不同基原党参异性分析和甜度评价方法构建

发布时间：2020-09-09 20:41

　　目的:对不同基原党参的性状以及显微结构进行鉴定并比较基原间的差异性;对不同基原党参90%甲醇提取物的主要化学成分进行分析鉴定并比较基原间的差异性;对不同基原党参游离糖提取物的成分进行分析鉴定并比较基原间的差异性;测定不同基原党参游离糖提取液甜度并采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术作为佐证,构建新的甜度检测方法,并对不同基原党参差异性进行比较。方法:采用随机抽样法选取不同基原党参样品,观察形态、颜色、质地、断面等性状,用皮尺和游标卡尺测量长度和直径,显微检测样品处理方式为芦头下1 cm处横切,取0.5 cm厚的材料,鲜品直接用FAA固定液固定,干品用10%甘油液软化后,FAA固定液固定。常规石蜡制片法连续切片,每隔5片取一片,每批共取7片,厚度为10~15μm,番红-固绿染色,中性树胶封片,拍照固定后,测定木质部、韧皮部和根半径长(测量数n=10个),导管口径、导管壁厚度(n=50个),通过Spss 18.0软件分析不同基原党参组织结构差异性;超声法制备不同基原党参90%甲醇提取物,采用Agilent Poroshell 120 EC C18色谱柱,检测波长为254 nm,以甲醇-0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱,柱温为25℃,流速为0.7 m L/min,进样量为10μL的色谱条件,Agilent电喷雾-四级杆-飞行时间串联质谱仪(1290 Series型高效液相色谱系统),电喷雾离子源(ESI),采用正、负两种离子化模式检测,干燥气的体积流量6.8 L/min,干燥气温度325℃,雾化气压0.8 Bar,正离子模式下,毛细管电压4.5 k V,负离子模式下,毛细管电压4.0 k V,碎裂电压130 V,扫描范围m/z 50~1500进行检测,对各色谱峰进行归属;采用震荡提取从不同基原党参中提取多种低聚糖化合物,低聚游离糖成分经乙酰化后采用VF-23ms(30 m×0.25 mm×0.25μm)毛细管柱,以高纯氦为载气,采取1.0 ml/min柱流量;使用45:1的分流比,进样口温度为220℃,柱压为73.0 kpa,程序升温,采用电子轰击(EI)离子源,离子源温度220℃,接口温度250℃,质量扫描范围m/z 45~550为质谱条件对其游离糖成分进行分析;采用水提醇沉方法除去党参中多糖后提取党参单糖溶液,通过WYT-J手持糖量计检测30批次三个基原不同产地党参样品的甜度差异性,并以VF-23ms(30m×0.25 mm×0.25μm)毛细管柱,以高纯氦为载气,采取1.0 ml/min柱流量;使用45:1的分流比,进样口温度为220℃,柱压为73.0 kpa,程序升温,采用电子轰击(EI)离子源,离子源温度220℃,接口温度250℃,质量扫描范围m/z45~550为质谱条件对其游离糖成分进行分析。结果:通过观测性状及显微结构,发现不同基原和年限的党参横切面差异主要体现在木栓细胞列数、石细胞数量、韧皮部外层裂隙程度、韧皮部、木质部占根横切面比例存在差异性;通过二级高分辨质谱分析结合相关文献,在三个基原党参中共鉴定出38种化学成分的结构,所有三个基原党参药材中均含有包括苯丙苷类、生物碱类、氨基酸类等在内的26种共有化学成分,党参相较于素花党参,在共同的28种成分的基础上,多含有5种特异性化学成分;党参相较于川党参,有32种共有成分,党参具有包括2-Nonenoic acid,Coronaric acid在内的2种特异性化学成分,川党参具有包括5-Ally-2-hydroxy-3-methoxy benzaldehyde,Geniposide等在内的5种特异性化学成分;利用优化后的方法对24批次三个基原不同产地的党参样品进行分析,鉴别出三个基原党参含包括山梨糖、半乳糖、葡萄糖、D-甘露糖、果糖、肌醇、蔗糖等在内的七种游离糖成分,各基原党参的游离糖含量存在差异性;利用优化后的方法对样品进行分析,确认各基原党参甜度存在差异性,并与它们的游离糖含量存在相关性。结论:研究发现各基原党参组织结构存在差异性,为不同基原党参的鉴别提供了参考依据;UPLC-Q-TOF-MS/MS可以在保留时间、紫外吸收光谱、精确相对分子质量、分子式和二级结构碎片等方面对各基原党参化学成分进行定性分析,为寻找党参中的活性物质以及比较不同基原党参化学成分的差异性提供一种快速准确的分析方法;GC-MS技术可以通过保留时间、分子式、结构碎片等方面对党参的游离糖成分进行定性、定量分析,为寻找党参中的游离糖成分以及比较不同基原党参游离糖成分的差异性提供一种快速准确的分析方法;优化了党参游离糖的提取条件,将客观指标与甜度联系,为党参的甜味检测提供一种客观可靠的评价方法并采取GC-MS技术对党参的低聚游离糖溶液进行检测分析,对党参低聚游离糖进行定性、定量分析,通过GC-MS检测游离糖成分、含量佐证糖量计所测甜度的客观性。
【学位单位】：湖南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R284
【部分图文】：

党参,不同产地,性状

图 1. 1 不同产地党参性状图甘肃渭源两年生党参(A)，甘肃省陇南地区哈达铺党参(B)，甘肃省福星镇党参(C)，甘肃省渭源党参鲜品(D)纹党：呈长圆柱形，2~3 分支，弯曲。表面黄棕色至灰棕色，“狮子盘头”明根头下环横纹多且密，达一半及以上。外表皮有纵纹和疏生横长皮孔样突起硬，断面有放射状纹理，外侧裂隙较多，皮部黄白色或黄棕色，木部黄色根的 1/2~2/3，气香，味甘甜，不化渣。见图 1.2(A)及图 1.2(B)。

党参,不同产地,性状

图 1. 2 不同产地素花党参性状图甘肃省文县纹党(A)，甘肃省文县多年生纹党(B)川党参：单支条状，稍弯曲。表面黄棕色至灰棕色，有较深略直的纵沟，根头下环横纹少或无，椭圆状皮孔纵向排列成直线，具纵沟，“狮子盘头”不明显。质硬，断面有放射状纹理，外侧裂隙较少，皮部黄白色，木部淡黄色，约占根的1/3；气微香，味微甜，化渣。见图 1.3(A)及图 1.3(B)。

川党参,不同产地,性状

断面有放射状纹理，外侧裂隙较多，皮部黄白色或黄棕色，木部黄色，约占根的 1/2~2/3，气香，味甘甜，不化渣。见图 1.2(A)及图 1.2(B)。图 1. 2 不同产地素花党参性状图甘肃省文县纹党(A)，甘肃省文县多年生纹党(B)川党参：单支条状，稍弯曲。表面黄棕色至灰棕色，有较深略直的纵沟，根头下环横纹少或无，椭圆状皮孔纵向排列成直线，具纵沟，“狮子盘头”不明显。质硬，断面有放射状纹理，外侧裂隙较少，皮部黄白色，木部淡黄色，约占根的1/3；气微香，味微甜，化渣。见图 1.3(A)及图 1.3(B)。A B

【参考文献】