼠60只,随机分为四组,即假手术组、模型组、川芎嗪组、阳性药组,每组15只。采用单侧颈总动脉永久性结扎复制慢性低灌注脑损伤小鼠模型。走横木实验检测小鼠运动能力;Morris水迷宫实验检测小鼠认知功能;HE染色及尼氏小体染色法观察小鼠皮质区神经元基本病理形态学变化;免疫组化法检测小鼠皮质区HIF-1α、VEGF、VEGFR-2的表达。结果:1.小鼠行为学测试结果(1)走横木实验结果显示,模型组小鼠与假手术组相比,滑足次数增加、潜伏期、整体运动时间延长(均为P0.01)。与模型组相比,川芎嗪组小鼠滑足次数显著减少(P0.01),潜伏期、整体运动时间缩短,两组之间比较差异有统计学意义(均为P0.05)。说明慢性低灌注脑损伤造成了小鼠精细运动障碍,经川芎嗪治疗后,相对改善了小鼠的运动障碍,提高了小鼠的运动能力。(2)Morris水迷宫实验结果显示,模型组小鼠与假手术组相比,逃避潜伏期明显变长,两组之间比较差异有统计学意义(P0.01),说明模型组小鼠认知功能明显下降。川芎嗪组与模型组相比,逃避潜伏期缩短,两组之间比较差异有统计学意义(P0.01),提示川芎嗪组可显著提高小鼠学习记忆能力,改善认知功能障碍。2.HE及尼氏染色结果(1)HE染色结果显示,假手术组小鼠脑皮质区神经细胞排列整齐,胞体较大,胞膜完整。模型组小鼠神经元排列紊乱,出现较多核固缩。与模型组相比,川芎嗪组神经元缺失及神经元排列紊乱情况均减轻。(2)尼氏染色结果显示,假手术组小鼠皮质区神经元尼氏小体丰富,模型组小鼠神经元尼氏小体明显减少(P0.01)。川芎嗪组与模型组相比,神经元内尼氏小体明显增多(P0.01)。3.免疫组化结果免疫组化结果显示,与假手术组相比,模型组小鼠HIF-1α、VEGF、VEGFR-2蛋白表达均有明显增加(均为P0.01)。与模型组相比,川芎嗪组可显著上调HIF-1α、VEGF、VEGFR-2 蛋白的表达(P0.01)。结论:1.川芎嗪具有改善慢性低灌注脑损伤小鼠运动功能的作用。2.川芎嗪具有改善慢性低灌注脑损伤小鼠认知功能的作用。3.川芎嗪可减轻慢性低灌注脑损伤小鼠缺血后的神经损伤。4.川芎嗪可激活HIF-1α-VEGF-VEGFR-2通路,促进血管新生,改善缺血区血流供应,对神经元起保护作用。综上所述,川芎嗪通过上调HIF-1α、VEGF、VEGFR-2蛋白的表达,激活HIF-1α-VEGF-VEGFR-2通路,改善因缺血造成的神经细胞损伤,进而改善慢性低灌注脑损伤小鼠学习记忆功能。
【学位单位】：黑龙江中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

图２各组小鼠滑足次数、起始区时间（潜伏期）以及整体运动时间逡逑Ｍｏｄｅｌ邋（模型组）、ＴＭＰ邋（川弯嗪组）、Ｏｚａｇｒｅｌ邋（奥扎格雷钠组）、Ｓｈａｍ邋（假手术组）。逡逑Ａ：各组小鼠起始区时间（潜伏期）Ｂ：滑足次数Ｃ：整体运动时间逡逑与假手术组比较，＾＜０．０１，与模型组比较，ｔｃｏ．ｏｓ，邋＊＊Ｐ＜０．０ｌ。逡逑

灌注脑损伤小鼠的学习能力降低。川芎嗪组与模型组相比，潜伏期明显缩短，两组之间逡逑相比较有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。以上结果说明川芎嗪可以减少慢性低灌注脑损伤小鼠逡逑Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫逃避潜伏期，改善小鼠学习记忆能力，详细数据见表１、图３。逡逑（２）逦Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫空间探索实验：模型组与假手术组相比，穿越有效区域次数少，内逡逑环滞留时间短（Ｐ＜０．０１），提示慢性低灌注脑损伤小鼠的学习能力降低。与模型组相比，逡逑川芎嗪组穿越有效区域次数多（Ｐ＜０．０５）内环滞留时间长（b6＜０．０１）。以上结果提示川逡逑芎嗪可以增加慢性低灌注脑损伤小鼠Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫穿越有效区域次数及内环滞留时间逡逑百分比，改善小鼠认知功能，见图４。逡逑逦表１各组小鼠逃避潜伏期逦逡逑组别逦数量逦第一天逦第二天逦第三天逦第四天逦第五天逡逑Ｓｈａｍ逦１３逦４９．４９±２．５２逦４７．５±９．０２逦４３．５３±１０．５３逦３８．５９±４．３７逦２９．８５±７．４２逡逑Ｍｏｄｅｌ逦１３逦５９．７８±０．３９逦５８．０４±１４．１８逦５７．１５±３．５５逦５３．８７±３．４１逦５２．１１±９．７９＃＃逡逑ＴＭＰ逦１５逦５５．８６±５．９０逦５３．４２±９．０４逦４５．４２±１６．７８逦４２．６８±７．５７逦３８．６１±５．１２＊＊逡逑Ｑｚａｇｒｅｌ逦１３逦５２．０９±１３．３８逦４７．７３士４．９１逦４４．１８±６．８４逦４１．８５士８．２２逦３１．Ｕ５．ＱＱ逡逑注：Ｓｈａｍ邋（假手术组）、Ｍｏｄｅｌ邋（模型组）、Ｏｚａｇｒｅｌ邋（奥扎格雷钠组）、ＴＭＰ邋（川号嗪组）。逡逑与假手术组比较

川芎嗪组穿越有效区域次数多（Ｐ＜０．０５）内环滞留时间长（b6＜０．０１）。以上结果提示川逡逑芎嗪可以增加慢性低灌注脑损伤小鼠Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫穿越有效区域次数及内环滞留时间逡逑百分比，改善小鼠认知功能，见图４。逡逑逦表１各组小鼠逃避潜伏期逦逡逑组别逦数量逦第一天逦第二天逦第三天逦第四天逦第五天逡逑Ｓｈａｍ逦１３逦４９．４９±２．５２逦４７．５±９．０２逦４３．５３±１０．５３逦３８．５９±４．３７逦２９．８５±７．４２逡逑Ｍｏｄｅｌ逦１３逦５９．７８±０．３９逦５８．０４±１４．１８逦５７．１５±３．５５逦５３．８７±３．４１逦５２．１１±９．７９＃＃逡逑ＴＭＰ逦１５逦５５．８６±５．９０逦５３．４２±９．０４逦４５．４２±１６．７８逦４２．６８±７．５７逦３８．６１±５．１２＊＊逡逑Ｑｚａｇｒｅｌ逦１３逦５２．０９±１３．３８逦４７．７３士４．９１逦４４．１８±６．８４逦４１．８５士８．２２逦３１．Ｕ５．ＱＱ逡逑注：Ｓｈａｍ邋（假手术组）、Ｍｏｄｅｌ邋（模型组）、Ｏｚａｇｒｅｌ邋（奥扎格雷钠组）、ＴＭＰ邋（川号嗪组）。逡逑与假手术组比较，与模型组比较，＊＊Ｐ＜0．0１。逡逑７０ｎ逡逑－？－Ｓｈａｍ逡逑一邋６０－邋匕邋逦逦邋

【参考文献】

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本文编号：2812513