天然本草中抗淀粉样蛋白聚集成分的筛选与挖掘

发布时间：2020-09-15 18:08

　　 蛋白质淀粉样疾病属于蛋白质错误折叠疾病,常见的淀粉样疾病包括阿尔茨海默症、二型糖尿病、可传播海绵状脑病、帕金森病等。由于蛋白质在形成其天然构象过程中发生错误折叠,导致淀粉样纤维沉积,诱发了诸如此类的疾病;因此这些疾病又可以统称为蛋白质构象疾病。不幸的是对该类疾病的治疗,目前仍无特效药物。有一种治疗方案是通过对蛋白质成纤维的各个阶段进行干涉或抑制,从而阻止或延缓蛋白寡聚物及纤维的形成,达到防控乃至治疗该类疾病的目的。前期研究表明,单黄酮如杨梅素、桑色素,能对鸡溶菌酶的成纤维过程产生抑制作用。一方面本研究基于这些单黄酮小分子的结构共性,进行扩大化研究,以发掘其衍生成分如穗花杉双黄酮是否具有相似功效。实验利用荧光检测结合计算机模拟对接等方法,发现穗花杉双黄酮同样能抑制鸡溶菌酶成纤维,但其抑制能力较单黄酮稍弱。另一方面,由于蛋白淀粉样纤维常在心脑血管、神经、肾脏等部位形成沉积,导致相关器官功能的衰退;基于我国中草药资源丰富的优势,可以从抗心脑血管疾病的药物中筛选对淀粉样蛋白成纤维有抑制作用的药物,并挖掘其中的有效抑制成分。本实验从众多中草药中选取了三七、山茱萸、丹参、红花、藏药绿萝花、雪茶、辣木籽作为原料,并以不同的方法对其中的天然产物进行提取。成纤维实验是以经典淀粉样蛋白模型鸡溶菌酶为研究对象,发现三七、绿萝花、雪茶等的提取物,均可有效抑制淀粉样纤维的形成,并呈现为剂量依赖性;其中以雪茶提取物的效果最佳。实验提及的不同提取方法中,又以雪茶水提物效果更好,其IC50值约为0.018mg/mL。应用液质联用技术,可大致确定雪茶水提物中有效成分的分子量;然而其结构的最终确定,仍有待进一步研究。抑菌实验结果表明,以水为溶剂的雪茶水提物储液,浓度高达5mg/mL时,不会对OD值为4时的重组菌产生明显的抑菌作用。细胞水平的实验中,选取能表达淀粉样蛋白突变体的毕赤酵母做为处理对象。结果表明,雪茶水提物能够具有浓度依赖性的抑制鸡胱抑素淀粉样突变体I66Q在胞外形成聚集体。当药物浓度达到1.5mg/mL时,会对蛋白的分泌产生一定的抑制作用,但药物具体的胞内作用机制仍有待探讨。综上,本研究基于前期研究发现的化合物结构共性,进行了主体结构和衍生结构化合物的初步筛选,发现化合物主体结构对其抑制成纤维能力至关重要;另一方面,在继续挖掘天然产物小分子的尝试中,我们鉴定出了几种能抗淀粉样蛋白成纤维的天然本草,其有效抑制成分的鉴定仍需要进一步的实验数据支撑。
【学位单位】：辽宁大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285
【部分图文】：

图 0-1 淀粉样纤维形成的历程果表明，导致淀粉样相关疾病的主要原因并 维 前 蛋 白 复 合 物 中 间 体 （ prefibrillar 义上叫做“寡聚体”。寡聚体有的是成纤维的

ThT荧光检测穗花杉双黄酮对溶菌酶成纤维的影响

图 1-2 ANS 荧光检测穗花杉双黄酮对鸡溶菌酶成纤维影响机模拟研究小分子与溶菌酶分子间的相互作用关材料用软件及其功能 Office：进行结构文件格式转换acs 4.5.0：分子动力学模拟Dock 4.2.5.1：蛋白质与小分子对接模拟Dock Tools 1.5.6：分子对接结果的可视化分析n8：数据分析和制图软件构文件的准备

【参考文献】

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本文编号：2819290